国家重点基础研究发展计划(2011CB910603)
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
- 相关作者：钱小红应万涛马成王继峰彭博更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京工业大学北京理工大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 代谢光反应交联技术在生物大分子相互作用研究中的应用
- 2014年
- 具备光反应交联活性的苯甲酮基团、叠氮苯基团以及双吖丙啶基团被广泛应用于对糖、氨基酸等代谢底物的修饰。利用生物自身的代谢机制,引入带有光反应交联基团的底物类似物,可以实现生物大分子间相互作用的原位、实时研究,从而获得更为准确的相互作用复合物的信息。本文将综述代谢光反应交联技术在聚糖-蛋白质、蛋白质-蛋白质相互作用研究中的应用进展。
- 王明超应万涛钱小红
- 基于超滤辅助样品制备方法的优化被引量：1
- 2014年
- 目的:基于超滤辅助样品制备(FASP)方法的出现使得使用去污剂(如SDS)的蛋白质提取方法与溶液内酶切方法得以兼容,因此提高了难溶性蛋白的鉴定数量。然而,超滤膜的非特异性吸附作用依然会造成蛋白的损失。我们拟针对该方法存在的问题对其进行改进。方法:对FASP方法进行了蛋白酶切条件、洗脱液选择、洗脱次数的改进;为测试优化方法的有效性和适用范围,选择标准蛋白BSA、鼠肝和鼠脑等3种样品进行考察。结果:相比报道的FASP方法,采用改进后的FASP方法使BSA的回收率提高了20%;经高精度质谱检测,对鼠肝、鼠脑的蛋白质鉴定结果分别比采用未优化的FASP多鉴定到2086和3592条特异肽段。结论:通过对FASP方法的优化,蛋白鉴定数量得到较大提高,该方法为蛋白质组深度覆盖研究提供了可靠的技术手段。
- 马成张琪潘一廷覃培斌钱小红应万涛
- 等电聚焦预分离用于肝癌细胞分泌蛋白质组的分级与鉴定被引量：4
- 2013年
- 分泌蛋白质组(secretome)是指在特定的时空条件下,细胞、组织等分泌的全部蛋白质。分泌蛋白质组可能包含了大量的疾病诊断生物标志物,因此其相关研究越来越受到重视。分泌蛋白质组的组成高度复杂且浓度范围宽,这对分析方法提出了挑战。建立有效的蛋白质或肽段预分离策略,将有利于分泌蛋白质的高覆盖率鉴定。本研究以肝癌细胞系MHCC97L的无血清培养分泌蛋白质为研究对象,采用一种新型等电聚焦预分离(OFFGEL)系统,考察了肽段水平的分级对蛋白质鉴定结果的影响。结果表明,分离后各馏分中肽段的等电点分布与理论预测基本一致,每个馏分中单独鉴定的肽段比例接近80%,显示了该系统对肽段的高分辨分离能力。结合生物质谱技术,在肝癌细胞分泌系统中鉴定了2 995个蛋白质,显示了该系统在复杂体系蛋白质组研究中的应用潜力。
- 李贤煜赵新元应万涛钱小红
- 关键词：等电聚焦肝癌细胞
- 基于固相萃取的微量糖蛋白糖基化修饰表征技术的建立被引量：5
- 2012年
- 结合自制亲水固相萃取富集柱和生物质谱鉴定技术,实现了糖基化蛋白质核糖核酸酶B的糖含量测定、糖基化位点确认、聚糖富集及结构表征,以及不同糖型相对丰度分析。结果表明:其糖含量8.47%,糖基化位点为34位的Asn,糖链主要为5种高甘露糖型结构(Man5-9GlcNAc2)。所建立的HILIC富集技术,有利于针对微量生物样本,如生物工程药物糖蛋白及重要功能糖蛋白,开展位点特异性糖链结构解析,为糖蛋白质的药效或功能研究提供线索。
- 江静韩欢欢马成王继峰应万涛钱小红
- 关键词：糖蛋白基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
- 超支化聚合物新材料富集糖肽方法的研究被引量：2
- 2014年
- 目的:将自合成的超支化聚合物固定到氨基硅球上形成一种新型的糖肽富集材料,用于糖肽的高效分离与富集。方法:阴离子开环聚合法合成的超支化聚缩水甘油,经高碘酸氧化成为超支化聚甘油醛(hyperbranched polyglycerol-aldehydes,HPG-ALD)后固定于氨基硅球上,再用己二酸二酰肼修饰得到的酰肼材料应用于糖肽富集。结果:经扫描电镜(Scanning Electron Microscope,SEM)、热重分析(thermogravimetric analysis,TGA)等手段证明材料被成功合成。同时,使用制备成功的新材料来富集标准糖蛋白和糖肽都获得了良好的富集效果。结论:实验证明超支化缩水甘油酰肼材料(hyperpolymer-assisted hydrazide functionalized microspheres,HHMs)可用于低丰度糖蛋白/糖肽的富集。
