国家自然科学基金(30100005)
- 作品数:7 被引量:67H指数:5
- 相关作者:曹亚赵晓荣曾亮刘轶平陶永光更多>>
- 相关机构:中南大学第二军医大学香港大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- EB病毒潜伏膜蛋白1介导鼻咽癌细胞中转录因子Ets-1表达的实验研究被引量:8
- 2004年
- 目的 探讨鼻咽癌 (NPC)细胞中EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)是否可介导转录因子Ets 1的表达。方法 采用受四环素 (Dox)调控的、LMP1表达的NPC细胞系 (pTet on LMP1HNE2 ) ,用Dox诱导LMP1表达 ,并检测Ets 1的表达。采用逆转录PCR(RT PCR)方法检测Ets 1RNA水平的变化 ;应用Westernblot方法检测Ets 1蛋白质表达情况 ;应用免疫共沉淀和Westernblot方法检测Ets 1磷酸化水平 ;应用EMSA方法检测Ets 1的DNA结合活性。结果 在不同诱导时间、不同浓度Dox诱导的pTet on LMP1HNE2细胞中 ,LMP1表达与Ets 1RNA表达、蛋白质表达、苏氨酸磷酸化水平及DNA结合活性在一定范围内呈正相关。结论 LMP1可介导NPC细胞中Ets 1的转录活化和表达 。
- 曾亮刘轶平王海陶永光赵晓荣李嵬曹亚
- 关键词:EB病毒鼻咽癌癌细胞NPC爱泼斯坦-巴尔病毒
- EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中通过STAT3促进VEGF表达被引量:24
- 2004年
- 探讨了EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)是否通过STAT3调控诱导血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达 .利用蛋白质印迹的方法对HNE2、HNE2 LMP1以及瞬时转染STAT3显性负性突变体STAT3β的HNE2 LMP1细胞中VEGF含量进行检测 ,发现LMP1可以上调VEGF的表达 ,而STAT3β可以抑制VEGF的上调 ;利用LMP1可控表达细胞系tet on LMP1 HNE2进行LMP1时间和剂量诱导表达研究 ,发现VEGF可以随LMP1的动态表达而表达 ;将VEGF野生型报告基因和VEGF潜在的STAT3转录因子突变体报告基因与LMP1表达载体分别共转染研究发现 ,LMP1可以激活VEGF的转录 ,这种转录通过VEGF启动子区STAT3转录因子的结合位点发挥作用 ;电泳迁移率变动分析 (EMSA)确证了STAT3的这种DNA位点的特异性活性 .结果表明 :EB病毒编码的LMP1在鼻咽癌细胞中可以增加VEGF的转录和表达 。
- 谭运年陶永光李力力刘素芳唐敏顾焕华曹亚
- 关键词:EB病毒STAT3鼻咽癌
- EB病毒潜伏膜蛋白1调控鼻咽癌中转录因子c-Jun/Ets1间相互作用的实验研究被引量:1
- 2007年
- 目的:探讨LMP1对鼻咽癌中转录因子c-Jun和Etsl表达的影响,以及对Etsl和AP-1间相互作用的调控,为LMP1的致瘤机制提供新的依据。方法:选用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系pTet-on-LMP1 HNE2(L7细胞),通过针对c-Jun、Ets1的硫代反义寡核苷酸进行阻断,观察LMP1对c-Jun、Ets1表达的影响及其相互作用,蛋白质印迹法检测Ets-1、c-Jun蛋白质表达。免疫共沉淀(IP)结合Western blot研究c-Jun和Ets1相互结合的情况。结果:在不同浓度Dox诱导24 h后,Dox为0.6μg/mL时的c-Jun和Ets1表达均最强。随着Dox诱导时间的延长,L7细胞中c-Jun和Ets1的表达上调,至4 h达到最高。阻断c-Jun表达后,Ets1表达显著降低;阻断Ets1表达后,c-Jun表达显著降低。在Dox诱导的L7细胞总蛋白中,在IP沉淀的Ets1中存在c-Jun表达,并且在Dox 0.6μ/mL时最强;在IP沉淀的c-Jun中存在Ets1表达,同样在Dox 0.6μg/mL时最强。结论:EBV-LMP1可以调控转录因子c-Jun和Ets1表达,且在调控过程中可能存在c-Jun和Ets1间的相互作用。
