国家杰出青年科学基金(39625012)
- 作品数：10 被引量：38H指数：4
- 相关作者：陈杰谷丽君刘彤华李理崔全才更多>>
- 相关机构：北京协和医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用原位杂交及免疫组化方法检测p53基因及ki-67蛋白在胆管癌中的表达被引量：4
- 2000年
- 目的 研究胆管癌组织中 p5 3基因表达、ki- 6 7增殖指数高低及它们之间的关系 ,以深入探讨胆管癌发生、发展的机制。方法 采用原位杂交及免疫组化方法对 30例人胆管癌组织 p5 3基因、P5 3蛋白表达及 ki- 6 7蛋白增殖指数进行检测 ,探讨它们之间的关系 ,并进而分析它们与临床病理资料之间的相关性。结果 原位杂交检测30例胆管癌组织中 14例 (46 .7% ) p5 3基因表达阳性 ,p5 3原位杂交结果与胆管癌的临床病理资料无显著相关性。免疫组化检测 30例胆管癌组织中 16例 (5 3.3% )有 P5 3蛋白表达 ,有局部淋巴结转移组 P5 3蛋白表达阳性率明显高于无局部淋巴结转移组 ;临床 期患者 P5 3蛋白表达阳性率明显高于临床 、 期患者。有 P5 3蛋白表达的患者生存期明显短于无 P5 3蛋白表达的患者。 2 9例 (96 .7% )胆管癌患者的肿瘤细胞中有 ki- 6 7蛋白表达。在中、低分化、有局部淋巴结转移、临床 期肿瘤组织中 ,ki- 6 7增殖指数显著高于高分化、无局部淋巴结转移及临床 、 期患者。生存期长的肿瘤患者 ,ki- 6 7增殖指数低于生存期短的患者。结论 ki- 6 7增殖指数反映了胆管癌细胞的增殖活性 ,分化程度低的肿瘤细胞增殖活跃 ,局部淋巴结转移的危险性较大 ,临床预后较差 ,提示 ki- 6
- 王欣张建希陈杰
- 关键词：P53基因KI-67蛋白胆管癌
- 高亲和性神经生长因子受体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的影响被引量：2
- 2000年
- 目的 观察人神经母细胞瘤细胞系IMR 32细胞在恢复高亲和性神经生长因子受体基因trkA表达后对神经生长因子 (NGF)诱导分化的反应。方法 应用基因重组技术构建含外源trkAcDNA的逆转录病毒载体 ,经PA31 7细胞包装后感染靶细胞系IMR 32细胞 ,经Southernblot杂交、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)证实转化细胞系中含有外源基因的整合及稳定表达后 ,进行神经生长因子诱导分化实验。结果 转化细胞系未经NGF诱导前与母系细胞在细胞形态及生长状态方面差异均无显著性意义 ,而经NGF诱导后细胞出现明显神经元样分化 ,生长及代谢速率减慢 (四甲基偶氮唑盐法测定原细胞系IMR 32和空载体转化细胞系IMR 32 /pIRV分别为 0 .2 5 8± 0 .0 1 7,0 .2 37± 0 .0 1 1 ;而trkA基因转化的细胞系则仅为 0 .0 2 8± 0 .0 0 3) ,撤去NGF后分化细胞仍然维持分化状态。转化细胞在软琼脂内很少形成集落 ,集落形成率仅为 0 .6 ;远低于原细胞系IMR 32和空载体转化细胞系IMR 32 /pIRV的 32 .3和 33.6 ,在裸鼠体内未见肿瘤形成。结论 高亲和性神经生长因子受体基因的表达可以使转化细胞系对NGF产生不可逆的诱导分化反应 。
- 折晓宁陈杰刘彤华高洁
- 关键词：神经母细胞神经生长因子受体基因转移
- 石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变被引量：2
- 2002年
- 目的研究石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变。方法用PCR-SSCP、PCR产物直接测序法检测46例石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4基因改变情况,用原位杂交(ISH)、免疫组织化学(IHC)检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织DPC4的mRNA、SMAD4蛋白表达情况。结果胰腺癌DPC4基因第1、2、3、4、8、11外显子的纯合性缺失率为28.26%,突变率为21.74%,测序显示有3例无义突变,5例错义突变,1例插入、缺失及错义突变,1例插入突变。ISH、IHC显示胰腺癌DPC4/SMAD4阳性率分别为53.57%、58.93%,而对应正常胰腺阳性率分别为91.07%、89.29%。统计学分析表明胰腺癌与正常胰腺有显著性差异(P<0.05)。32例胰腺癌进行了PCR-SSCP、测序、ISH和IHC实验,四者结果一致者28例,符合率为87.50%,其中基因改变与ISH符合率为87.50%,基因改变与IHC符合率为96.88%。56例胰腺癌的ISH与IHC符合率为91.07%,统计学分析显示上述三组阳性率间均无显著性差异(P>0.05)。结论人胰腺癌纯合性缺失和突变是DPC4失活的主要机制,胰腺癌与正常胰腺相比,SMAD4表达明显下降,DPC4作为一种抑癌基因,其改变可能为胰腺癌的重要分子事件,在胰腺癌的形成中可能起重要作用。
