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AFP调控的携带Mn-SOD基因的腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用被引量：4: 2011年; 利用改造后的溶瘤腺病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd作为载体携带治疗基因Mn-SOD,得到目的病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd-MnSOD;通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的特异杀伤能力和对肝正常细胞的安全性;Hoechst33342染色实验观察细胞凋亡的现象。结果显示:经目的病毒感染后肝癌细胞出现明显的病变现象和生长抑制,而肝正常细胞基本无病变现象出现,表明构建的目的病毒具有较高的安全性和很好的靶向性。此外目的病毒处理能引起特异性的肝癌细胞凋亡,所携带治疗基因Mn-SOD能通过促进肿瘤细胞的凋亡达到抑制肿瘤细胞生长的效果。; 孔彦平张静肖睿娟郭国英王毅刚; 关键词：腺病毒肝癌细胞

肿瘤靶向腺相关病毒携带干扰素β和TRAIL对A549肺癌移植瘤的增强治疗效应(英文)被引量：6: 2010年; 干扰素β(IFN-β)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是有效抗癌药物。腺相关病毒(AAV)为目前最有应用前景的基因转移载体之一。利用AAV携带IFN-β和TRAIL基因并置于hTERT启动子控制下分别构建成肿瘤靶向病毒AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL,且单个IFN-β或TRAIL基因治疗发挥了一定的抗癌效果。将AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL进行联合,旨在研究其对A549肺癌细胞体内外的生长抑制效应。ELISA法检测了AAV-hTERT-IFN-β感染A549细胞后分泌型IFN-β的表达;MTT法检测AAV-hTERT-IFN-β联合AAV-hTERT-TRAIL对肿瘤细胞的生长抑制作用;凋亡细胞染色和流式细胞仪分别检测了AAV-hTERT-IFN-β、AAV-hTERT-TRAIL及其联合对A549细胞的凋亡效应;进一步评价了联合AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL对A549裸鼠移植瘤的抑癌效果。结果显示,联合治疗优于任一单独治疗并且导致了增强的肿瘤细胞毒性和凋亡诱导效应。更进一步显示,联合AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL治疗发挥了重要的抑制裸鼠移植瘤效果甚至消除全部移植瘤,为探究IFN-β和TRAIL联合抗癌的分子机制奠定了基础。; 王毅刚何凌峰何国清孔彦平刘旭平蔡海波刘新垣谭文松; 关键词：干扰素Β TRAIL 腺相关病毒肺癌抗肿瘤效应

二氯乙酸钠联合ONYX-015对结肠癌细胞株的杀伤性研究被引量：1: 2010年; 研究小分子药物二氯乙酸钠(dichloroacetate,DCA)联合ONYX-015对人结肠癌细胞株的体外杀伤效果,实验采用MTT法检测DCA、ONYX-015以及二者联合对结肠癌细胞株HCT116、SW620、HT29以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对联合处理的细胞进行凋亡形态学观察;通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况。实验结果表明:DCA联合ONYX-015处理4d后对结肠癌细胞株HCT116、SW620的增殖抑制率达到75%,对HT29也达到近54%的杀伤效率,并且联合治疗并未增加对人正常细胞株L02的毒性。同时结晶紫实验也证明联合治疗对肿瘤细胞的杀伤力要强于用DCA或ONYX-015单独处理。; 肖连立谢国良娄军李新牛娜钱静王毅刚; 关键词：结肠癌细胞株

