中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITBBZD1051)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：张雨良杨文君刘志昕王健华官梅花更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院黑龙江大学海南大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 花生丛枝植原体免疫膜蛋白基因克隆及细菌双杂交诱饵质粒构建
- 2011年
- 初步分析植原体免疫膜蛋白的结构,以Imp构建诱饵质粒,为研究植原体与寄主互作的分子机理,探讨植原体传播、侵染及在寄主内的运输方式奠定基础。根据本实验室获得的花生丛枝植原体免疫膜蛋白基因序列设计特异性引物Imp-F/Imp-R,通过PCR扩增获得花生丛枝植原体免疫膜蛋白基因,大小519 bp,编码蛋白含有172个氨基酸残基,与SPWB膜蛋白的核苷酸差异一个碱基,氨基酸序列相同。另外与WBDL膜蛋白的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.8%和70.2%。对其进行系统发育树分析;初步分析imp基因编码蛋白的跨膜区和疏水区。分析结果表明:花生丛枝植原体免疫膜蛋白C端有一跨膜锚定区,N端主要为膜内亲水区,没有前导信号序列。预测花生丛枝植原体免疫膜蛋白是一类C端跨膜的植原体免疫膜蛋白。将imp基因克隆到带有λcI基因的pBT质粒上,构建诱饵载体pBT-Imp,并通过IPTG诱导表达,western blot检测和自激活检验对其进行检测。结果显示:所构建的诱饵载体pBT-Imp可用于细菌双杂交的进一步实验。
- 杨文君张雨良王健华余乃通林湛松刘志昕
- 关键词：诱饵载体
- 玉米螟细胞色素P450家族CYP6AE25的克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生理功能,研究其对植物次生物质代谢和杀虫剂的解毒等具有重要的意义。采用同源克隆方法与RACE技术克隆玉米螟细胞色素P450全长基因,并运用生物信息学软件,对其蛋白的理化性质、结构组成、信号肽、跨膜结构域、二级结构、三级结构与功能结构域等作了较为详细的分析与预测。结果表明,利用简并引物扩增出了玉米螟细胞色素P450基因的中间片段,通过RACE技术获得玉米螟P450基因家族一员全长序列,即编码523个氨基酸残基的2315bp的全长cDNA,命名为OfP450(GenBank登录号:EU807990)。国际P450命名委员会将其定为CYP6AE25。生物信息学结果,从CYP6AE25蛋白的理化、结构与功能等作了更为深入的数据分析。为进一步研究其高级结构与功能的关系提供理论依据。CYP6AE25蛋白与其他P450分子进化树分析结果显示,与昆虫CYP6家族同源性较高,与CYP其他家族的遗传距离较远,同源性较低。
- 袁辉张雨良杨峰山张一彤
- 关键词：玉米螟基因克隆
- 甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化被引量：4
- 2011年
- 为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。
- 张雨良熊国如王健华张树珍官梅花杨文君刘志昕
- 关键词：甘蔗黄叶病毒RNA干扰烟草转化
