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二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析被引量：2: 2007年; 从二色补血草中分离出2个金属硫蛋白基因的cDNA全序列,分别命名为LbMT1和LbMT2.LbMT1全长为569 bp,其中5＇非编码区23 bp,3＇非编码区300 bp,开放读码框（ORF）长246 bp,编码含81个氨基酸的蛋白,相对分子质量为8070,等电点为4.7;LbMT2全长为523 bp,其中5＇非编码区61 bp,3＇非编码区216 bp,开放读码框长246 bp,编码81个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为8000,等电点为5.0.这2个基因编码的氨基酸都含有14个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CC、CXC和CXXC形式排列.疏水性分析表明：这2个蛋白都存在35～48个氨基酸之间较强的疏水区.通过对多种植物的MT蛋白序列比对分析表明,金属硫蛋白家族在氨基酸数目上保守性差,但半胱氨酸残基（Cys）的位置和数目保守性达到100%,揭示了Cys对金属硫蛋白的功能十分重要.这2个基因已经在Genbank上注册,LbMT1基因的登录号为EF103574,LbMT2基因的Genbank登录号为EF103575.; 李红艳杨传平王玉成王丙锋; 关键词：二色补血草基因克隆金属硫蛋白

胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立被引量：74: 2003年; 以胡杨和柽柳的叶片为材料 ,建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点 :RNA提取周期短 ,应用改进的LiCl沉淀RNA方法 ,仅需 10min即可 ;方法简单易行 ,仅需要几种常用试剂 ,操作步骤简单 ;提取的RNA杂质少 ,得率高 ,并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT -PCR等要求。; 王玉成薄海侠杨传平; 关键词：柽柳 RNA提取方法植物组织文库构建

干旱胁迫下刚毛柽柳消减文库的构建及分析被引量：28: 2005年; 以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之间。通过对文库阳性克隆的随机测序 ,获得了如Mn SOD、myb相关蛋白、锌指蛋白等 1 7种与干旱胁迫相关的基因 ,它们涉及了植物的渗透调节、信号传递、转录调控、活性氧清除等方面。所得EST序列已被GenBank收录。; 刘桂丰侯英杰王玉成褚延广; 关键词：干旱胁迫刚毛柽柳消减文库抑制性消减杂交技术表达序列标签抗旱基因

cDNA微阵列技术研究干旱胁迫下柽柳基因的表达被引量：17: 2007年; 运用cDNA微阵列技术研究干旱胁迫下柽柳(Tamarix androssowii)基因的表达。分别将Cy5和Cy3两种荧光染料标记在干旱处理和对照的柽柳cDNA上,并与载有柽柳基因的微阵列进行杂交,通过计算机对芯片进行扫描和分析研究干旱胁迫下基因的表达。共获得了47个下调表达和62个上调表达的基因。Blastx分析表明这些基因按功能可以分为脱水保护、信号传导与调控、活性氧清除、光合作用、代谢、核糖体蛋白、蛋白质的分解与再生等几大类别。同时,发现了一些与干旱胁迫相关的功能未知基因和新基因。从而揭示了柽柳具有活性氧消除、代谢调节、脱水保护、蛋白质降解与再生等抗旱途径,并阐述了干旱胁迫前后柽柳基因的差异表达。; 王玉成李红艳杨传平张国栋; 关键词：基因芯片柽柳干旱胁迫基因表达

柽柳金属硫蛋白基因(MT2)的过量表达对烟草耐Cd^(2+)性的促进效应被引量：8: 2007年; 将在柽柳(Tamarix androssowii)中克隆的金属硫蛋白基因MT2(GenBank登录号:AY620987)构建到载体pROKII上。用农杆菌介导的叶盘法转化烟草‘龙江911’,获得了抗卡那霉素的转基因植株。PCR-Southern和Northern blot检测证明外源基因已整合进烟草基因组并可正常表达。Cd2+抗性实验证明柽柳金属硫蛋白基因(MT2)的表达可提高转基因烟草的抗Cd2+性。; 张艳杨传平王玉成; 关键词：柽柳重金属金属硫蛋白烟草

