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靶向治疗后肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的表达变化及意义被引量：5: 2011年; 目的观察肺癌患者靶向治疗前后外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+以及CD5+6细胞的表达变化,并探讨其意义。方法检测30肺腺癌患者治疗前、靶向治疗2个月后的外周血CD4+、CD8+、CD5+6细胞,并分析其表达与疗效的关系。20例健康志愿者作为对照组。结果对照组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+以及CD5+6分别为38.46%±5.71%、30.40%±5.57%、1.79±0.52、15.33%±3.91%;肺癌患者治疗前分别为24.46%±7.33%、44.32%±5.25%、0.98±0.29、17.66%±7.13%,靶向治疗后分别为37.76%±l1.21%、29.66%±9.62%、3.52±1.48、18.28%±10.37%。肺癌患者治疗前CD4+、CD4+/CD8+比对照组低,CD8+比对照组高,两组相比,P均<0.05;肺癌患者CD4+、CD4+/CD8+靶向治疗后比治疗前升高,CD8+靶向治疗后比治疗前下降,治疗前后相比,P均<0.05。结论靶向治疗可以改善肺癌患者免疫状态,观察外周血CD4+、CD8+表达变化,有助于评价靶向治疗的疗效。; 张金标郑航尤长宣罗荣城; 关键词：腺癌 T淋巴细胞亚群靶向治疗

沉默SOCS1基因对人树突状细胞生物学特征和功能的影响被引量：2: 2021年; 目的探讨沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因对人树突状细胞(hDC)生物学特征和功能的影响。方法实验分为RNA干扰组、阴性对照组和空白对照组。应用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默hDC的SOCS1基因表达,Western blot法检测基因沉默效果。采用系列细胞因子诱导DC成熟,流式细胞术检测分析各组DC细胞表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR、PD-L1的表达情况;ELISA法检测各组DC细胞培养上清中细胞因子白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)p70及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平。结果SOCS1基因shRNA干扰慢病毒(LV-shRNA-SOCS1)感染DC后,可有效下调DC中SOCS1表达水平;与空白对照组和阴性对照组相比,RNA干扰组DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的阳性表达率均显著增高(P<0.05),而PD-L1的阳性表达率显著下降(P<0.05);DC细胞培养上清中细胞因子IL-12 p70及TNF-α的分泌水平均显著增高(P<0.05),IL-10的分泌水平显著下降(P<0.05)。结论慢病毒介导的RNA干扰能够有效沉默hDC的SOCS1表达,从而促进DC的成熟和活化,有利于促进DC刺激Th1型免疫反应。; 宋浩杰宋琴施为建吕成伟; 关键词：树突状细胞慢病毒载体免疫调控

人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2012年; 目的构建人树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及Westernblot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。; 涂微阮健罗荣城吕成伟; 关键词：人树突状细胞 RNA干扰

基因修饰树突状细胞诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群重排的研究被引量：1: 2011年; 目的探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,前列腺特异性抗原(PSA)基因转染树突状细胞(DC)诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群变化特点及临床意义。方法抽取30例前列腺癌患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,以rAAV/PSA感染DC前体细胞,采用系列细胞因子诱导DC前体细胞成熟。第6天收集成熟DC并与T细胞按比例混合培养,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。分别于DC与T细胞混合培养前后应用流式细胞术分析外周血T细胞亚群及调节性T细胞(CD4+CD25+FoxP3+Treg)的表达水平。结果 PSA基因转染DC刺激T淋巴细胞爆发增殖,与培养前比较,混合培养6d后CD8+、CD8+CD69+、CD8+CD28+T细胞的比例和CD8+/CD4+比值均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);而CD8+CD28-T细胞和Treg细胞的比例均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。CD4+T细胞比例较前略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PSA基因转染DC能够有效地激活CD8+抗原特异性CTL,下调免疫抑制性T细胞,提高患者的细胞免疫功能,为前列腺癌的免疫治疗提供新的有效策略。; 宋浩杰涂小玉严晓尤长宣罗荣城吕成伟; 关键词：树突状细胞基因转染前列腺癌

非小细胞肺癌免疫治疗进展被引量：30: 2014年; 肺癌是全球范围内癌性死亡的首要因素,发病率、死亡率高,预后较差,急需开发一种新的高效低毒疗法。作为术后辅助或是姑息治疗手段,免疫治疗为非小细胞肺癌患者提供了一个新的治疗方向。免疫疗法作用机理各不相同,如免疫检测点受体抑制剂(抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体)、主动性免疫疫苗(L-BLP25脂质体疫苗、Belagenpumatucel-L疫苗、MAGE-A3蛋白疫苗)、过继性免疫疫苗(CIK细胞)等,研究表明免疫治疗非小细胞肺癌肿瘤缓解率较前提高,前景值得期待,II期/III期临床试验亦在进一步探索其临床应用价值。本文就当前非小细胞肺癌免疫疗法原理、临床试验、不良反应及待解决问题作一概述。; 何圆尤长宣; 关键词：肺肿瘤免疫治疗

rAAV/CEA转染树突状细胞制备肺癌疫苗被引量：2: 2014年; 目的探讨以改构腺相关病毒2型(AAV-2)为载体,将rAAV/CEA转染树突状细胞(Dendritic cell,DC)制备肺癌治疗性疫苗的可行性。方法取健康人外周血,分离获得贴壁的单个核细胞(Mo),以rAAV/CEA病毒转染,对照组以CEA多肽刺激,两组细胞均以重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC成熟。第7天收集DC,取DC与原始T细胞混合,诱导细胞毒性T细胞(CTL),[3H]-TdR掺入法检测DC刺激自体T细胞增殖能力;流式细胞仪分析CTL细胞中IL-4、IFN-γ、CD8、CD4、CD69、CD25的表达情况;取CEA阳性的肺癌细胞株A549为靶细胞,采用51Cr释放法检测CTL对该靶细胞的杀伤效率。结果 rAAV/CEA转染的DC疫苗可诱导特异性细胞免疫,具体表现在:⑧疫苗具备较强的刺激淋巴细胞增殖的能力,⑧诱导的CTL较高表达CD8、CD69和IFN-γ,⑧对CEA阳性的肺癌靶细胞产生较强杀伤活性,且此活性具有抗原特异性和MHC-I类限制性。结论以AAV为载体,rAAV/CEA基因转染DC可成功制备针对肺癌的治疗性疫苗。; 尤长宣钱晓涛何圆Yong LiuPaul L Hermonat; 关键词：腺相关病毒肺癌

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