- 谷丽君陈杰刘彤华崔全才卢朝辉李理高洁
- 关键词：胰腺癌抑癌基因
- 人胰腺癌组织中DPC4/Smad4、p21^(wafI)、p16蛋白表达的检测被引量：7
- 2002年
- 背景与目的:近一半的胰腺癌存在DPC4/Smad4失活,使肿瘤细胞增殖的抑制作用丧失;p21waf1是Smad4调控的下游靶基因,而DPC4和p16基因在胰腺癌的发生中可能有协同作用。本研究拟通过研究DPC4/Smad4、p21wafI、p16蛋白在人胰腺癌中的表达情况,探讨三者之间的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。方法:用免疫组化技术检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织Smad4、p21wafI、p16的蛋白表达情况;用原位杂交、免疫组化技术、Westernblot检测5株人胰腺腺癌细胞系中DPC4/Smad4的mRNA和蛋白表达情况。结果:石蜡包埋人胰腺癌组织免疫组化显示Smad4、p21wafI和p16阳性率分别为58.93%、48.21%和42.86%,对应癌旁非癌胰腺组织阳性率分别为89.29%、87.5%和76.79%;P3、P4、P7人胰腺腺癌细胞系DPC4/Smad4的原位杂交、免疫组化及Westernblot均为阳性,而P1、P2均为阴性。统计学分析显示胰腺癌及癌旁非癌胰腺之间3种蛋白表达均有显著性差异(P<0.05),胰腺癌中Smad4与p21wafI表达之间有一定相关性(P<0.05),Smad4与p16表达之间有一定相关性(P<0.05),但p21wafI与p16表达之间无显著相关(P>0.05)。结论:胰腺癌与正常胰腺相比,Smad4、p21wafI、p16蛋白表达明显下降,其改变在胰腺癌的发生发展中可能起重要作用。
- 谷丽君陈杰卢朝晖李理周炜洵罗玉凤
- 关键词：基因表达SMAD4DPC4/SMAD4基因表达
- DPC4——一种新的候补肿瘤抑制基因被引量：3
- 2000年
- 谷丽君崔全才陈杰
- 关键词：抑癌基因DPC4基因
- 四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用被引量：1
- 2002年
- 目的 研究由四环素调控的反义bcl 2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK N MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl 2cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1CMV/Asbcl 2 ;应用脂质体LipofectamineTM 介导转染SK N MC细胞 ,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况 ,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)研究细胞凋亡中bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl 2及其上下游相关基因caspase 3、PARP的变化。结果 转染反义bcl 2的细胞生长增殖缓慢 ,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞 ,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase 3酶原蛋白减少并检测到bcl 2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl xL/bcl xS 基因在mRNA水平上表达无明显改变。结论反义bcl 2mRNA可抑制SK N MC细胞的生长和增殖 ,促进去血清培养所诱导的SK N MC细胞的凋亡。在细胞凋亡过程中caspase 3被激活 ,bcl 2和PARP蛋白被裂解 ,但bcl xL/bcl xS 在反义bcl 2mRNA诱导的SK N MC细胞的凋亡过程中无变化。
- 关健陈杰赵和
- 关键词：四环素反义BCL-2神经母细胞瘤脱噬作用BCL-2基因肿瘤细胞培养
- 石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4基因改变的检测被引量：4
- 2000年
