国家自然科学基金(81071786)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院贵州省人民医院重庆市中医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 95D细胞转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达被引量：2
- 2011年
- 目的利用人巨细胞肺癌高转移株(95D)裸鼠自发转移模型,分析CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B肿瘤转移相关基因在原发灶、循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)和转移灶中的差异表达。方法根据前期实验结果并利用GoSufer软件进行GO(gene ontology)分析,筛选出可能与肿瘤转移相关的基因CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B。利用稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人巨细胞肺癌细胞株95D/GFP,建立肺癌裸鼠自发转移模型,用流式细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分别纯化原发灶、外周血和转移灶中的肿瘤细胞,利用Real-time PCR技术检测上述基因在上述肿瘤细胞中的相对表达量。结果 CD9、RHOA、MYL12A基因在CTCs中表达较少,其次是肝转移灶,在皮下原发灶中表达较多;B2M基因在皮下原发灶、CTCs和肝转移灶中依次降低;PTOV1基因在CTCs中高表达,其次是皮下原发灶,肝转移灶中表达最少;HSPA1B基因只在原发灶中表达。结论 CD9、RHOA、MYL12A、B2M、HSPA1B基因可能是潜在的肺癌转移抑制基因,而PTOV1可能促进肺癌微转移。
- 李雪涛陈芳琳王欣欣孙建国陈正堂
- 关键词：循环肿瘤细胞荧光定量PCR
- 基于分子信标技术对活细胞内miR-155检测用于肺癌诊断被引量：2
- 2016年
- 目的探讨激光共聚焦检测miR-155 MB对肺癌活细胞中miR-155的识别成像功能。方法设计锁核酸修饰的miR-155分子信标(MB),同时设计不和任何序列结合的随机序列分子信标(RS MB)作为阴性对照;采用液相分子杂交试验验证其灵敏性和特异性,并进一步在肺肿瘤组织水平上验证。以纳米壳聚糖(CS)作为载体转染miR-155 MB,检测miR-155 MB对肺癌细胞中miR-155识别成像功能;同时采用miR-155抑制剂antagomir抑制miR-155的表达后检测miR-155 MB对肺癌细胞中miR-155的识别成像功能。结果液相分子杂交实验中miR-155+miR-155 MB组荧光强度为miR-155 MB组的58倍,RS+RS MB组荧光强度为RS MB组的43倍(P<0.05)。在肺鳞癌、腺癌组织中,激光共聚焦可检测到较强的荧光信号,阴性对照组未检测到明显荧光信号。纳米壳聚糖转染miR-155 MB后,可在肺癌活细胞中检测到较强的荧光信号,antagomir抑制miR-155的表达后,发现荧光信号明显降低(P<0.05)。结论利用分子信标技术可以实现通过识别肺癌活细胞中的miR-155并成像肺癌细胞,从而为发现肺癌细胞并用于肺癌诊断提供了新的理论基础。
- 朱海振郑召鹏江飞龙韩静李雪涛陈光朋李杭陈正堂
- 关键词：分子信标MICRORNA
- 奥曲肽偶联的壳聚糖纳米运输分子信标成像肺癌细胞的研究
- 2019年