干旱胁迫下多枝柽柳正反向消减cDNA文库的构建被引量：7: 2005年; 以干旱处理和生长在土壤水分充足的多枝柽柳的叶片为材料,利用抑制性消减杂交技术(SSH)成功地构建了干旱处理与对照之间的正反向消减cDNA文库。琼脂糖凝胶电泳分析表明,消减前后的PCR产物电泳谱带差异明显,说明消减成功。经检测,文库克隆的重组率为95%,插入片段多数集中在0.2～0.5kb之间。对正向文库部分克隆进行测序发现,文库中含有Mn-SOD、钙调蛋白、钙依赖蛋白激酶、脱水诱导蛋白等大量的抗旱相关基因,说明干旱胁迫下多枝柽柳抑制性消减文库已经构建成功。; 刘桂丰侯英杰王玉成褚延广; 关键词：多枝柽柳抗旱抑制性消减杂交

星星草cDNA文库构建和金属硫蛋白(MT-1)基因的克隆被引量：16: 2005年; 以受NaHCO3胁迫后的星星草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段长度为0.8kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu·mL-1。文库克隆随机测序获得了星星草的金属硫蛋白(MT-1)基因的全长cDNA序列,显示文库中含有一定量的全长基因。MT-1基因全长622bp,其中5'非翻译区57bp,3'非翻译区343bp,开放读码框长222bp,编码73个氨基酸,氨基酸序列中具有植物MT-1蛋白特有的金属响应元件(MRE)序列,MT-1蛋白的分子量为7.814kD,理论等电点为4.72。; 刘桂丰褚延广王玉成侯英杰杨传平; 关键词：星星草 CDNA文库 NAHCO3胁迫金属硫蛋白文库构建全长基因全长CDNA序列

NaHCO_3胁迫下紫杆柽柳一些基因的表达被引量：20: 2004年; 应用差异显示技术研究了NaHCO3胁迫下紫杆柽柳(Tamarix androssowii)基因的表达。经Norlhern检测共获得了17个基因片段,BLASTX分析表明,有2个基因与编码F-box类蛋白家族成员的基因同源性较高(F-box蛋白的功能为调节细胞周期转变、转录调控和信号转换,在植物抗逆防御系统中起重要作用);1个基因与翻译起始因子eIF成员有高的同源性(eIF在植物和酵母的抗盐胁迫中起重要作用);2个与分泌型过氧化物酶和过氧化物酶基因同源性高的基因片段;5个与盐碱胁迫密切相关的新基因,它们在胁迫前后差异表达明显。另外7个与已知基因同源性较高或有一定相似性,它们在抗盐碱胁迫中的作用尚待研究。; 杨传平王玉成刘桂丰姜静; 关键词：NAHCO3 胁迫

一种适用范围广的总RNA提取方法被引量：58: 2006年; 介绍一种RNA提取方法,该方法以SDS、氯仿和Tris苯酚为主要提取试剂,以LiC l和乙醇为RNA沉淀试剂。分别以柽柳(木本植物)、星星草(草本植物)、天牛(昆虫)、酿酒酵母和白腐菌(真菌)为RNA提取材料,用该方法成功地提取出了它们的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280在1.8以上。通过对LiC l和乙醇沉淀RNA的效果分析表明,该方法可在10 m in内完全沉淀RNA,同时也可以同时获得纯度较高的DNA。提取的RNA质量可满足cDNA文库构建,基因芯片探针标定和RT-PCR等对RNA质量要求较高的分子生物学操作,说明这是一种应用范围广的RNA提取方法。; 王玉成张国栋姜静; 关键词：RNA

转柽柳eIF1A基因烟草的耐盐性分析被引量：12: 2006年; 目的:验证柽柳eIF1A基因的功能,为通过基因工程手段培育耐盐植物提供基础资料。方法:对转eIF1A基因的烟草和对照烟草进行不同浓度NaCl胁迫实验,测定其相对电导率、SOD活性和丙二醛含量,统计生根率、生长量和盐害程度。结果:转基因烟草的相对电导率、丙二醛含量均随盐浓度的增加而增大,但都较非转基因对照烟草低。SOD活性随着盐浓度的升高而升高,相同浓度NaCl胁迫下各转基因烟草的SOD活性均高于对照烟草的SOD活性。NaCl浓度为240mmol/L时,非转基因对照烟草不能生根,盐害指数高达67.7%;而转基因烟草均能生根,大部分转基因株系的生根率大于50%。结论:柽柳eIF1A基因的转化提高了烟草的耐盐性。; 李艳霞姜静于影王玉成刘桂丰姜莹王有菊; 关键词：烟草 NACL 耐盐性

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