广东省教育部产学研结合项目(2011Y1-00038-2)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：任哲王一飞彭鑫磊马岩岩刘秋英更多>>
- 相关机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 穿膜肽KGF-2的构建及其对HaCaT增殖作用的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建穿膜肽KGF-2(TAT-KGF-2),研究其对人角质形成细胞HaCaT的增殖作用。方法:采用普通PCR技术和特殊引物从人胚胎肺成纤维细胞cDNA中扩增出目的基因TAT-KGF-2,并将其插入pET-28a(+)载体中构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒;将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白TAT-KGF-2;通过Ni-NTA柱纯化获得目标重组蛋白并利用Western blot进行鉴定;MTT法研究TAT-KGF-2对HaCa的增殖作用。结果:成功构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人KGF-2基因序列同源性达到100%;获得穿膜肽KGF-2蛋白,分子量约为19 kDa,纯度达到95%以上;TAT-KGF-2对HaCaT在12.5ng/ml时具有增殖作用,并呈浓度依赖性,而且与不具有穿膜功能的KGF-2相比有更强的增殖效果。结论:成功纯化出TAT-KGF-2蛋白,并验证其对HaCaT具有增殖作用,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 马岩岩荣靖彭鑫磊刘秋英舒辉萍陈海佳王一飞任哲
- 关键词：穿膜肽克隆原核表达纯化