大黄素抑制人鼻咽癌细胞CNE增殖及诱导凋亡作用被引量：5: 2010年; 大黄素(emodin)是从大黄中提取的一种天然蒽醌类衍生物,具有明显的抗肿瘤活性。研究大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖的抑制作用以及其诱导凋亡的机制,对其抗肿瘤机制的研究具有积极的意义。利用MTT法检测大黄素对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制作用,通过Hoechst33342染色,观察大黄素处理人鼻咽癌细胞株的形态学变化,Western blot研究其诱导肿瘤细胞凋亡通路的变化。结果表明,对于试验细胞株,大黄素杀伤肿瘤细胞的作用,随大黄素浓度升高和作用时间的增加,呈剂量依赖性和时间依赖性;通过倒置显微镜观察细胞在给药后的直观形态学变化,给药后通过Hoechst33342染色进一步证明大黄素可诱导凋亡。给药后通过Western blot对其作用机制的初步探索表明,大黄素处理后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)发生剪切,增强Caspase依赖性细胞凋亡通路的信号。大黄素单药可以抑制人鼻咽癌细胞CNE的增殖,表明其有可能成为一种有效的治疗鼻咽癌的药物。; 钱静李新郭国英郑水娣肖连立牛娜王毅刚; 关键词：大黄素鼻咽癌 CNE 凋亡

GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用: 2011年; 研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用。采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化。结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用。说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤。; 谢国良肖连立李新何国清陈磊席璐章康健王毅刚; 关键词：溶瘤腺病毒 TRAIL 氯化锂

HSV-tk联合GCV自杀系统对肝癌细胞株Huh-7杀伤作用的研究被引量：2: 2011年; 单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessi mplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统。本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告基因反映慢病毒的转染效率;基因组PCR及RT-PCR检测转染Huh-7细胞中的HSV-tk基因的整合及表达;MTT检测不同浓度药物处理后的细胞存活率;最后HSV-tk+与HSV-tk-的Huh-7细胞以不同比例混合,MTT测定GCV作用后细胞的存活率。结果表明,HSV-tk/GCV系统作用于Huh-7细胞后,细胞出现明显的凋亡现象,旁观者效应比较明显。; 郭国英谢国良何国清孔彦平王毅刚; 关键词：HSV-TK GCV 旁观者效应

融合蛋白EGFP-PPA原核表达及标记肿瘤细胞研究被引量：2: 2010年; 肿瘤细胞糖基化改变是非常普遍的现象,与恶性肿瘤的发生发展有着密切的关系。掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA)是一种甘露糖特异性结合凝集素,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein EGFP),通过基因工程技术形成融合基因,并在大肠杆菌中表达纯化了EGFP-PPA融合蛋白。实验结果表明,此融合蛋白可以识别实体肿瘤细胞表面的一部分标志,如Hep3B、Hu7、PLC、BEL-7404以及A549,而不能识别肝正常细胞L02,提示实体瘤细胞表面显露的甘露糖残基被此融合蛋白所识别,说明PPA识别具有甘露糖表型的实体瘤细胞表面的一部分,这些实验结果为进一步阐明甘露糖显露细胞在肿瘤发生发展中的作用提供了新的研究手段。; 李新牛娜李娜陈磊路巧然席璐李恭楚; 关键词：融合蛋白甘露糖肿瘤

SIK1在巨噬细胞中调控IL-6及IL-12表达的研究: 2011年; 通过LPS(lipopolysaccharide)刺激巨噬细胞,发现盐诱导激酶(Salt Inducible Kinase 1,SIK1)基因的表达随着刺激时间呈现一定的变化趋势。提示SIK1在免疫系统中可能具有潜在的功能。实验构建了Sik1基因过表达的腺病毒载体Ad-Sik1,通过感染RAW264.7细胞过表达Sik1基因,采用荧光定量PCR、ELISA及Western Blot等方法,分别从mRNA及蛋白质水平探讨SIK1与免疫炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-12(Interleukin-12)之间的关系。实验结果表明:SIK1能够上调免疫炎症因子IL-6I、L-12的表达。这将为免疫调节的研究及一些免疫相关疾病的临床诊断与治疗提供一定的理论依据。; 娄军欧阳川郑明珠姚韵靓王珞仇庆周秀梅; 关键词：LPS刺激 IL-6 IL-12

K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究: 2010年; 腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01)。; 牛娜贾晓渊路巧然李新陈磊陈侃; 关键词：K562 K562/ADR CAR

蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制被引量：4: 2010年; 研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制。实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western印迹分别检测MG132对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响。此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性。提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择。; 张静刘锡君李伟孔彦平章康健周秀梅; 关键词：蛋白酶体抑制剂肝癌细胞内质网应激 CASPASE-12

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