陕西省科技统筹创新工程计划项目(2011KTDZ02-01) 作品数:8 被引量:67 H指数:5 相关作者: 王晶钰 韦小敏 王旭东 来航线 张艳群 更多>> 相关机构: 西北农林科技大学 更多>> 发文基金: 陕西省科技统筹创新工程计划项目 国家科技支撑计划 博士科研启动基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
禽脑脊髓炎病毒陕西分离株VP1基因的克隆及序列分析 被引量:2 2012年 对禽脑脊髓炎病毒(AEV)陕西分离株SX株VP1基因进行克隆和序列分析,了解VP1基因的分子生物学特征。根据发表的AEV VP1基因序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出AEVSX分离株的VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定后与已知的AEV毒株序列进行比较分析。结果表明,获得的AEV SX分离株VP1基因的全长为810bp,编码270个氨基酸残基;SX株与参考毒株VP1基因的核苷酸同源性为91.5%~99.4%,推导的氨基酸同源性为88.5%~98.9%;在1~7、19~25、149~155处有3个潜在抗原位点。系统进化树表明,SX株与1143、L2Z参考毒株的亲缘关系较近。 郝华芳 张淑霞 杨涛 杨增岐 王兴龙 杜恩岐 党如意关键词:禽脑脊髓炎病毒 VP1基因 克隆 鸡源致病性大肠埃希菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测 被引量:7 2012年 为了解鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性变化和钝化酶耐药基因的携带情况及耐药基因与耐药性的相关性,从陕西、河南、河北、山西、宁夏和甘肃6省(区)的部分规模化养鸡场的病、死鸡中分离鉴定320株致病性大肠埃希菌。采用K-B药敏纸片法检测分离菌对6种氨基糖苷类药物的敏感性,PCR方法检测6种氨基糖苷类钝化酶耐药基因,用DNA Star软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性大肠埃希菌分离株对庆大霉素、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为53.4%、49.3%、37.5%、34.7%、22.8%和5.3%,对妥布霉素和卡那霉素耐药率呈上升趋势,而对庆大霉素的耐药率虽呈下降趋势,但仍维持在40%以上。3重以上耐药菌株占80%(256/320)。氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aph(3′)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰ的检出率分别为50.9%、25.9%和3.1%,未检测到aac(3)-Ⅳ、ant(3′′)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅱ基因。研究表明,分离的鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性普遍存在,以多重耐药为主,且对妥布霉素和卡那霉素的耐药性不断上升。耐药基因aac(3)-Ⅱ和aph(3′)-Ⅰ的检出率与其耐药性呈正相关。 王利勤 王晶钰 董睿 张三东 江跃德 陈占莉 李志良关键词:大肠埃希菌 耐药性 生物肥料多功能芽孢杆菌的筛选及其作用机理研究 被引量:30 2013年 本研究旨在筛选出多功能芽孢菌株及其组合,并对其促生机理进行研究。通过平板对峙法、发酵液拮抗活性的测定、盆栽试验、土壤养分测定和植株根域土壤区系分析从9株供试芽孢杆菌中进行多功能菌株的筛选,并通过室内相容性试验,得到功能菌株最佳复配组合。除菌株B02和B08外,其余菌株都具有抑制多种病原真菌和促进植株生长的作用。菌株B04的促生作用较强,在生长30 d和60 d时总干重比对照分别增加了28.4%和44.6%;菌株B06的抑病作用较强,对8种植物病原真菌的R2/R1为0.4~1.8,无菌滤液对8种植物病原真菌的抑制率为66.7%~87.5%;此外,菌株B01具有活化氮和磷的作用,B03、B04、B05和B06具有活化氮和钾的作用,B07具有活化钾的作用,B09具有活化氮、磷和钾的作用,氮的活化率为8.4%~23.2%,磷的活化率为3.5%~8.4%,钾的活化率为4.2%~26.8%。菌株室内相容性试验结果表明,最佳复配组合为B04-B06-B07和B01-B04-B07。供试9株芽孢杆菌都具有抑病、促生、活化养分和改善微生物区系作用中的一种或一种以上功能。多功能芽孢杆菌的菌群组合研究的理论依据可靠可行,实践依据还有待进一步研究。 张艳群 来航线 韦小敏 王旭东关键词:生物肥料 芽孢杆菌 2株植物促生芽孢杆菌的多向筛选及鉴定 被引量:2 2014年 通过小白菜盆栽试验、甜瓜种子平皿促发芽试验和马铃薯田间促生试验从供试7株芽孢杆菌中筛选出2株具有稳定和高效促生作用的芽孢杆菌B04和B06。