河南省教育厅自然科学基金(2011B180039)
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
- 相关作者：柯涛马向东牛秋红惠丰立贾春阳更多>>
- 相关机构：南阳师范学院湖北大学河南省南街村(集团)有限公司更多>>
- 发文基金：河南省教育厅自然科学基金河南省科技攻关计划河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 双酶法制备大豆肽工艺优化研究被引量：6
- 2016年
- 以大豆分离蛋白为原料,通过单因素试验研究蛋白液的浓度、水解的温度、水解时间、酶的加入量及pH等因素对大豆分离蛋白水解度的影响,确定适宜的范围值和因素组合。结果表明,大豆分离蛋白在蛋白液浓度8%,加酶底物比为2%,在55℃水解4 h,水解初始pH为9.0~10.0时水解率最高。水解后pH稳定在7左右。通过苦味值测定,结果表明,风味酶在50℃条件下,水解1 h,苦味值最低。液相色谱检测水解后肽的分子量主要分布在300 Da^1 000 Da范围。小于1 000 Da以下的肽占总量的80.3%,2 000 Da以下的肽含量占91.5%。
- 柯涛黄亚男庞振凌巩婷婷王曦李盘欣贾春阳郭金璐迟婷婷江雨黎文进
- 关键词：大豆分离蛋白碱性蛋白酶风味蛋白酶大豆肽
- 合成嗜热酸性淀粉酶的毕赤酵母表达被引量：3
- 2012年
- 把密码子优化后的超耐热酸性α-淀粉酶的基因BD5088,引入载体pPIC9K中,将正确构建的重组质粒pPIC9K-BD5088转化毕赤酵母GS115细胞,得到酵母工程菌株。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,重组超耐热酸性α-淀粉酶PrBD5088在甲醇酵母中大量表达并分泌到胞外。该酶受甲醇的严格调控和诱导,在诱导培养5 d后酶活力达到最大值,表达量可达到约200 mg/L。与原核表达产物ErBD5088相比,PrBD5088的酶学性质发生了一定的改变。其最适反应温度由80℃增加到90℃。最适反应pH值仍为pH5.6,但范围更宽,在pH值5.0～6.5之间,其相对酶活在90%以上,在pH4.0～8.0范围内酶活性保留50%以上。而ErBD5088则只在pH5.0～7.0范围内能维持活性的50%以上。且PrBD5088的温度稳定性远高于ErBD5088。PrBD5088在100℃条件下热处理1 h仍具有80%以上的酶活力,而ErBD5088相同条件下的半衰期只有20 min。此外,Ca2+和Zn2+对维持rBD5088活性和稳定性会产生轻微促进作用,该酶的这些优点使其非常适于在工业生产上应用。SDS-PAGE测得该酶的分子量为56 ku,高于原核表达的酶蛋白。重组α-淀粉酶PrBD5088不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象。本实验结果表明O-连接糖基化可适当提高PrBD5088的热稳定性、最适温度和酸性pH条件下酶活性。
- 柯涛熊蓝张乃群马向东惠丰立牛秋红杨果
- 关键词：THERMOCOCCUS密码子优化毕赤酵母GS115
- A154C/G155C双点突变对嗜热耐酸淀粉酶酶活性及热稳定性的影响被引量：3
- 2012年
- 利用重叠延伸法对嗜热球菌Thermococcus sp.的高温酸性α-淀粉酶基因BD5088进行体外A154C/G155C双点定点突变,通过原核表达载体pET30a构建表达载体pET-BD5088C2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,酶学性质分析表明,突变淀粉酶拓宽了反应pH值范围,尤其是酸性条件下提高更为显著。BD5088淀粉酶在100℃条件下酶活力半衰期约为22min,而突变酶酶活力半衰期40min,突变酶酶活力比BD5088淀粉酶提高近1倍。加热60min时,突变酶酶活力仍可维持原活力的40%,而BD5088淀粉酶只能维持20%左右。说明其热稳定性得到有效的提高。另外,突变酶在中温和90℃条件下酶活力有所提高,65℃时酶活力提高将近1倍。结果表明,BD5088淀粉酶的154、155位残基的突变为Cys对维持其热稳定性起到重要的作用,并且对其酶学性质有较大的影响,可能参与了二硫键的形成。
- 柯涛刘征杨建伟牛秋红惠丰立石晴芳马向东
- 关键词：定点突变热稳定性二硫键
