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抗隐孢子虫ScFv-PE重组毒素原核表达载体的构建及其对虫体的杀灭作用: 本研究以含抗隐孢子虫ScFv-PE40重组毒素的菌株为模板,利用设计合成的一对引物扩增出ScFv-PE40片段,将目的片段及原核表达载体PMAL经双酶切后,进行连接、转化、筛选及鉴定,得到阳性重组子,测序后读框正确。构建...; 刘晓峰张西臣尹继刚李淑红李建华; 关键词：隐孢子虫原核表达动物试验; 文献传递

抗隐孢子虫ScFv-PE重组毒素原核表达载体的构建及其对虫体的杀灭作用被引量：2: 2007年; 目的构建抗隐孢子虫ScFv-PE重组毒素原核表达载体并测定表达产物对隐孢子虫的杀灭作用。方法利用基因工程原理,以含抗隐孢子虫ScFv-PE重组毒素的菌株为模板,利用设计合成的一对引物扩增出ScFv-PE,利用pMAL-p2X载体构建重组毒素pMAL-ScFv-PE,并将其导入大肠杆菌中进行表达,产物进行SDS-PAGE和Western-blot,纯化后治疗感染隐孢子虫的小鼠。结果重组质粒经酶切鉴定正确,IPTG诱导后可看到明显的条带。凝胶薄层扫描分析目的蛋白表达量占菌体蛋白总量的21%。纯化后的表达产物治疗感染隐孢子虫的小鼠治疗组比对照组肠滞留物中卵囊计数(P<0.05)与肠道平均累计感染积分明显减少(P<0.01)。结论利用原核表达载体成功构建了可溶性形式表达的pMAL-ScFv-PE重组质粒,重组毒素对隐孢子虫具有明显的杀灭作用。; 刘晓峰李淑红张西臣尹继刚李建华宫鹏涛张国才; 关键词：隐孢子虫重组毒素原核表达

抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体基因的克隆和核苷酸序列分析被引量：9: 2003年; 应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 3D6中扩增出抗体VH 和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p MD- 18T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 72 0 bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (A)和轻链 κ 家族。; 尹继刚张西臣朱平张国利李建华何宏轩田宗成杨举; 关键词：隐孢子虫子孢子单链抗体基因克隆核苷酸序列

抗隐孢子虫ScFv-PE40重组毒素表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达: 利用RT-PCR技术,从分泌抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6中,扩增出轻重链可变区基因,通过linker将其连接成单链抗体基因,并将其克隆到PMD-18T载体中,进行序列测定。结果表明,扩增的ScFv基...; 尹继刚张西臣李建华朱平柳增善杨举张国利; 关键词：隐孢子虫表达质粒; 文献传递

抗微小隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体的制备及初步鉴定: ＜正＞本研究从人工感染隐孢子虫的犊牛粪便中分离微小隐孢子虫卵囊（CSO）,先用乙醚脱脂,再经不连续蔗糖密度梯度离心,得到纯净的卵囊。最后经反复冻融和超声粉碎后作为免疫抗原,10,0OOg离心20min取上清作为检测用抗...; 尹继刚张西臣李建华何宏轩杨举田宗成万敏王延钊; 关键词：微小隐孢子虫单克隆抗体; 文献传递

抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40重组毒素的可溶性表达: 设计一对引物,将ScFv-PE40基因从已经构建好的载体PET28-ScFv-PE40上扩增出来,插入pMal-2X 载体的EcoR Ⅰ和HindⅢ位点,构建表达载体pMal-2X- ScFv-PE40,转化表达菌TB1...; 尹继刚张西臣李建华刘晓枫李德昌; 文献传递

Preparation of Specific Mcab-PE40 Chimeric Toxin and Its Kill Action to Cryptosporidium Parvum: ＜正＞Four hybirdoma （1D5, 2E9, 3D6 and 4G4） producing McAbs against sporozoites oocyst antigens of C.parvum were...; Jigang Yin; 文献传递

抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体4G4的基因克隆及序列测定被引量：2: 2004年; 应用RT PCR技术 ,从分泌抗隐孢子虫表膜单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞 4G4中 ,扩增出抗体VH 和VL 基因 ,用Linker (Gly4 Ser) 3基因 ,将VH 和VL 基因连接成ScFv基因 ,并将其克隆至pMD 18T载体中。经核甘酸序列分析证实 ,VH 和VL 基因及Linker基因拼接正确 ,基因全长 717bp ,经计算机分析 ,VH和VL 基因均为新发现的基因序列。; 尹继刚张西臣郑印焕王延钊李建华; 关键词：隐孢子虫单链抗体 ER基因 T载体

抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40免疫毒素表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：8: 2005年; 用PCR方法扩增抗隐孢子虫子孢子ScFv片段,插入表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28-ScFv,然后,将绿脓杆菌外毒素(PE40)片段定向克隆到ScFv基因的下游,构建免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。经酶切分析、PCR检测和测序进行鉴定。成功地构建了免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。将上述质粒转化受体菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,成功地表达了目的蛋白。免疫毒素ScFv-PE40大小约为66kDa,表达量约占菌体蛋白总量的14%。; 尹继刚张西臣李建华朱平柳增善; 关键词：隐孢子虫子孢子免疫毒素免疫毒素表达质粒隐孢子虫子孢子大肠杆菌绿脓杆菌外毒素

抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体的制备及鉴定被引量：10: 2003年; 利用牛源微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)超声粉碎物免疫BALB C小鼠 ,取脾细胞与SP2 0细胞融合 ,经 3～ 5次有限稀释克隆化 ,获得 4株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 1D5 ,2E9,3D6和 4G4。经检测 ,其分泌的抗体亚类 3株为IgG1,1株为IgM。通过免疫荧光鉴定 ,4株单抗均作用于子孢子抗原 ,其中 2株针对子孢子表膜。对杂交瘤细胞株的染色体计数 ,结果染色体均数为 90～ 98条。ELISA检测细胞培养上清效价分别为 1∶16 0 ,1∶32 0 ,1∶32 0和 1∶6 4 0 ,诱生小鼠腹水的抗体效价分别为 1∶4 0 9,6 0 0 ,1∶819,2 0 0 ,1∶819,2 0 0和 1∶1,6 38,4 0 0 ,特异性试验结果显示 ,4株单抗均不与贾第虫滋养体和结肠小袋纤毛虫发生交叉反应。; 尹继刚张西臣李建华王延钊何宏轩; 关键词：隐孢子虫单克隆抗体

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