国家自然科学基金(30470156)
- 作品数：7 被引量：37H指数：3
- 相关作者：秦松梁成伟魏炜孟春晓檀琮萍更多>>
- 相关机构：中国科学院青岛科技大学山东理工大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 雨生红球藻β-胡萝卜素酮化酶基因克隆、分析及叶绿体表达载体构建被引量：2
- 2007年
- β-胡萝卜素酮化酶(BKT)是雨生红球藻虾青素合成途径中的关键酶。根据GenBank中所收录的雨生红球藻BKT的cDNA序列设计特异性引物,以高光照处理的雨生红球藻细胞的总RNA为模板,采用RT-PCR的方法克隆出了β-胡萝卜素酮化酶基因(bkt)。序列测定结果表明,bkt全长960bp编码320个氨基酸。克隆的bkt序列与GenBank收录的BKT的cDNA(AY603347)序列只相差一个碱基。并对其编码的氨基酸进行了二级结构的预测和疏水性分析。同时将所克隆的bkt构建入衣藻叶绿体表达载体p64Dbkt,为基因的进一步表达研究及探索其作用机制奠定了基础。
- 檀琮萍梁成伟苏忠亮秦松
- 关键词：雨生红球藻
- 诱导条件下雨生红球藻虾青素合成相关基因的表达特征分析被引量：2
- 2009年
- 用脱落酸(ABA)和氮饥饿加高光诱导雨生红球藻,研究在胁迫条件下虾青素在细胞内积累的变化以及虾青素合成基因的表达模式。结果表明,在诱导条件下雨生红球藻细胞内虾青素积累明显。半定量RT-PCR结果表明,在虾青素合成酶系基因中八氢番茄红素合成酶基因(psy)、八氢番茄红素脱氢酶基因(pds)在诱导一段时间内mRNA水平一直在升高,在诱导后期mRNA依然具较高水平,胡萝卜素羟化酶基因(crtR-B)、胡萝卜素酮化酶基因(bkt)在诱导一段一段时间后mRNA水平升高后又略有下降,而番茄红素环化酶基因(lcy)则不受这些诱导条件的调控,一直处于较高水平的表达。虾青素合成基因表达模式的差异表明这些基因分子调控机制的差异。
- 梁成伟田李苏忠亮秦松
- 关键词：雨生红球藻虾青素
- 雨生红球藻β-胡萝卜素酮化酶(bkt)启动子功能分析(英文)被引量：3
- 2006年
- 单细胞绿藻———雨生红球藻在逆境条件下积累大量的虾青素。β-胡萝卜素酮化酶(bkt)催化在β-胡萝卜素和玉米黄素的β-紫罗酮环C-4位引入酮基的反应,是虾青素合成过程中的关键酶。我们利用凝胶阻滞的方法研究雨生红球藻中bkt基因309bp(-617/-309)启动子区域的转录因子结合位点并发现在-396/-338的59bp探针存在特异的核蛋白结合位点。通过序列分析,发现此59bp区域并不包含TATA或者CAAT-box,而是存在对光、缺氧、p-香豆酸及激素反应的G-box。
- 魏炜梁成伟秦松
- 关键词：雨生红球藻启动子转录因子结合位点
- 藻类基因转录调控研究进展被引量：1
- 2006年
- 转录调控是基因表达调控的重要方式。转录调控的研究主要集中在启动子的克隆与分析、反式作用因子(即DNA结合蛋白)的检测及转录量的检测三方面。介绍了基因组步移、凝胶阻滞、酵母双杂交系统、cDNA微阵列等基因转录调控的常用研究方法,并对藻类基因转录调控的最新研究进展进行了评述。
- 魏炜孟春晓秦松
- 关键词：转录调控顺式作用元件反式作用因子启动子DNA结合蛋白藻类
- 雨生红球藻cDNA表达文库的构建与初步分析被引量：1
- 2006年
- 为了筛选雨生红球藻虾青素合成过程中的关键酶基因的反式调节因子基因,以雨生红球藻的绿细胞为材料,提取了高质量的总RNA,并分离纯化了mRNA,经过反转录后的得到cDNA,构建了以λ-ZAPExpress为载体的表达型cDNA文库。经检测,所构建的文库的滴度为5.1×105,重组率为100%。用PCR方法对文库的质量进行了鉴定,文库的平均插入片断的大小为1.7kb。雨生红球藻cDNA表达文库的构建为研究虾青素的代谢工程奠定了基础。
- 梁成伟李友训孟春晓赵方庆杨庆利秦松
- 关键词：雨生红球藻CDNA表达文库
- 雨生红球藻八氢番茄红素合成酶基因的克隆及表征(英文)被引量：9
- 2006年
- 雨生红球藻是一种单细胞绿藻,在多种逆境胁迫条件下能够大量合成并迅速积累虾青素,其积累量最高可达细胞干重的4%,从而成为目前最理想的天然虾青素合成工具.八氢番茄红素合成酶(PSY)是虾青素合成途径中第一个限速酶.分离了八氢番茄红素合成酶基因(psy)的全长cDNA及基因组DNA.其全长cDNA包括1200个碱基,编码400个氨基酸,基因组DNA包括5个外显子,4个内含子.系统发育分析结果显示,绿藻的八氢番茄红素合成酶基因形成一个进化枝,它们与高等植物的psy亲缘关系比较近.通过GenomeWalking的方法,分离了psy基因约1kb的5′侧翼序列.将含有TATA-box和CAAT-box的297bp的序列与LacZ报告基因构成嵌合的表达载体,用基因枪法转化雨生红球藻.lacZ的瞬间表达检测结果表明,这段上游序列能够驱动lacZ表达,具有启动子活性.
- 梁成伟赵方庆秦松檀琮萍魏炜孟春晓
- 关键词：雨生红球藻八氢番茄红素合成酶系统发育分析启动子
