艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10401-B)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 伊氏锥虫与路氏锥虫二重PCR鉴别检测方法的建立
- 2011年
- 目的建立伊氏锥虫和路氏锥虫二重PCR鉴别检测方法。方法根据路氏锥虫18S rRNA基因和伊氏锥虫RoTat 1.2VSG基因特异序列设计两对引物,通过优化PCR反应体系与反应条件,建立种特异二重PCR鉴别检测方法。结果用建立的二重PCR鉴别检测方法能特异扩增路氏锥虫和伊氏锥虫目的片段,大小分别为261bp和482bp;路氏锥虫和伊氏锥虫的最低检出量分别均达1个虫体,检测日本血吸虫、杜氏利氏曼原虫与瑟氏泰勒虫等其他血液寄生虫均为阴性。结论建立的二重PCR检测体系灵敏度高、特异性强,适用于路氏锥虫和伊氏锥虫的感染检测及流行病学调查。
- 王泽东刘畅范大为李巍苏利波宫鹏涛李建华李赫张国才张西臣
- 关键词：伊氏锥虫PCR检测
- 阴道毛滴虫14-3-3基因的克隆、表达及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的克隆阴道毛滴虫14-3-3基因并进行原核表达。方法根据阴道毛滴虫14-3-3基因序列设计特异性引物,以阴道毛滴虫cDNA为模板通过PCR扩增获得目的片段,与pMD-18-T连接,构建克隆载体pMD-Tv-14-3-3,经双酶切后回收目的片段,进行测序鉴定,然后与表达载体pGEX-T连接,构建原核表达载体pGEX-T-Tv-14-3-3,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blot鉴定表达产物。结果成功构建了阴道毛滴虫14-3-3基因原核表达载体pGEX-T-Tv-14-3-3;SDS-PAGE电泳检测显示,在IPTG诱导下,阳性菌高效表达分子质量单位为27ku的蛋白质;Western blot显示表达产物可被抗阴道毛滴虫多克隆血清识别。结论成功构建了阴道毛滴虫14-3-3基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达。
- 刘畅丁鹤刘鑫宫鹏涛李建华李淑红李赫张国才杨举张西臣
- 关键词：阴道毛滴虫克隆原核表达
- 阴道毛滴虫TPI基因克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建阴道毛滴虫TPI基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法根据阴道毛滴虫TPI基因开放阅读框设计并合成特异性引物,以阴道毛滴虫总cDNA为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T连接构建克隆载体pMD-TPI,经双酶切回收目的片段,与表达载体pGEX-T连接,构建原核表达载体pGEX-TPI,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE及Western blot鉴定表达产物。结果成功构建了阴道毛滴虫TPI基因原核表达载体pGEX-TPI;SDS-PAGE电泳显示,在IPTG诱导下重组质粒转化菌高效表达分子质量单位为27.5ku的蛋白质;Western blot显示表达产物可被抗阴道毛滴虫的多克隆血清识别。结论成功构建了TPI基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,为进一步研究阴道毛滴虫TPI基因功能奠定了基础。
- 丁鹤刘畅宫鹏涛李建华李赫张国才杨举李淑红张西臣
- 关键词：阴道毛滴虫克隆原核表达
- 阴道毛滴虫携病毒与无病毒株差异蛋白比较研究
- 本试验应用肝浸汤培养基对阴道毛滴虫携病毒与无病毒虫株进行体外纯培养,同时为排除病毒颗粒对试验的影响,利用Cs Cl密度梯度超速离心提取阴道毛滴虫病毒颗粒,通过超声破碎方法提取三者总蛋白进行比较;通过iTRAQ技术,经na...
- 丁鹤宫鹏涛刘畅李建华张国才杨举李赫张西臣
- 关键词：阴道毛滴虫ITRAQ磷酸丙糖异构酶锤头状核酶
- 文献传递
- 四种药物对路氏锥虫的体外杀灭效果试验
- 2011年
- 观察硝唑尼特、贝尼尔、咪唑苯脲、Trypan等4种药物在不同浓度、不同作用时间对路氏锥虫的体外杀灭效果。将这4种药物分别以5、10、20、40、80mg/ml的浓度作用于体外培养路氏锥虫,在第24h和48h观察杀灭效果。试验结果:4种药物对路氏锥虫都有杀灭效果,药效依次为硝唑尼特>贝尼尔>Trypan>咪唑苯脲,药物对路氏锥虫的杀灭率随着药物浓度增加和作用时间的延长而增高。硝唑尼特具有较强的杀灭作用,效果较好。
- 王泽东王明山李文超宫鹏涛张西臣
- 关键词：贝尼尔咪唑苯脲
- 阴道毛滴虫TvRab11C基因的克隆及原核表达
- 2012年
- 目的克隆并原核表达阴道毛滴虫TvRab11C(G3 Ras-related protein Rab11C)基因。方法利用PCR技术扩增阴道毛滴虫TvRab11C基因,与原核表达载体pET-28a连接,构建重组原核表达质粒pET-28a-TvRab11C,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物的可溶性,Western blot分析表达产物的反应原性。结果重组原核表达质粒pET-28a-TvRab11C经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30 000,主要以包涵体形式存在,可被抗阴道毛滴虫多克隆抗体识别。结论成功克隆了阴道毛滴虫TvRab11C基因,并在E.coli BL21(DE3)中获得了表达,为进一步研究TvRas基因和G蛋白与阴道毛滴虫寄生能力和致病性的关系奠定了基础。
- 刘畅丁鹤宫鹏涛李建华李淑红李赫张国才张西臣
- 关键词：克隆原核表达