- 曾亮刘轶平宋鑫赵晓荣曹亚
- 关键词:潜伏膜蛋白1转录因子鼻咽癌
- EB病毒编码潜伏膜蛋白1通过转录因子c-Jun和Ets1间信息交流调控鼻咽癌中基质金属蛋白酶9的表达被引量:12
- 2005年
- 目的 探讨在EBV -LMP1作用下,基质金属蛋白酶9(MMP 9)启动子区相邻的AP 1( 5 33)和Ets( 5 4 0 )结合位点对其转录活化的影响,并确定LMP1可通过c -Jun和Ets1间信息交流(cross -talk)调控鼻咽癌细胞中MMP 9的表达。方法 应用定点突变技术,在野生型MMP- 9 -CAT质粒的基础上,建立MMP- 9启动子区相邻Ets( 5 4 0 )结合位点和AP- 1 (- 5 33)结合位点单独突变体和共同突变体;在四环素调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7中,比较LMP1对这些突变体报道基因活性的影响。通过针对c- Jun、Ets1的硫代反义寡核苷酸进行阻断,采用GelatinZymography观察c -Jun、Ets1及其cross- talk对LMP1介导的MMP 9表达的影响。结果 与野生型MMP -9 -CAT质粒比较,突变体的报道基因活性均降低(P <0 .0 1 ) ,以MMP- 9 -CATAP -1 ( 5 33) /Ets( 5 4 0 )mt降低最为显著;在c Jun和Ets1反义寡核苷酸单独或共同阻断后,LMP1介导的MMP -9活性均降低,以共同阻断的作用最为明显。结论 EBV -LMP1可以通过转录因子c -Jun和Ets1间cross talk调控鼻咽癌细胞中MMP 9的表达。
- 曾亮刘轶平陶永光艾米丹赵晓荣曹亚
- 关键词:转录因子C-JUN基质金属蛋白酶9潜伏膜蛋白1EB病毒编码转录因子C-JUN硫代反义寡核苷酸MMP-9活性
- 用组织微阵列技术分析鼻咽癌变多阶段组织细胞周期蛋白D_1过表达被引量:17
- 2002年
- 为了探讨细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌变多阶段病变组织中的蛋白质表达与鼻咽癌变的关系 ,应用组织微阵列 (tissuemicroarray)技术 ,采用免疫组化方法检测CyclinD1在鼻咽癌旁粘膜上皮单纯性增生 /化生 (simplehyperplasia/metaplasia ,SH/SM )、异型增生 /化生 (atypicalhyperplasia/metaplasia,AH/AM )和鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma,NPC)的蛋白质表达 ,阳性表达率分别为 30 0 % (3/ 10 )、 90 0 % (18/ 2 0 )和6 2 9% (39/ 6 2 ) ,其中在异型增生 /化生中呈“一过性增高” .表明CyclinD1高表达可能为鼻咽癌发生过程中的早期事件 ;异型增生 /化生可能是鼻咽癌变的重要“关卡” .
- 宋鑫赵晓荣王一周建华关新元曹亚
- 关键词:组织微阵列技术过表达
- 应用cDNA微阵列技术研究EB病毒LMP1介导的鼻咽癌中转移相关基因的表达被引量:3
- 2004年
- 探讨EB病毒基因组编码的癌蛋白LMP1对鼻咽癌细胞中转移相关基因表达的影响。采用蛋白质印迹法检测在强力霉素 (Dox)诱导下 ,鼻咽癌细胞系 pTet on LMP1HNE2 (L7细胞 )中LMP1表达的时效和量效关系。应用cDNA微阵列技术建立诱导性LMP1介导鼻咽癌细胞中转移相关基因差异表达谱 ;运用RT PCR验证cDNA微阵列筛选差异基因表达的可靠性。与LMP1不表达的L7细胞比较 ,LMP1高表达的L7细胞中 7个基因的表达显著上调 ,1 2个基因的表达显著下调。随机选择其中 4个基因进行RT PCR ,结果显示 ,这些基因表达阳性 ,且与微阵列中的变化趋势一致。LMP1可能通过激活和
- 曾亮刘轶平赵燕唐发清石颖李嵬曹亚
- 关键词:潜伏膜蛋白1EB病毒CDNA微阵列鼻咽癌