- 目的设计并合成奥曲肽(OCT)偶联的壳聚糖(CS)分子信标(MB)纳米(CS-MB-OCT),研究CS-MB-OCT作为miR-155 MB载体识别miR-155并更好地成像肺癌细胞。方法免疫荧光检测肺癌细胞生长抑素受体2(SSTR2)的表达,以戊二醛为交联剂共价连接CS和OCT中的氨基并合成CS-MB-OCT,检测其吸收光谱、粒径等理化性质。激光共聚焦检测CS-MB-OCT作为miR-155 MB载体对肺癌细胞中miR-155的识别功能并成像肺癌细胞;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行验证,并通过荧光信号强度比较CS-MB及CS-MB-OCT的成像功能差别。结果免疫荧光检测发现,SSTR2在肺癌细胞中表达,可和OCT特异性结合。按质量比为4:7合成的CS-MB-OCT,其连接率高,平均纳米粒径(83.41±0.95)nm,粒径范围40-140 nm,适合基因转染。荧光成像表明,OCT偶联的CS-MB-OCT能和肿瘤细胞表面的SSTR2特异性结合,促使更多的MB对肺癌细胞中miR-155识别并成像肺癌细胞,和非偶联OCT的CS-MB组相比,孵育时间更短(仅需1 h),荧光信号更强(P<0.05),荧光信号强弱趋势与实时qRT-PCR检测的miR-155表达趋势较一致。结论合成的CS-MB-OCT纳米能和SSTR2特异性结合,更好地对miR-155进行识别并成像肺癌细胞,为肺癌的早期诊断提供了新方法。
- 朱海振郭熠罗青陈光朋张红丽吴小亮黄立敏陈正堂
- 关键词：肺肿瘤分子信标生长抑素受体奥曲肽
- 纳米壳聚糖递送分子信标成像肺癌细胞的研究被引量：3
- 2016年
- 目的采用纳米技术和分子信标(MB)技术,研究纳米壳聚糖(CS)作为miR-155 MB载体用于肺癌细胞成像的效果。方法设计并合成锁核酸修饰的miR-155 MB,采用自组装方法合成纳米壳聚糖分子信标复合物(CS-MB)并对其抗DNaseⅠ特性、粒径大小、zeta电位等理化性质进行检测。以CS作为载体转染miR-155 MB,激光共聚焦检测miR-155 MB对肺癌细胞中的miR-155的识别能力并进行成像,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)进行进一步验证,以随机序列分子信标(RS MB)作为阴性对照。结果按照7:1的质量比合成的CS-MB,其包封率高,能抵抗DNaseⅠ的降解,粒径小,带正电荷,适合基因转染。CS转染miR-155 MB后可在肺癌细胞中看到较强的红色荧光,RS MB组未检测到荧光信号(P<0.05),且荧光信号强弱趋势与实时荧光定量PCR检测的miR-155表达趋势较一致。结论 CS可作为miR-155 MB载体检测肺癌细胞中miR-155的表达并进行肺癌细胞成像,为肺癌的诊断提供了新思路和新技术。
- 朱海振俞婕江飞龙韩静李雪涛陈光朋李杭陈正堂
- 关键词：肺肿瘤分子信标
- 利用分子信标检测microRNA并成像肺癌干细胞的实验研究被引量：3
- 2016年
- 目的利用miR-155分子信标(MB)检测CD133+CD326+肺癌干细胞(LCSCs)中高表达的miR-155并成像肺癌干细胞。方法采用对A549细胞逆向诱导及紫杉醇富集的方法,通过流式细胞仪从A549细胞中分选出CD133+CD326+细胞,并对其干性进行鉴定。以壳聚糖纳米(CS)作为载体转染miR-155 MB,激光共聚焦显微镜检测miR-155 MB对LCSCs中miR-155的识别功能并成像,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进一步验证。结果分选的CD133+CD326+细胞在干细胞培养基中成球生长,干性相关基因CD133、CD326、OCT-4、Nanog表达为A549细胞的3.27、3.39、6.01、3.42倍(P<0.05),在细胞数为1×104数量下仍具备成瘤能力。CS转染miR-155 MB后在A549及LCSCs中均可看到较强的红色荧光,以LCSCs中荧光信号最强(P<0.05),且荧光信号强弱趋势与qRT-PCR检测的miR-155的表达趋势较一致。结论利用miR-155 MB能够检测LCSCs中高表达的miR-155并使其成像,为监测并发现肺癌干细胞提供新思路。
- 朱海振耿涛李雪涛林盛韩静江飞龙陈光朋谭诗生陈正堂
- 关键词：肿瘤干细胞肺肿瘤A549分子信标
