“十五”国家科技攻关计划(2004BA713B04-05)
- 作品数：4 被引量：40H指数：2
- 相关作者：马立新谭秀华武玉永蒋思婧马向东更多>>
- 相关机构：湖北大学滨州医学院南阳师范学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项湖北省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 油菜RNA干扰(RNAi)文库的构建
- 2010年
- 为了通过构建高通量RNAi(RNA干扰)双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任意一种功能片段取代。载体pHBMT4含有用以检测载体功效的gus报告基因,原多克隆位点处被一个插入目标序列表达框取代,该框含有的反向重复nos终止序列可自然形成发夹环结构引发转录后水平的基因沉默(PTGS)。通过抽提的油菜总DNA与载体pHBMT4相连转化获得了油菜RNAi文库,为以后研究油菜的基因组功能打下良好的基础。
- 谭秀华武玉永单长民马立新
- 关键词：油菜双元载体
- 新型甘露聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2012年
- 构建土壤基因组文库,通过功能筛选得到一水解底物魔芋粉的阳性克隆,测序后,序列分析表明:该基因全长为1 530 bp,包含一个糖基水解家族26结构域,编码510个氨基酸,相对分子质量为56 438。此基因推导的氨基酸序列与Cellulomonas fimi的Man26A和Cellvibrio japonicus的mannanase A氨基酸序列同源性分别为64.3%、38%。将此基因的成熟肽的编码序列克隆到表达载体pHBM905上,得到重组质粒pHBM730,将pHBM730经SalI酶切线性化后转化3株毕赤酵母GS115、KM71、SMD1168,该甘露聚糖酶基因在这3种毕赤酵母中均实现分泌表达。将此3种重组毕赤酵母GS115(pHBM730)、KM71(pHBM730)、SMD1168(pHBM730)诱导产酶,对这3种重组酶进行相关的酶学性质研究。分析表明,在KM71中表达量最高,其最适反应pH值均约为6.6,最适反应温度均约为45℃。在最适反应条件下测得其酶活力为19.64 U。此结果为瓜尔豆胶降解产物的工业化应用提供了参考。
- 武玉永谭秀华马立新
- 关键词：Β-甘露聚糖酶毕赤酵母克隆分泌表达酶学性质
- 耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：22
- 2005年
- 通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因(GenBank登录号为AY623903)。将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上,得到重组质粒pHBM1201。经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌表达的重组毕赤酵母。挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168-3在摇瓶中诱导产酶,对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明,其最适反应温度为55℃,最适PH值为7.5,以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上。
- 谭秀华武玉永马立新蒋思婧
- 一种鉴定多糖水解酶类及其产生菌的新方法被引量：17
- 2007年
- 利用曲里苯蓝能与多糖形成复合物的原理，建立起一种简便、快捷、灵敏的筛选多糖水解酶类及其产生菌的平板鉴定方法。曲里苯蓝对供试微生物无毒害作用，不影响酶的活性，并可高温灭菌。其最适浓度在0．005％～0．01％（W／V）之间。可用于纤维素水解酶类、淀粉水解酶类、甘露聚糖酶、普鲁兰酶等多糖水解酶，与传统方法相比，该方法不仅有着同样高的灵敏度，而且能够提高筛选效率，避免污染问题，同时适合于多种多糖底物。但不能用于木聚糖酶和菊粉酶的检测。
- 马向东柯涛熊兰严红马立新