- 邓珊珊王明超曹琦琛白海红彭博应万涛蔡耘
- 关键词：糖肽
- 利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型被引量：5
- 2013年
- 蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。
- 马成潘一廷张琪王继峰钱小红应万涛
- 关键词：反相色谱
- 一种基于聚酰胺-胺型树枝状聚合物富集糖肽的新策略
- 2014年
- 目的:提出了一种新型的糖肽富集试剂,将不同代数的含高密度N端的聚酰胺-胺(PAMAM)型树枝状聚合物固定到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上用于糖肽的高效分离。方法:先用标准糖蛋白对试剂的富集条件进行优化,包括是否使用还原剂、不同酸度的结合溶液、不同洗脱液、不同试剂比例,将优化后的方法用于鼠脑裂解液糖肽的富集。结果与结论:将优化的方法用于鼠脑糖肽的富集,用第6代PAMAM鉴定到的糖肽数目是采用商业化酰肼材料的3倍,该试剂对糖肽富集的高选择性和高重现性为糖蛋白组学研究提供了新的工具。
- 邓珊珊曹琦琛马成白海红任晓君应万涛蔡耘
- 关键词：树枝状聚合物糖肽
- 完整糖肽质谱解析的研究进展被引量：7
- 2014年
- 糖基化是一种普遍存在并且具有重要生物学功能的蛋白质翻译后修饰,与疾病发生、诊断、预后和治疗有密切的关系。基于生物质谱的糖蛋白质结构解析技术迅速发展,其中,将糖链与蛋白质分解开,分别进行糖基化位点的确认、肽段序列分析及糖链结构分析的技术已经趋于成熟。但对于涉及蛋白质与糖链之间连接方式的质谱解析却面临很多困难和挑战。本研究着重于位点特异性完整糖肽的质谱解析技术,确定了该领域的主要研究方向,从质谱技术的离子源、质量分析器、碎裂方式,以及质谱数据解析等方面对近年来完整糖肽的质谱分析技术的发展进行综述。
- 王继峰江静彭博钟儒刚应万涛钱小红
- 关键词：糖肽质谱
- 一种蛋白质质谱分析中快速胍基化新方法被引量：1
- 2011年
- 胍基化修饰在蛋白质组学鉴定及定量研究中发挥着重要的作用,本研究建立了一种蛋白质质谱分析中微波辅助快速胍基化的新方法。采用标准肽段系统地优化了反应溶剂pH值、O-甲基异脲的浓度及微波加热时间,发现标准肽段在pH 12的氨水溶液中,O-甲基异脲的浓度为1.5mol/L,微波高火加热1min的胍基化效率为99%。将此方法应用于马心肌红蛋白和牛血清白蛋白胰蛋白酶酶切肽段,质谱检测结果表明,含赖氨酸肽段的平均胍基化效率(95%)大于文献报道的平均胍基化效率(85%)。与传统水浴加热胍基化方法相比,微波辅助加热胍基化方法缩短了反应时间,提高了反应效率,降低了肽段N端副反应。
- 王雪颖张养军王昕佟巍秦伟捷毛心丽钱小红
- 关键词：微波辅助
- 反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析被引量：4
- 2011年
- 复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。"鸟枪法"(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为:与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3 035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3 499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3 446.55～432 905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。
- 马岩张万军卫军营牛明林虹君秦伟捷张养军钱小红
- 关键词：反相高效液相色谱酵母
