国家科技重大专项(2011ZX10004-001)
- 作品数：63 被引量：341H指数：11
- 相关作者：熊衍文赵爱兰白向宁徐建国叶长芸更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所军事医学科学院中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 肠出血性大肠埃希菌感染人巨噬细胞产生白介素-1β水平的研究
- 2013年
- 目的通过构建EHEC O157∶H7野生株和突变株等不同菌株,来感染THP-1细胞,从而比较以上不同菌株的细胞毒和IL-1β等细胞因子的产生水平,同时比较使用有无胎牛血清(FBS)培养的THP-1对产生细胞因子水平的影响。方法将上述各菌株分别定量稀释于RPMI1640,5%FBS的细胞培养液中,在感染后2～10 h,用cytotox96试剂盒定量检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放。同时用Luminex和酶联免疫吸附试验试剂盒定量检测多种细胞因子的水平。结果 EHEC-O157∶H7-ehxA是THP-1细胞毒作用的主要贡献者,并可引起高水平IL-1β的产生;在OPT1-MEM无血清培养基中,野生型菌株和突变型之间IL-1β的产生差异则更加显著。结论 EHEC-O157∶H7-ehxA可诱导高水平IL-1β的产生,FBS能刺激细胞产生一定非特异性的IL-1β,这可能会导致高的背景和隐藏细胞株之间的真正差别。
- 王淑京程喻力熊衍文张晓嫒黄元铭任志鸿宋利琼
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌人巨噬细胞白介素-1Β
- 基于上转发光免疫层析技术快速检测单核细胞增生李斯特菌被引量：4
- 2014年
- 目的建立可快速检测单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）的上转发光免疫层析技术（up-converting phosphor technology based lateral flow assay,UPT-LF）,即LM-UPT-LF。方法针对LM特异的p60蛋白制备单克隆抗体,并与上转发光纳米颗粒（up-converting phosphor nanoparticles,UCP-NPs）共价偶联作为结合物,采用双抗体夹心免疫层析模式建立LM-UPT-LF,并对其敏感性与特异性进行评价。结果建立了可快速检测LM的LM-UPT-LF平台,在样本〈10 cfu、10~99 cfu、100~1000 cfu绝对LM污染量条件下可分别在培养20、18、16 h检出阳性。其他13种食源性致病菌在高浓度（109cfu/ml）时无非特异性交叉。结论所建立的LM-UPT-LF操作简便快速,具有良好的敏感性和特异性,适用于一线病原调查与检测。
- 刘旭李春凤王晓英冯娜杨瑞馥王成彬周蕾
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌
- 9种发热伴出疹病原体基因芯片检测方法的建立被引量：3
- 2017年
- 目的建立一种能同时、快速、准确地检测包括:麻疹病毒、风疹病毒、肠道病毒71型、水痘带状疱疹病毒、登革热病毒、人类小DNA病毒B19、柯萨奇病毒A16型、A组β型酿脓链球菌(溶血性链球菌)、伤寒沙门菌,9种发热伴出疹病原体的化学发光基因芯片的方法。方法根据9种病原体特异基因中的高度保守区序列设计引物与探针,进行多重不对称PCR扩增,将带有标记的扩增产物与带有特异性探针的芯片杂交,经洗涤、化学发光显色后进行结果分析。经多重PCR体系、杂交反应和化学发光检测条件的优化,评价该芯片的特异性、灵敏度和重复性。实时荧光PCR法与芯片法分别检测肠道病毒EV71梯度稀释的核酸,比较两种方法的灵敏度。结果共筛选出9对特异性扩增引物和11条特异性检测探针。该芯片具有良好的特异性、灵敏度和重复性。质粒参考品和体外转录RNA参考品的最低检测限为3×10~3拷贝/反应,芯片法的灵敏度为实时荧光PCR法的1/10。检测74例临床样本的灵敏度为95%,特异性为85.7%,总符合率为93.2%。结论建立了一种可同时检测9种发热伴出疹病原体的化学发光基因芯片的检测方法,为发热伴出疹的临床诊断和流行病学调查提供了一种高通量的筛查手段。
- 徐胜平刘琪琦张严峻王升启
- 关键词：多重PCR基因芯片化学发光法
- 人型支原体实时荧光聚合酶链反应检测方法的初步建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立一种快速、灵敏和特异的人型支原体实时荧光聚合酶链反应(real-time PCR)检测技术。方法依据人型支原体gap基因保守区域使用Beacon Designer 7.0软件设计引物和探针,建立人型支原体real-time PCR检测方法并优化。对优化后的方法进行实验室灵敏度、特异度和检测限评价,并与聚合酶链反应(PCR)进行比较。结果该real-time PCR对于人型支原体的检测限为50 cfu,PCR检测限为5×103cfu,其检测灵敏度为PCR的100倍。所建立的检测方法对其他10种常见支原体、12种泌尿生殖道感染病原菌染色体及人类染色体的扩增均为阴性。结论本研究建立的real-time PCR方法可灵敏、特异的检测人型支原体,有望用于临床标本检测。
- 张慧芳张建中赵飞
- 关键词：人型支原体实时荧光聚合酶链反应
- 应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法被引量：20
- 2012年
- 目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法。方法利用Primer Premier5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性。结果应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142 bp、293 bp、377 bp、630 bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5 000 PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105copies/μl、2.6×104copies/μl和1.37×104copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应。结论应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测。
