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C型利钠利尿肽基因转染对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响: 2017年; 目的研究C型利钠利尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化能力的影响,为实现高质量基于间充质干细胞的组织工程软骨构建奠定基础。方法采用全骨髓培养法分离SD大鼠BMSCs并进行传代培养及多向分化能力鉴定。将已构建的含有人CNP基因和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺病毒(Ad-NPPC-eGFP)按照特定转染复数(multiplicity of infection,MOI)转染BMSCs,通过流式细胞仪检测转染效率,Real-time PCR检测转染后CNP mRNA表达情况,MTT实验检测转染后对细胞增殖的影响,阿尔新蓝染色检测转染后BMSCs体外诱导14 d及21 d时成软骨情况。结果成功获取了大鼠BMSCs,成脂、成骨分化诱导结果表明其具有较好的多向分化能力。腺病毒转染后细胞状态良好,转染效率较高,且未对细胞增殖产生显著影响(P>0.05),转染后BMSCs CNP mRNA高表达(P<0.05),体外成软骨能力强于未转染CNP基因组(P<0.05)。结论含有CNP基因的重组腺病毒可在SD大鼠BMSCs中稳定表达,并表现出较好的体外诱导成软骨能力。; 杨烁时权钱智勇刘东华郭希民徐娟; 关键词：骨髓间充质干细胞重组腺病毒软骨组织工程

组织工程皮肤创面修复动物模型的研究进展被引量：9: 2017年; 组织工程皮肤在临床应用中发挥着重要作用,科技的快速发展更推进了组织工程皮肤的研究。选择合适的用于创面修复的动物模型是客观评价组织工程皮肤的前提。本文按照一般创面修复动物实验流程,从实验动物的选择、创面模型的制作、组织工程皮肤相关的细胞及生物材料、创面愈合评价指标等几个方面重点介绍创面修复动物模型的研究进展,为相关科研工作提供参考与借鉴。; 何秀叶宋慧锋郭希民; 关键词：创面修复生物相容性材料

C型利钠利尿肽重组腺病毒载体构建及鉴定被引量：2: 2015年; 目的:体外构建人C型利钠利尿肽(C N P,前体基因名N PPC)和增强型绿色荧光蛋白(EG FP)重组腺病毒,并检测其在兔骨髓间充干细胞(B M SC s)中的表达。方法:将N PPC基因克隆至含有EG FP的穿梭质粒,获得重组腺病毒A d-N PPC-EG FP颗粒,测定病毒滴度。转染兔骨髓间充质干细胞,测定感染复数(M O I)值,荧光显微镜、流式细胞仪检测转染效率及传代稳定性。结果:经PC R、酶切鉴定、测序分析,重组腺病毒构建成功,效价为1.2×1011PFU/m l,转染兔B M SC s最适M O I值为1000。感染细胞后效率较高,且稳定遗传。结论:成功构建C N P基因N PPC重组腺病毒,可在兔B M SC s中稳定表达,为进一步研究C N P的作用奠定基础。; 时权钱智勇刘翠郭希民徐娟; 关键词：重组腺病毒 CNP 骨髓间充质干细胞

血小板衍生生长因子-C对人毛乳头细胞生物学活性的影响: 2016年; 目的观察血小板衍生生长因子-C（PDGF-C）对体外培养的人毛乳头细胞生物学作用的影响。方法取整形外科除皱患者所弃头皮分离培养毛乳头，免疫荧光细胞染色法鉴定碱性磷酸酶在人毛乳头细胞的表达，CCK-8法检测浓度分别为0、10、20、30、40ng／ml的PDGF—C，在0、1、2、3、4、5、6d7个时间点对体外培养毛乳头细胞增殖的影响，绘制细胞生长曲线。流式细胞仪分析最适合浓度下人毛乳头细胞的细胞周期变化。Transwell细胞迁移实验及细胞划痕实验测定PDGF—C对毛乳头细胞迁移、趋化能力。结果碱性磷酸酶在人毛乳头细胞中呈阳性表达。PDGF—C在0～40ng/ml范围内，能明显促进人毛乳头细胞的增殖，并成剂量依赖关系，对人毛乳头细胞的促增殖作用在30ng／ml达高峰，差异有统计学意义（P〈0．05），在PDGF-C为30ng／ml条件下体外培养的人毛乳头细胞，处于S期细胞的比例较对照组显著增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。PDGF-C组相对于对照组向划痕处迁移细胞数明显增多。PDGF-C组向Transwell小室下面迁移细胞数多于对照组，2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PDGF-C组碱性磷酸酶活性能力增高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PDGF—C可促进体外培养的人毛乳头细胞的增殖、迁移及诱导能力。; 岳晓彤陈甫寰何秀叶宋慧锋王统民郭希民钱智勇; 关键词：毛乳头细胞细胞增殖细胞运动

氧还蛋白过氧化物2在表皮干细胞向汗腺细胞诱导分化过程中对表型改变的影响被引量：2: 2017年; 目的探讨氧还蛋白过氧化物2基因在表皮干细胞向汗腺细胞分化过程中对表型改变的影响。方法分离培养健康包皮获取表皮干细胞，分离培养健康成人皮肤获取汗腺细胞，以免疫荧光细胞化学染色鉴定。慢病毒载体介导的氧还蛋白过氧化物2基因分为过表达组、敲低表皮干细胞组及空白对照组，RT．PCR和WesternBlot技术分别在基因和蛋白水平检测3组的氧还蛋白过氧化物2表达。每组分别通过Transwell板与汗腺细胞共培养，流式细胞术检测共培养前、后表皮干细胞CEA和B1整合素的表达情况。结果表皮干细胞及汗腺细胞符合其相应特异性抗原。共培养前表皮干细胞B1整合素高表达（98．69±0．67）％，CEA几乎不表达（6．20±3．15）％；共培养后B1整合素表达程度：敲低组（19．30±0．53）％〈空白对照组（65．77±2．32）％〈过表达组（92．63±10．97）％；共培养后CEA表达程度：敲低组（95．43±2．36）％〉空白对照组（51．20±0．79）％〉过表达组（45．91±0．93）％。以上结果组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氧还蛋白过氧化物2基因可抑制表皮干细胞向汗腺细胞分化的表型改变，并可提高保留其本身特异性抗原表达水平的能力。; 陈甫寰宋慧锋郭希民岳晓彤刘玲英周勇刘东华钱智勇王统民何秀叶; 关键词：表皮干细胞汗腺细胞分化

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国家自然科学基金(31170926)

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