菌株B04的促生作用较强,生长30d和60d的小白菜总干质量比对照分别增加27.3%和44.3%;甜瓜种子发芽率比对照提高7.41%~93.3%;马铃薯地上干质量和根干质量比对照分别提高19.0%和53.8%。菌株B06的促生作用次之,生长60d小白菜苗干质量比对照增加24.5%;甜瓜胚轴和胚根分别提高15.6%~59.9%和4.9%~26.8%;马铃薯株高和产量提高21.4%和15.3%。通过形态学鉴定、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析,B04被鉴定为Bacillustequilen—sis,B06被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。 张艳群 来航线 韦小敏 王旭东 张姗姗 马玥关键词:芽孢杆菌 禽脑脊髓炎病毒YL株的分离鉴定 被引量:5 2014年 为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验(AGP)、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV标准阳性血清之间出现特异的沉淀线;在人工感染试验中可见雏鸡有震颤、共济失调等症状,剖检大脑有轻微的水肿和软化;成功克隆出AEV YL株的VP1基因,全长810 bp,编码270个氨基酸残基;与AEV参考毒株VP1基因核苷酸同源性92.0%~99.8%,氨基酸同源性为89.3%~99.3%;进化树分析表明,YL株与1143株、L2Z株和SX株亲缘关系较近,与VR株、HB株、SD株和NH937株亲缘关系较远.结果表明,分离毒株为禽脑脊髓炎病毒,与AEV已知毒株在进化方面存在一定程度的差异. 郝华芳 张淑霞 杨涛 杨增岐 王兴龙 杜恩岐 党如意 王晶钰关键词:VP1基因 肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09全基因的克隆与序列分析 2013年 为了解鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西流行株的分子生物学特征,参考DY07株全基因核苷酸序列设计22对引物,采用RT PCR方法对西北农林科技大学动物医学院禽病研究室分离的1株肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09的全基因进行分段扩增并测序,将测序成功的各序列依次拼接,得到全基因序列后进行序列比对分析。研究结果表明,该分离株基因组全长27 675 bp,共有10个开放阅读框,其基因排序为5′cap Replicase S 3a 3b 3c M 5a 5b N poly(A)3′,纤突蛋白裂解位点为到536RRFRR540, 3a、5a和N基因的大小与参考毒株相比是保守的,但编码其他蛋白的基因长度存在差异;同源性分析结果显示,该毒株与48个参考毒株的同源性为85.2%~93.5%;系统进化树分析结果显示,该毒株与中国分离株ck/CH/LDL/091022、YX10株和DY07 株的亲缘关系较近,同属于中国近年来主要流行的血清型毒株,但在基因水平上已经产生一定程度的变异。 杨涛 张淑霞 杨增岐 刘青天 郝华芳 陈胜利 杜恩岐 王兴龙 党如意 王晶钰关键词:鸡肾型传染性支气管炎病毒 全基因 鸡源沙门菌PFGE分型及耐药性研究 被引量:13 2013年 为了解某规模化养鸡场沙门菌的流行情况及耐药现状,对分离于该场的病、死鸡42株沙门菌进行血清型鉴定,K-B药敏纸片法检测分离菌的药物敏感性,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对分离菌进行PFGE分型研究。结果显示,42株鸡源沙门菌可分为4种血清型,其中以肠炎沙门菌为优势血清型;分离菌对四环素、氨苄青霉素和萘啶酸普遍耐药,耐药率均在60%以上,4重以上耐药菌株占88.9%;42株鸡源沙门菌可分为7个PFGE型,各型间相似性较高,部分型菌株间相似性高达90%以上。结果表明,该养殖场鸡源沙门菌的耐药性普遍存在,且以多重耐药为主,PFGE分型结果表明,该场流行的沙门菌可能是由少数菌株传播引起的。 唐攀 崔恩慧 刘万华 任娟娟 武宁 邱渊皓 王晶钰关键词:沙门菌 血清型 耐药性 脉冲场凝胶电泳 两株生防芽孢细菌筛选、鉴定及拮抗研究 被引量:10 2014年 【目的】筛选出广谱、高效的生防芽孢细菌,并对其拮抗作用进行研究。【方法】以8种植物病原真菌为靶标菌,通过皿内拮抗和发酵液拮抗能力的测定筛选出2株广谱性和高效性的芽孢细菌B06和B07。【结果】B06对8种植物病原真菌的R2/R1为0.4-1.8,无菌滤液对8种植物病原真菌的抑制率为66.7%-87.5%。B07对8种植物病原真菌的R2/R1为0.23-1.21,无菌滤液对8种植物病原真菌的抑制率为55.56%-81.25%。经16S rRNA序列鉴定,菌株B06和B07都被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。【结论】芽孢细菌能够抑制多种植物病原真菌,具有较好的抑病作用。广谱和高效芽孢细菌的筛选在农业生物防治方面具有很大的开发和应用价值。 张艳群 来航线 韦小敏 王旭东 张姗姗 马玥关键词:拮抗机理