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广州市登革1型病毒基因组测序及系统进化分析被引量：1: 2009年; 目的:对引起2002年广州登革热的登革1型病毒分离株(71/02GZ)进行全基因组测序和系统进化分析。方法:采用C6/36细胞培养71/02GZ,分别采用RT-PCR,5’RACE和3’RACE扩增基因组中编码区序列、5’和3’末端非编码区序列,PCR产物克隆到载体并测序,拼接成全基因组序列,分别基于E基因序列、E/NS1连接区240 nt、基因组中10 016 nt进行系统进化分析。结果:71/02GZ株基因组全长10 735 nt,两端非编码区(NCR)长度分别为94 nt和462 nt。基于E基因序列、E/NS1连接区240 nt、基因组中10 016 nt的进化分析结果显示71/02GZ株和2002年广州分离株(GZ01/02,GZ/218/2002),1995年广东分离株(GD23/95,GD01/95)、1995年广州分离株(GZ01/95)组成一个基因型;而1999年广东分离株(GD05/99),1997年广东分离株(GD14/97)和1980年广州分离株(GZ/80)属于另一个基因型;另外,71/02GZ株同1998年印度尼西亚分离株(98901530 DF DV-1-ID)的同源性最高。结论:71/02GZ株可能是印度尼西亚输入的。; 文金生江丽芳晏辉钧; 关键词：登革病毒测序系统进化分析

登革病毒抗原肽免疫小鼠诱导特异性CD4^+ T细胞反应: 2009年; 目的:探讨4条登革病毒抗原肽在不同遗传背景小鼠中的免疫原性。方法:4条登革病毒抗原肽(C45-57KLV-MAFIAFLRFL,E396-408SSIGKMFEATARG,NS323-35YRILQRGLLGRSQ和NS3141-155NREGKIVGLYGNGVV)中每条肽分别免疫BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠;3周后,处死小鼠并制备脾细胞悬液;不刺激或同样抗原肽刺激脾细胞后,采用细胞内细胞因子染色流式细胞术(ICS)检测小鼠脾细胞CD4+ T细胞中肽特异性产生IFN-γ或IL-4的CD4+ T细胞的百分比。结果:肽C45-57可诱导BALB/c小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(0.72%±0.04% vs 0.04%±0.02%,P<0.05)而肽E396-408则诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.09%±0.01%vs0.01%±0.01%,P<0.05);肽E396-408、NS323-35和NS3141-155均可诱导C57BL/6小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(分别为0.31%±0.03%vs0.02%±0.01%,P<0.05;0.21%±0.03% vs 0.04%±0.01%,P<0.05;0.44%±0.04% vs 0.02%±0.01%,P<0.05),而肽C45-57可诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.45%±0.05% vs 0.02%±0.02%,P<0.05)。结论:肽C45-57和E396-408在BALB/c小鼠中具有免疫原性而肽C45-57、E396-408、NS323-35和NS3141-155在C57BL/6小鼠中具有免疫原性。; 段志良孟锐峰文金生; 关键词：登革病毒 CD4+T细胞

人白细胞抗原-A＊0201限制性丙型肝炎病毒细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定被引量：3: 2010年; 目的鉴定人白细胞抗原（HLA）-A＊0201限制性HCV-CTL表位.方法基于RANKpep和SYFPEITHI细胞表位预测软件预测结果,选择合成6条候选CTL表位.研究候选CTL表位肽与T2细胞表达的HLA-A＊0201分子的亲和力,进一步采用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）和细胞内细胞因子染色（ICS）实验研究HLA-A＊0201高亲和力肽在HLA-A＊0201阳性HCV感染者的外周血单个核细胞（PBMC）中刺激CTL反应情况.结果在6条候选CTL表位肽中,肽C_181（LLSCLTTPV）和NS2_172（VLQAGLIRV）与HLA-A＊0201分子有高亲和力,其亲和力随肽浓度增加而升高.在10例HLA-A＊0201阳性HCV-1b感染者每1×105PBMC中,肽C_181和NS2_172刺激后,特异性分泌IFN-γ细胞的斑点形成细胞数（SFC）分别为0～19和0～20.肽C_181和NS2_172特异性IFN-γ＋CD8＋T淋巴细胞占CD8＋T淋巴细胞的比例分别为0.006%～0.065%和0.005%～0.080%.结论肽C_181（LLSCLTTPV）和NS2_172（VLQAGLIRV）为HLA-A＊0201 限制性HCV-CTL表位.; 陈俊段志良巩文词陈永平张丽芳张琴文金生; 关键词：肝炎病毒属酶联免疫斑点技术

