国家杰出青年科学基金(30801184)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 人Tenascin-R_(aa454-1069)蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2009年
- 目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人Tenascin-R EGFL结构域(Tenascin-Raa454-1069)的融合蛋白,并制备相应的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从PMD18-T-TNR获得Tena-scin-Raa454-1069编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-Tenascin-Raa454-1069融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069原核表达载体,原核蛋白Tenascin-Raa454-1069以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的融合蛋白,蛋白浓度为1 600 mg/L,制备的抗Tenascin-Raa454-1069多抗效价高达1∶1.6×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度Tenascin-Raa454-1069蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究Tenascin-R的生物学功能提供实验基础。
- 吕俊徐如祥姜晓丹胡昌辰柯以铨蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎
- 关键词：原核表达多克隆抗体中枢神经系统
