新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(200611107)
- 作品数：19 被引量：39H指数：4
- 相关作者：简子健马素贞赵森翟少华陈胜男更多>>
- 相关机构：新疆农业大学新疆畜牧科学院塔里木大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化被引量：1
- 2012年
- 【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量。【方法】研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST-CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600=1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8 h,GST-CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL。【结论】确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 简子健马素贞申卫红翟少华赵森
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白纯化
- 狂犬病病毒SRV_9突变株的构建与拯救
- 2010年
- 为构建人工修饰的狂犬病病毒,首先用人细胞色素C基因替换狂犬病病毒SRV9株基因间隔区中的非必需区域Ψ区并缺失基因组全长cDNA的糖蛋白CD编码区,得到突变型SRV9cDNA质粒。然后,该质粒与表达野生型SRV9四种结构蛋白N、P、G和L的质粒共转染BHK-21细胞。免疫荧光试验显示转染细胞中有大量特异性荧光,电子显微镜观察可见大量典型的狂犬病病毒粒子。上述结果表明已成功地拯救出了人工修饰的狂犬病病毒。狂犬病病毒SRV9突变株的成功构建与拯救,为新型狂犬病减毒活疫苗的研究提供了重要的实验工具。
- 魏玉荣易忠符子华马素贞简子健胡尔玛西
- 关键词：拯救
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建被引量：5
- 2010年
- 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。
- 陶玉成马素贞陈胜男刘腾飞申卫红简子健
- 关键词：犬传染性肝炎克隆原核表达质粒
- 犬细小病毒巢式PCR诊断方法的建立及应用被引量：2
- 2012年
- 【目的】以期建立犬细小病毒巢式PCR诊断方法。【方法】根据基因库已发表的CPV VP2基因序列设计二对巢式引物,以临床上疑似CPV感染的犬粪样品中提取的总DNA作为模板,用巢式PCR方法扩增出CPV VP2基因的目的条带。【结果】扩增出的目的基因与国际标准序列的同源性为99.3%～100%。特异性试验发现该引物不能启动犬其它常见病毒基因的扩增。敏感性试验表明该引物能检测到10-9的CPV总RNA量。重复性试验显示该引物具有良好的稳定性。对采集的26份样品进行CPV巢式PCR检测,20份样品为阳性,阳性率为76.9%。【结论】建立的CPV的RT-PCR检测方法可于临床CPV的快速诊断和小规模的分子流行病学调查。
- 简子健马素贞陈胜男翟少华赵森
- 关键词：犬细小病毒巢式PCR
- 牛梨形虫病综合防治措施的实验性研究被引量：4
- 2012年
- 【目的】处于干旱、半干旱区的新疆是蜱侵袭较严重的地区。目前已发现牛群中存在这三种梨形虫病,但只有牛泰勒虫病有有效的疫苗防治。探讨新疆牛梨形虫病综合防治措施,制定出该区综合性的预防和治疗方案并予以实施。【方法】选择牛梨形虫病比较严重的疫区作为实验点,根据该区的气候、季节特点,通过流行病学调查、驱蜱、疫苗接种、药物治疗。【结果】该区的牛梨形虫病综合防治措施牛梨形虫病的发病率显著降低,实验期间牛群中没有发现死亡。【结论】通过制定牛梨形虫病综合防治措施使疫区牛群的牛梨形虫得到有效控制,在新疆农区与牧区具有借鉴意义。
- 桑彩霞马素贞简子健袁江玲吕伟陶玉成
- 关键词：梨形虫病发病率
- 狂犬病病毒rSRV_9减毒株与亲本SRV_9毒株的病毒毒力比较
- 2012年
- 通过半数荧光灶形成量(FFD50)试验、小鼠半数致死量(LD50)试验、免疫组织化学试验,对10个培养代次的狂犬病病毒SRV9亲本毒株和rSRV9减毒株的病毒滴度、毒力及其致病性等病毒生物学特性进行检测,以鉴定拯救狂犬病rSRV9减毒株与亲本SRV9毒株病毒滴度及毒力的差异性。试验结果显示,10个培养代次的狂犬病病毒rSRV9减毒株FFD50值为5.44～7.46logFFD50/0.1mL,LD50值为2.47～2.68logLD50/0.03mL;亲本SRV9毒株FFD50值为6.36～6.79logFFD50/0.1mL;LD50值为5.56～5.79logLD50/0.03mL,通过免疫组织化学试验,检测出脑内注射SRV9毒株和rSRV9减毒株死亡小鼠脑神经细胞内的狂犬病病毒。
- 翟少华马素珍赵森高攀夏婷婷苏晓慧易忠魏玉荣简子健
- 关键词：狂犬病病毒
- RT-PCR检测CPIV方法的建立与应用被引量：3
- 2011年
- 【目的】建立CPIV的RT-PCR检测方法。【方法】从临床上疑似犬副流感(CPI)的犬鼻腔分泌物中提取CPIV总RNA。根据Genebank中收录的CPIV(序列号AY581307)中NP基因保守序列,设计一对特异性引物,扩增出667 bp片段,以此建立CPIV的RT-PCR检测方法。【结果】特异性试验表明该引物不能扩增犬其它常见的传染病病毒基因。敏感性试验表明该引物能检测到10^(-6)的CPIV总RNA量。重复性试验表明该引物具有良好的稳定性和重复性。对临床采集的32份样品进行RT-PCR检测时,阳性率为53.12%。【结论】实验建立了CPI的RT-PCR检测方法,可适合于临床CPIV的早期快速诊断和小规模的分子流行病学调查。
- 简子健马素贞刘腾飞翟少华赵森
- 关键词：犬副流感病毒NP基因反转录聚合酶链反应早期快速诊断
- 犬传染性肝炎病毒Hexon基因原核表达条件的优化与表达蛋白的活性被引量：1
- 2011年
- 【目的】为了提高犬传染性肝炎Hexon蛋白基因在大肠杆菌中的表达量,研究Hexon基因蛋白的最佳表达条件和表达蛋白的活性。【方法】在大肠杆菌菌株BL21(DE3)培养过程中,选择诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件观察对Hexon融合蛋白表达的影响,以确定最佳表达条件,并用Western-blot检测重组蛋白的生物活性。【结果】大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养2.25 h后,添加终浓度为2.0 mmol/L的IPTG,27℃培养8 h,Hexon重组蛋白表达量最高(1.67 mg/mL),所表达的重组蛋白能与犬传染性肝炎阳性血清相结合。【结论】在高浓度IPTG诱导和冷培养条件下,Hexon蛋白基因的表达量最高,表达出的重组蛋白具有很好的反应原性,为进一步研究六邻体蛋白的作用机理及亚单位疫苗的研究提供了实验基础。
- 简子健马素贞陶玉成翟少华赵森
- 关键词：原核表达表达条件优化重组蛋白生物活性
- 犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列，用Oligo6．0软件设计一对特异性引物，从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA，经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段，将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒，将其转入到大肠杆菌DH5a中，进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸，与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白，可被犬瘟热抗血清所识别，具有良好的抗原性。
- 申卫红马素贞陈胜男刘腾飞陶玉成简子健
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因克隆原核表达抗原性
- 犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析被引量：1
- 2010年
- 根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。
- 陈胜男马素贞陶玉成申卫红刘腾飞简子健
- 关键词：犬细小病毒VP2基因克隆原核表达反应原性
