广东省科技计划工业攻关项目(2004B60301007)
- 作品数：4 被引量：32H指数：3
- 相关作者：张嘉宁黄世峰杨敏顾为望肖长虹更多>>
- 相关机构：南方医科大学佛山市第一人民医院南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人类风湿性关节炎B型滑膜细胞的分离、培养和纯化被引量：5
- 2007年
- 目的建立一种人类风湿性关节炎滑膜细胞的体外分离、培养和纯化方法。方法关节镜下钳取膝关节滑膜组织,采用组织块培养法和酶消化法分离滑膜细胞。经台盼蓝拒染计数,将细胞按3.2×106接种于培养瓶,传代培养。从形态学、光镜、细胞免疫化学、生长特性鉴定细胞类型。结果反复贴壁和多次消化达到形态学上的纯化要求,纯度达96%以上,活性率为98%,成纤维细胞经鼠抗人单克隆抗体染色阳性,符合B型滑膜细胞特征。结论本研究建立了简单易行的滑膜细胞分离、培养和纯化方法。为类风湿性关节炎致病机制的研究和治疗提供极有意义的体外细胞模型。
- 黄世峰肖长虹顾为望陈国强张嘉宁杨敏陈德超
- 关键词：类风湿性关节炎滑膜细胞体外培养模型
- 人类风湿性关节炎滑膜-软骨-NOD.scid小鼠嵌合体模型的建立被引量：3
- 2007年
- 目的:建立能反应自身免疫特点的类风湿性关节炎动物模型,为进一步研究该病发病机制奠定基础。方法:实验于2006-03/12在南方医科大学实验动物中心完成。①实验材料:SPF级2～4个月龄NOD.scid小鼠20只,体质量17～22g,雌雄各半;人类风湿性关节炎滑膜组织(佛山市第一人民医院风湿科提供,患者知情同意);骨关节炎滑膜及正常软骨(南方医院创伤骨科提供,患者及供者知情同意)。②实验分组:将小鼠随机分为2组,类风湿性关节炎滑膜组和骨关节炎滑膜组,雌雄不限,每组10只。③实验过程:每组小鼠背部皮下植入的正常软骨组织,随后将类风湿性关节炎滑膜和骨关节炎滑膜植入软骨之上。④造模10周后麻醉下处死小鼠,用放射免疫法检测血清中肿瘤坏死因子α含量,移植物进行组织病理学观察,并进行组织学积分。结果:①模型鼠一般情况:实验期间NOD.scid小鼠无手摸皮骨感、活动度差、毛稀疏等典型移植物抗宿主疾病表现,模型鼠在SPF环境下10周存活率100%。②肿瘤坏死因子α含量:类风湿性关节炎滑膜组鼠血清中肿瘤坏死因子α放射含量类风湿性关节炎组明显高于骨关节炎组[(0.80±0.06),(0.70±0.03)μg/L,t=4.466,P<0.001]。③组织病理学观察:苏木精-伊红染色,骨关节炎滑膜组只见少量的滑膜细胞增生和炎症细胞,移植的滑膜组织主要被纤维组织形成的条索状物代替,无明显地软骨被侵蚀破坏发生;类风湿性关节炎滑膜组可明显见到大量的滑膜细胞增生和生化中心形成,病变部位的组织结构间质变为疏松,变为境界不清晰的颗粒状或块状无结构强嗜酸性红染物质;软骨边缘被滑膜组织侵蚀破坏明显;类风湿性关节炎滑膜组滑膜增生、软骨侵蚀和软骨降解积分均高于骨关节炎滑膜组(P<0.04)。结论:在NOD.scid体内可成功建立类风湿性关节炎动物模型。
- 黄世峰肖长虹顾为望张嘉宁陈国强那顺杨敏
- 关键词：疾病模型
- 南蛇藤醇提物对类风湿关节炎滑膜增生和软骨侵蚀及降解的抑制作用被引量：19
- 2007年
- 目的观察南蛇藤醇提物对类风湿类关节炎(RA)滑膜组织增生和软骨侵蚀及降解的作用并探讨其机制,为RA的新药研究提供依据。方法将RA患者的关节滑膜和正常关节软骨移植到NOD/SCID小鼠体内建立人RA滑膜-软骨-NOD/SCID鼠嵌合体模型(NOD/SCID-HuRAg),4周后分别给予蒸馏水、南蛇藤醇提物(30mg/d)及来氟米特(500μg/d)灌胃,每日1次,持续4周。评价移植物中的滑膜增生、滑膜细胞对软骨的侵蚀和软骨细胞周围软骨降解的组织学积分,放免法检测血清TNF-α含量。原位杂交法观察滑膜的TNF-αmRNA表达,TUNEL法观察滑膜的细胞凋亡程度,自动图像分析系统分析结果。结果滑膜和软骨在SCID鼠体内生长良好,南蛇藤醇提物及来氟米特能显著降低滑膜增生(分别为2.00±0.76,2.25±0.89vs3.63±0.52)、软骨侵蚀(1.69±0.80,2.00±1.36vs3.75±0.53)和软骨降解(1.88±0.83,2.13±0.83vs3.63±0.74)的积分,并显著降低血清TNF-α含量(0.84±0.09,0.83±0.12vs0.99±0.11,ng/ml)。二种药物均显著增加了滑膜细胞的凋亡,南蛇藤醇提物还显著下调了滑膜组织中TNF-α的表达水平。结论南蛇藤醇提物能抑制SCID-HuRAg模型的滑膜增生,减轻滑膜的软骨侵蚀和软骨细胞介导的软骨降解,其作用的机制包括抑制RA滑膜组织的TNF-α的产生和促进滑膜细胞凋亡。南蛇藤醇提物的作用效果与来氟米特相似,但在抑制RA滑膜TNF-α表达方面南蛇藤醇提物强于来氟米特。
- 肖长虹顾为望张嘉宁陈国强黄世峰杨敏陈德超陈婕肖丹
- 关键词：类风湿关节炎滑膜软骨南蛇藤
- 兔关节滑膜细胞的分离、培养和纯化被引量：5
- 2006年
- 目的探讨兔关节滑膜细胞的体外分离、培养和纯化方法。方法无菌条件下,从6月龄新西兰白兔的膝关节囊内剪取滑膜组织,采用组织块培养法和酶消化法分离滑膜细胞。经台盼蓝拒染计数,将细胞按1×106接种于培养瓶,传代培养。结果经反复贴壁和多次消化达到形态学上的纯化要求,活性率为96%,纯度达95%以上,培养的细胞具有成纤维细胞形态和特征。结论本研究建立了简单易行的滑膜细胞分离、培养和纯化方法。
- 黄世峰肖长虹顾为望张嘉宁陈德超杨敏
- 关键词：关节滑膜细胞纯化
