河南省教育厅自然科学基金(2011B180032)
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
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- 埃希菌催化合成阿糖鸟苷中间体阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷被引量：2
- 2014年
- 利用埃希菌(Escherichia sp.)AEM0812细胞催化阿糖尿苷和2,6-二氨基嘌呤合成阿糖鸟苷中间体阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷。通过优化反应条件,得到最适酶促反应条件为:在60 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中加入15%埃希菌AEM0812细胞及60 mmol/L阿糖尿苷和60 mmol/L 2,6-二氨基嘌呤,60℃反应48 h。在上述条件下,阿糖尿苷的转化率可达95.2%。
- 曹倩杨灵刘国生李金鑫邢善涛
- 关键词：埃希菌生物合成
- N离子束注入与DES复合诱变选育腺苷高产菌株被引量：5
- 2017年
- 为了获得腺苷高产菌株,以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD1206(Ade-、Thi-、SGr)为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)处理、N离子束注入进行单因子和复合诱变。参照菌种致死率曲线,确定N离子束注入250 s与DES处理10 min为最佳诱变时间。经过多轮诱变和筛选,获得了黄嘌呤、硫胺素、组氨酸三重缺陷型,腺嘌呤脱氨酶活性缺失及磺胺胍抗性菌株DI4-24和DI4-182,其遗传标记为Xan-、Thi-、His-、Deam-、SGr,连续传代后性状稳定,在优化的发酵培养基中发酵后腺苷产量可分别达到18.56 g/L和17.13 g/L。由此证明,通过物理、化学复合诱变,阻断枯草芽孢杆菌营养缺陷型菌株产肌苷途径,打通合成腺苷途径的诱变思路在实验室环境下是可行的。
- 刘国生李金鑫刘磊谷艳昌许航
- 关键词：腺苷离子束注入硫酸二乙酯复合诱变
- 固定化细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷被引量：3
- 2013年
- 采用聚乙烯醇、卡拉胶和聚丙烯酰胺为混合载体固定化埃希菌AEM0812细胞。以8.0%聚乙烯醇、1.0%卡拉胶和10%聚丙烯酰胺作为载体,菌体浓度为30%,在pH 7.0、含4.0%氯化钾的饱和硼酸溶液(成型剂)中处理36 h,得相对酶活力为98.17%且较稳定的颗粒型固定化细胞,用来催化转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷,在54℃、pH 6.5和缓冲液离子浓度120 mmol/L的最适条件下,阿糖尿苷的转化率为68%。固定化细胞连续5次反应的平均转化率约54.3%。
- 刘国生焦璐邢善涛张建璀曹倩
- 关键词：阿糖腺苷生物合成固定化细胞
- 铜绿假单胞菌催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷合成阿糖鸟苷被引量：2
- 2016年
- 利用铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)细胞催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷进行脱氨反应转化生成阿糖鸟苷。经优化得到的最适酶促反应条件为:在160 mmol/L磷酸盐缓冲液(p H 7.5)中加入13%铜绿假单胞菌TX16细胞和30 mmol/L阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷,反应温度60℃,反应120 h。在上述条件下,嘌呤核苷的转化率可达90.0%。
- 刘国生许航曹倩邢善涛黎梦
- 关键词：铜绿假单胞菌生物合成
- 高效液相色谱法测定酵母粉腺嘌呤含量被引量：1
- 2012年
- 目的建立高效液相色谱法测定酵母粉腺嘌呤的含量,为酵母粉质量评价奠定方法学基础。方法将酵母粉经过破壁处理后用高氯酸消解制备提取液,通过条件实验确定高效液相色谱法分离条件并测定腺嘌呤含量。结果采用Diamonsil C18柱,以0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.0)为流动相,流速为0.8 mL/min,可以将腺嘌呤与其它成分有效分离。采用121℃高温高压-SDS法进行酵母粉前处理能有效破壁和促进核酸物质的释放,腺嘌呤测定值更接近其实际含量。结论采用高温高压-SDS法制备酵母粉提取液、高效液相色谱测定腺嘌呤含量的方法简单易行、重现性好,测定结果可作为酵母粉质量评价的重要定量指标,对发酵生产有重要指导意义。