- 目的 研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4基因的改变。方法 用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)银染技术检测 46例石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4基因的缺失和突变。结果 DPC4基因第 1、2、3、4、8和 11外显子的纯合性缺失率为 13/ 46 (2 8.3% ) ,具体分布为 1例在第 11外显子 ;1例在第 1、11外显子 ;1例在第 2、3外显子 ;1例在第 3、8外显子 ;1例在第 1、2、8外显子 ;1例在第 2、4、11外显子 ;1例在第 3、4、11外显子 ;3例在第 3、4、8外显子 ;1例在第 2、3、4、8外显子 ;1例在第2、3、8、11外显子 ;1例在第 2、3、4、8、11外显子。基因突变率为 10 / 46 (2 1.7% ) ,分布于DPC4基因的第1外显子 1例、第 2外显子 1例、第 8外显子有 3例、第 11外显子 4例、第 4、11外显子 1例。石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4基因的总改变率为 2 1/ 46 (4 5 .6 % )。结论 DPC4作为一种抑癌基因 ,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要作用。
- 谷丽君崔全才陈杰李理刘彤华
- 关键词：胰腺肿瘤DPC4基因石蜡包埋
- DPC4基因在胰腺癌中的改变被引量：9
- 2001年
- 目的 研究DPC4(deletedinpancreaticcancerlocus 4)基因在胰腺癌中的改变。方法 用多聚酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)银染技术及PCR产物直接测序法检测胰腺癌细胞系P1、P2、P3、P4、P7,11例新鲜冷冻胰腺癌组织中DPC4基因第 1,2 ,3,4,8,11外显子的缺失和突变。结果 5株人胰腺癌细胞系中 ,3株 (P1、P2、P3)存在DPC4基因突变 ,DPC4基因改变率为 3/ 5。 11例新鲜冷冻胰腺癌组织中 ,3例有DPC4基因的纯合性缺失 ,2例有基因突变 ,DPC4基因改变率为 5 / 11(4 5 .5 % )。结论 DPC4作为一种抑癌基因 ,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要作用。
- 谷丽君陈杰崔全才高洁李梅刘彤华
- 关键词：胰腺肿瘤DPC4基因纯合性缺失基因突变
- 人胰腺腺癌细胞系中p16基因、cyclin D1基因和pRb蛋白的改变被引量：1
- 2000年
- 目的研究胰腺腺癌细胞系 pRb- p16细胞调节途径相关因子的异常情况。方法用 PCR及单链构象多态性 (SSCP)的方法检测 5株人胰腺腺癌细胞系 p16基因的缺失和突变；用 Southern印迹分析 cyclin D1基因的扩增；用 Western印迹分析检测 pRb基因的表达。结果 2株胰腺腺癌细胞系存在 p16基因第 1外显子纯合性缺失，未发现第 1、 2外显子的基因突变； 1株细胞系有 cyclin D1基因的扩增； pRb基因在 5株细胞系中均呈高磷酸化的表达。结论胰腺腺癌细胞系中存在 pRb- p16细胞调节途径的异常，主要表现为 p16和 cyclin D1基因的改变。
- 许雅陈杰刘彤华谷丽君高洁李理
- 关键词：胰腺腺癌CYCLIN细胞调节
- 石蜡包埋人胰腺癌组织中Smad4蛋白和转化生长因子β_1及其Ⅱ型受体的表达被引量：11
- 2001年
- 目的 探讨转化生长因子 (TGF) β通路中Smad4蛋白、TGFβ1和转化生长因子 βⅡ型受体 (TβRⅡ )的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。 方法 用EnVision免疫组织化学技术检测5 6份石蜡包埋人胰腺癌标本Smad4蛋白、TGFβ1和TβRⅡ蛋白表达的情况。 结果 5 6份胰腺癌组织Smad4、TGFβ1和TβRⅡ阳性率分别为 5 8 93%(33)、6 6 0 7%(37)和 6 0 71%(34 ) ,对应正常胰腺组织阳性率分别为 89 2 9%(5 0 )、2 5 0 0 %(14)和 2 5 0 0 %(14)。TGFβ1的表达与临床分期、肿瘤的有无转移相关 (P <0 0 5 )。TGFβ1与TβRⅡ之间也有相关关系 (P <0 0 5 )。 结论 胰腺癌组织中Smad4表达降低 ,TGFβ1与TβRⅡ则呈过表达。TGFβ1与TβRⅡ对胰腺癌的发生可能有协同作用。Smad4在TGF β诱导基因表达调控和随后的生长抑制中是关键的转录因子 ,但TGFβ有时也可能以与Smad4无关的形式起作用。
- 谷丽君陈杰刘彤华李理卢朝晖罗玉凤
- 关键词：胰腺肿瘤转化生长因子Β受体
