国家自然科学基金(30470104)
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
- 相关作者：刘晓明张振颖孙田杨国玲安利佳更多>>
- 相关机构：大连医科大学附属第一医院大连理工大学沈阳市第七人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 32株孢子丝菌临床株两种基因分型方法比较
- 2008年
- 我们曾应用随机扩增多态DNA（RAPD）技术和rDNA限制性片段长度多态性（RFLP）-Southern印迹杂交方法进行申克孢子丝菌种内分型，国内外众多学者亦将线粒体DNA限制性片段长度多态性（mtDNA RFLP）方法用于孢子丝菌种内分型的研究中。本研究选用32株不同地区来源及不同临床类型的孢子丝菌菌株作为研究对象，分别用RAPD、mtDNA—RFLP方法进行分型，探讨申克孢子丝菌的基因学特征，研究基因型与菌种地区来源及疾病临床类型的相关性，并对目前已报道的2种基因分型方法进行比较。
- 孙田张振颖刘晓明
- 关键词：申克孢子丝菌基因分型方法限制性片段长度多态性随机扩增多态线粒体DNA
- 利用核糖体基因进行申克孢子丝菌基因分型被引量：7
- 2005年
- 目的利用探针与DNA印迹法对申克孢子丝菌进行种内分型,探讨其基因型特征与菌种来源及临床表现的关系。方法CTAB法提取来源于不同地区31株孢子丝菌临床分离株及1株标准株的基因组DNA,以真菌通用引物ITS4、NS5扩增标准株的rDNA序列作为探针,与经限制性内切酶ApaI酶切后的基因组DNA进行印迹杂交。结果杂交后形成多种清晰而稳定的带型,根据带型将31株孢子丝菌分为15种基因型(A-O型),其中A、B、C三型占51.61%。结论探针与DNA印迹法是孢子丝菌种内分型较为敏感而可靠的方法,该方法所分基因型的不同与菌种的地区来源及临床表现有一定的相关性。
- 张振颖刘晓明高晓蓉杨国玲金礼吉安利佳
- 关键词：申克孢子丝菌核糖体基因基因分型基因组DNA基因型特征
- 一株引起皮肤播散性孢子丝菌病的孢子丝菌临床分离株的基因型鉴定被引量：8
- 2005年
- 刘晓明张振颖金礼吉杨国玲王华林熙然安利佳
- 关键词：孢子丝菌病临床分离株基因型鉴定播散性皮肤
- 以S2-R2为引物PCR检测石蜡切片中的孢子丝菌
- 2009年
- 目的探讨应用特异性引物PCR方法检测石蜡切片中孢子丝菌的可行性。方法选取30份大连及10份长春地区临床疑诊孢子丝菌病的石蜡切片标本，采用改良的微波脱蜡、液氮研磨-CTAB破壁法提取DNA，以特异性引物S2-R2进行PCR扩增，与真菌培养结果进行比对。结果30份大连地区标本中22份见阳性PCR扩增产物（73．33％）。真菌培养阳性的22份标本中20份PCR出现阳性扩增产物（91％），真菌培养阴性的8份标本中2份PCR出现阳性扩增产物。10份长春地区标本7份见阳性PCR扩增产物（70％）。结论以S2-R2为引物的PCR适用于孢子丝菌病石蜡切片中病原菌的检测。
- 王东刘晓明张振颖
- 关键词：孢子丝菌病DNA引物
- 皮内与腹腔接种不同来源菌株对实验性小鼠孢子丝菌病的影响被引量：4
- 2006年
- 目的将不同来源的申克孢子丝菌菌株接种于免疫抑制处理后的小鼠皮内及腹腔,造成其实验性感染,观察其感染情况,研究不同菌株及不同接种途径对小鼠孢子丝菌病的影响。方法分别在小鼠皮内和腹腔注射孢子丝菌菌悬液0.1ml,约含1×107个孢子,观察3周。观察结束时处死小鼠取其血、脑、肺、肝、脾、肾、肠系膜、睾丸、腹膜进行真菌培养和组织病理检查。结果皮内和腹腔接种不同来源菌株的小鼠各器官感染率各不相同。播散株皮内接种组、固定株腹腔接种组、播散株腹腔接种组的各器官平均感染率分别为16.05%、18.89%、58.73%。播散株腹腔接种组与其他二组之间差异均有显著性,脾和睾丸是最易受累的器官。结论不同来源菌株可能毒力不同,播散型菌株具有更强的侵袭性。脾脏可能在宿主抗孢子丝菌感染中具有重要作用。
- 吕雪莲刘晓明
- 关键词：孢子丝菌病小鼠接种途径
- 四对孢子丝菌引物的特异性和敏感性评价被引量：2
- 2008年
- 目的筛选对孢子丝菌特异且敏感的引物。方法以50株不同地区来源的孢子丝菌临床分离株及标准株的基因组DNA作为研究样本，以毛霉、烟曲霉、念珠菌临床分离菌株基因组DNA作为对照，通过特异引物PCR扩增的方法筛选国内外文献中报道的4对孢子丝菌引物。所有受试孢子丝菌菌株均出现同一扩增产物，而对照菌株未出现者记为特异性引物，随后将基因组DNA模板倍比稀释后依次行PCR扩增，记录各引物出现阳性扩增结果时的最小模板浓度，检测敏感性。结果在相同PCR条件下，引物S2-R2、SSHF31-SSHR97及ITS3-SSP具有较好特异性，而引物SS3-SS4对孢子丝菌及念珠菌菌株均可扩增出同样大小的PCR产物。引物S2-R2的敏感性最好，基因组DNA模板浓度为5pg／μL时即可被检出。结论针对几丁质合成酶1基因的引物S2-R2为孢子丝菌特异且敏感的引物。
- 孙田张振颖刘晓明
- 关键词：DNA引物聚合酶链反应
- 聚合酶链反应-酶联免疫法筛选孢子丝菌特异性探针被引量：1
- 2014年
- 目的筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照,用聚合酶链反应-酶联免疫法(PCR-ELISA)对已报道的5个孢子丝菌特异性探针(U26852、U26866、U26866'、M85053及AF117945)进行筛选。记录各探针与合成DNA片段杂交底物显色与否及酶免疫测定指数(EI)值。结果 PCR产物测序证实5个探针均位于产物序列上;在相同的ELISA条件下,探针U26852显色最强,EI值最高。结论针对28Sr RNA的探针U26852是目前与孢子丝菌结合效率相对较高的探针。
- 孙田刘晓明张振颖
- 关键词：孢子丝菌探针
- 利用小鼠模型筛选孢子丝菌病快速诊断的特异性引物被引量：2
- 2008年
- 目的通过感染孢子丝菌的动物模型筛选文献报道的4对申克孢子丝菌特异性引物,以确定引物的敏感性和特异性。方法12只小鼠随机分成实验及对照组,实验组皮内注射申克孢子丝菌菌悬液,不同时间留取皮损组织,分别进行真菌培养和皮损组织DNA提取,PCR扩增。结果4对引物S2-R2,SSHF31-SSHR97,ITS3-SSP,SS3-SS4在感染申克孢子丝菌的小鼠皮损中均可扩增出目的条带,但引物SSHF31-SSHR97所需浓度较高,引物S2-R2的敏感性和特异性最好,与在体外培养条件下筛试的结果相同。结论针对几丁质合成酶基因I的引物S2-R2对申克孢子丝菌的敏感性和特异性最好。
- 王东张振颖刘晓明
- 关键词：申克孢子丝菌小鼠PCR