- 徐焕洲平芮巾季汝武王琳杨鹏飞张丽萍岳启安胡孔新
- 关键词：多重RT-PCR日本脑炎病毒黄热病毒西尼罗病毒
- 非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析被引量：5
- 2013年
- 目的对国内不同宿主来源的非O157产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）分离株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析，以初步建立中国非O157STEC菌株的基础数据库，了解其分子流行病学特征。方法参照PulseNet非O157STEC的PFGE实验方法对76株非O157STEC分离株进行分析，并使用BioNumerics软件进行聚类。结果在PulseNet推荐的电泳参数和内切酶XbaI情况下，菌株酶切片段分布均匀，条带易于识别。76株非O157STEC分离株产生62种PFGE带型，初步聚类为A-M13个群，不同来源菌株的PFGE带型分布广泛，但均具有某些优势的PFGE聚类群。结论国内不同来源的非O157STEC呈高度多态性，PulseNet推荐的PFGE电泳参数和内切酶XbaI适用于中国非O157STEC菌株的分析。
- 金东赵爱兰白向宁孟琼于波袁雪娇熊衍文侯雪新李振军
- 关键词：脉冲场凝胶电泳分子分型
- 检测5种呼吸道病毒的PCR-array方法评价被引量：4
- 2016年
- 目的建立同时检测甲型流感病毒（INF-A）、乙型流感病毒（INF-B）、呼吸道合胞病毒A型（RSV-A）、呼吸道合胞病毒B型（RSV-B）、鼻病毒（HRV）5种常见呼吸道病毒的PCR-array方法,为快速检测呼吸道感染提供准确、有效的技术手段。方法构建阳性标准品评价PCR-array方法的扩增效率和最低检出限（LOD）,应用189份鼻咽拭子样本,与金标准比较,评价PCR-array方法的灵敏度和特异度。结果 PCR-array方法有较高的特异度,LOD可以达到10 copy/μl。PCR-array方法灵敏度为94.2%,特异度为96.0%,Kappa值为0.705-1.000。结论 PCR-array方法能够在2 h内同时检测INF-A、INF-B、RSV-A、RSV-B、HRV,且具有较高的灵敏度和特异度。
- 刘可可郑新李艳袁媛郑玉玲姜永强
- 关键词：呼吸道病毒实时荧光定量PCR
- 3例单增李斯特菌感染的病原学、临床及流行病学特征分析被引量：12
- 2015年
- 目的分析四川省自贡市2014年3例单增李斯特菌感染的临床特征及其病原学特征。方法搜集临床病例信息;采用血清分型,脉冲场凝胶电泳技术和多位点序列分型方法对单增李斯特菌进行分子分型。结果 3例患者均为免疫力低下人群,有发热和败血症症状;3株单增李斯特菌中2株为1/2a血清型、ST8型,1株为1/2b血清型、ST778型,3株PFGE带型均不同。结论免疫力低下人群易受单增李斯特菌侵袭性感染。通过与国内外食品及病人单增李斯特菌相关流行学资料比较,提示国外流行克隆群以及国内某些流行型菌株可引起国内李斯特菌病散发,甚至成为将来暴发的隐患。
- 王红王艳张正东陈曦邓建平肖波刘祥王斌文海范晖叶长芸李群
- 关键词：单增李斯特菌流行病学特征
- 16SrDNA序列分析在鉴定布鲁氏菌中的应用被引量：12
- 2013年
- 【目的】建立布鲁氏菌的16S rDNA序列分析方法,评价该方法鉴定布鲁氏菌的特异性和实用性。【方法】用PCR扩增布鲁氏菌的16S rDNA片段,将扩增的产物纯化后测序,从GenBank下载与布鲁氏菌易发生血清学交叉反应的细菌的16S rDNA序列。使用DNAMAN软件进16S rDNA序列相似性分析。【结果】在布鲁氏菌中16S rDNA核苷酸序列相似性达到了99.74%,而与其他有血清型交叉反应的菌株相比较,16S rDNA序列间有显著差异。【结论】16S rDNA序列分析是一种快速、简便、特异的鉴定布鲁氏菌的方法之一。
- 汤旭姜海赵鸿雁朴冬日田国忠张秋香崔步云王桂琴
- 关键词：布鲁氏菌RDNA
- 重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP的构建及其对UT-7/Epo细胞感染效率的检测被引量：1
- 2012年
- 目的构建携带报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,并且研究该病毒对人白血病细胞UT-7/Epo的感染效率及其在细胞中的复制。方法先通过分子克隆技术构建重组腺病毒质粒pAd5F11pTPEGFP,然后利用脂质体转染法,将其转染至HEK293细胞包装出重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,经酶切和PCR鉴定正确后,扩增并纯化得到滴度较高的重组腺病毒。以空载体病毒Ad5GFP作为对照,将纯化的重组腺病毒感染UT-7/Epo细胞,经流式细胞仪检测在不同感染复数(MOI)下荧光阳性细胞比例,即为Ad5F11pTPEGFP病毒对UT-7/Epo细胞的感染效率,同时将冻融后的重组腺病毒感染的UT-7/Epo细胞上清感染HEK293细胞,48 h后观察GFP在HEK293细胞中的表达。结果成功制备了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞的感染效率明显高于空载体对照病毒Ad5GFP,在MOI为200时,感染效率达98.2%,而空载体病毒在MOI为200时,对UT-7/Epo细胞的感染效率仅为29.7%。感染了重组腺病毒的UT-7/Epo细胞冻融上清感染新的HEK293细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞有较高的感染效率,并能在其中复制。
- 刘雪莉宋敬东郭小娟王敏曾茁壮洪涛
- 关键词：重组腺病毒端粒酶