丙型肝炎病毒CTL表位的HLA-A2限制性及其免疫学效应研究被引量：3: 2009年; 目的研究前期鉴定的5条丙型肝炎病毒（HCV）特异忡细胞毒性T细胞（CTL）表位的HLA—A2限制性及其免疫学效应。方法基于1、2细胞株，采用MHC-肽复合物稳定性试验研究前期鉴定的HCV特异性CTL表位与HLA—A2分子的亲和力；采用细胞内细胞因子染色（intracellular cytokine staining，ICS）和ELISPOT研究上述HLA—A2限制性CTL表位体外刺激HLA—A2阳性外周血单个核细胞（PBMC）产生肽特异性CTL的效应；采坩CTL杀伤试验研究上述肽特异性CTL杀伤靶细胞（负载相同肽的T2细胞）的效应。结果前期研究鉴定的5条CTL表位肽中，NSdb_78（SMMAF-SAAL）和NS5a_367（TVSSALAEL）与HLA—A2分子有高亲和力（FI〉1）；ELISPOT结果显示NS4b_78（SMMAFSAAL）和NS5a_367（TVSSALAEL）可诱导高水平的分泌IFN-γ的效应细胞[分别为（60±6）SFC／10^4 PBMCvs（4±1）SFC／10^4 PBMC，P〈0．001：（10±3）SFC／10^4 PBMC vs （2±1）SFC／10^4 PBMC，P〈0．001]；ICS结果证实这两条肽刺激HLA—A2阳性PBMC后，在CD8^＋T细胞中产生了高百分比的CD8^＋ IFN-γ^＋ T[分别为（2．33±0．22）％vs（0．05±0．01）％，P〈0．001；（0．36±0．06）％vs（0．03±0．01）％，P〈0．001]；并且，肽特异性CTL可特异性杀伤负载相同肽的T2细胞。结论NS4b_78（SMMAFSAAL）和NS5a_367（TVSSALAEL）受HLA—A2限制，并具有较好的免疫原性。; 段志良张丽芳张琴李文姝朱珊丽陈俊夏克栋文金生; 关键词：细胞毒性T细胞 HLA-A2

丙型肝炎病毒非结构区5个细胞毒性T细胞表位的鉴定被引量：1: 2009年; 目的采用T细胞表位预测软件结合体外实验鉴定丙型肝炎病毒（HCV）特异性细胞毒性T细胞（CTL）表位。方法采用T表位预测软件Rankpep预测HCV特异性CTL表位，选择候选CTL表位加以合成；用候选CTL表位肽分别刺激HCV感染者以及健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC），采用酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的斑点形成细胞（spots forming cells，SFC）的水平，采用细胞内细胞因子染色（intracellularcytokinestaining，ICS）检测PBMC中肽特异性IFN-γ＋CD8＋T细胞的水平。结果用5条候选CTL表位肽[NS3450（TVPQ—DAVSR）、NS3594（GPTPLLYRL）、NS4b78（SMMAFSAAL）、NS5a416（SEENVSVVF）和NS5a367（TVSSALAEL）]分别刺激10个HCV感染者和2个健康者的PBMC后，健康者的PBMC不产生IFN-γ，而7个HCV感染者的PBMC产生IFN-γ；HCV感染者的PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的细胞的频率为（5～36）SFC／10^5PBMC，肽特异性IFN-γ＋CD8＋T细胞占总CD8＋T细胞的百分比为0．02％～0．25％。结论EL／SPOT结果和ICS结果证实5条肽NS3450、NS3594、NS4b78、NS5a416和NS5a367为全新的HCV特异性CTL表位。; 段志良陈永平孟锐峰姜爱英陈俊郑明华文金生; 关键词：丙型肝炎病毒细胞毒性T细胞表位

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国家自然科学基金(30800050)

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