- 刘国生黄倩王玉娟纪龙翔王秀强
- 关键词：腺嘌呤酵母粉肌苷发酵高效液相色谱法
- 固定化细胞转化脱氧胸苷合成2'-脱氧腺苷被引量：3
- 2012年
- 目的选择最优的载体包埋固定化AEM0957细胞酶促催化脱氧胸苷和腺嘌呤合成脱氧腺苷。方法分别用琼脂、聚丙烯酰胺、明胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚乙烯醇等6种材料包埋固定细菌AEM0957细胞,以此为催化剂转化脱氧胸苷合成脱氧腺苷。结果通过优化反应条件,聚丙烯酰胺固定化细胞催化脱氧胸苷的转化率可达57%,高于游离细胞反应能力,并能多次重复使用,10次重复反应的转化率仍能够保持在32%左右。结论聚丙烯酰胺在稳定性、转化性能等方面优于其它材料,该研究为脱氧腺苷的工业化生产奠定了重要基础。
- 刘国生陈琳邢善涛王建琨焦璐魏聪
- 关键词：生物合成固定化细胞聚丙烯酰胺
- 肌苷发酵过程腺嘌呤含量变化规律被引量：3
- 2013年
- 通过高效液相色谱法测定肌苷发酵过程发酵液中胞外、胞内和总腺嘌呤含量。结果表明:发酵液总腺嘌呤含量在发酵过程中变化不大,影响肌苷产量的主要因素是培养基中酵母细胞内外腺嘌呤类物质的比例、胞外腺嘌呤含量。发酵培养基中的腺嘌呤类物质在灭菌后60%～70%释放到胞外,30%～40%仍留存在酵母菌体内。胞外腺嘌呤是发酵前期细菌增殖的基础,酵母细胞释放到胞外的腺嘌呤比例高则有利于菌体增殖和肌苷积累。酵母菌体内腺嘌呤是形成和维持发酵中后期腺嘌呤亚适量水平的关键。在本条件下腺嘌呤的亚适量水平为31.92mg/L。
- 刘国生王玉娟黄倩侯瑛曹倩谷艳昌
- 关键词：高效液相色谱腺嘌呤枯草杆菌肌苷发酵
- 用于阿糖鸟苷合成的腺苷脱氨酶在大肠埃希菌中的表达
- 2017年
- 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨合成阿糖鸟苷,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险。将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆至载体p ET-28a中,然后转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经过筛选获得工程菌E.coli(add)。经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测及酶活力测定,表明E.coli(add)能够表达大量腺苷脱氨酶,其产酶能力是含空载质粒的BL21(DE3)菌株E.coli(p ET-28a)的16.2倍。以E.coli(add)制备的粗酶液为催化剂,催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷发生脱氨反应得到产物阿糖鸟苷,转化率可达96.8%。
- 黎梦刘国生刘磊常利草邢善涛
- 关键词：铜绿假单胞菌腺苷脱氨酶基因表达
- 高效液相色谱法测定酵母粉中硫胺素被引量：2
- 2012年
- [目的]实现企业在肌苷发酵生产中对酵母粉原料质量的评价,为肌苷发酵的控制奠定重要的方法学基础。[方法]将酵母粉经过高温高压并用盐酸提取,通过试验确定高效液相色谱法分离条件并测定硫胺素含量。[结果]采用Hypersil BDS C18色谱柱,紫外检测波长为254 nm;以0.02 mol/L pH 3的磷酸盐缓冲液为流动相,流速1.0 ml/min对提取液进行色谱测定,可以将硫胺素与其他成分有效分离。用0.1 mol/L HCl悬浮后在超声清洗器中振荡10 min混合均匀,然后于121℃高温高压下30 min离心可将酵母粉中的硫胺素充分释放出来。[结论]采用高效液相色谱法测定酵母粉中硫胺素含量,该方法快速、准确,测定结果可做为评价酵母粉质量的指标,对肌苷发酵有重要指导意义。
- 纪龙翔黄倩张建璀赵章锁王玉娟刘国生
- 关键词：高效液相色谱硫胺素酵母粉肌苷发酵
- 甲烷氧化菌对煤吸附甲烷的氧化特性被引量：4
- 2014年
- 在煤样中加入甲烷氧化菌AEM1235菌悬液,充入CH4或CH4与O2的混合气体进行等温吸附实验以测定甲烷氧化菌对CH4的氧化能力.在两种充气条件下的吸附与脱吸附实验结果均显示出气体中CH4量显著减少和CO2增加的变化.在充气5.0 MPa、添加菌液量为18.75%条件下,充CH4气体、CH4与O2的混合气体时的CH4减少量分别可达其饱和吸附量的121.18%和244.39%,表明在高压、缺氧或充氧的条件下甲烷氧化菌对煤样中吸附的CH4均具有吸收和氧化的作用,这种作用随菌量增加或压力升高而加强,并且有O2存在可以促进甲烷氧化细菌对CH4的吸收和利用.该结果表明在地下煤层的高压和缺氧的条件下甲烷氧化细菌仍然具有较强的吸收和氧化煤层中结合态CH4的能力.
- 刘国生魏聪张瑞林蔡传辉任学钦
- 关键词：甲烷氧化菌甲烷氧化等温吸附
