广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301100)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：朱惠莲张珍真王娴常颖王佳佳更多>>
- 相关机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人血凝块提取基因组DNA碘化钾法建立被引量：3
- 2011年
- 目的通过与酚/氯仿法比较,建立一种快速、经济、高效从人血凝块提取基因组DNA的简易方法。方法采用双蒸水低渗破碎红细胞,碘化钾直接、快速裂解白细胞及其核膜,氯仿/异戊醇沉淀蛋白质及残存细胞碎片,最后经异丙醇和乙醇沉淀基因组DNA。结果采用该法提取的基因组DNA浓度为(46.4±8.8)mg/L,吸光度值A260/A280为(1.79±0.23),与酚/氯仿法(46.1±8.3,1.78±0.22)比较差异无统计学意义(P>0.05);2种方法提取基因组DNA凝胶电泳条带完整,PCR扩增目的条带完整,能够满足分子生物学实验要求。结论碘化钾法是一种快速、简便、经济、高效提取人血凝块基因组DNA的方法,可以广泛运用于大规模人群基因组学研究。
- 魏俊张珍真朱惠莲黄演林林森彬刘鹏
- 关键词：DNA提取碘化钾
- HPLC-MS/MS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究被引量：6
- 2011年
- 【目的】建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血浆甜菜碱和游离胆碱水平,并研究血浆中两种物质的稳定性。【方法】以d9-氯化胆碱、d9-甜菜碱为内标,血浆经乙腈除蛋白后,采用SiO2柱(2.1mm×100mm,5μm)乙腈-甲酸铵缓冲液(15mmol/L,pH=3.5)等度洗脱,经电喷雾电离,选择多反应监测模式(MRM)同时测定血浆中甜菜碱和游离胆碱。【结果】血浆中甜菜碱和游离胆碱得到良好分离,最低定量限均为0.62μmol/L,线性范围均为0.62～400μmol/L。对游离胆碱的测定,日内相对标准差(RSD)为5.10%～5.85%,日间RSD为4.54%～13.26%,回收率94.15%～103.70%;对甜菜碱的测定,日内RSD为3.60%～7.30%,日间RSD为2.70%～8.10%,回收率90.03%～103.88%。稳定性研究中,游离胆碱和甜菜碱浓度随保存时间及温度增加,游离胆碱在血浆分离48h内变化小于15%,甜菜碱超过3h后变化即大于15%。3个反复冻融循环内游离胆碱浓度稳定;甜菜碱变化明显,第一个冻融循环后即增加至原始浓度3倍。【结论】高效液相色谱串联质谱法同时检测血浆中甜菜碱和游离胆碱是一种快速、准确且灵敏的方法。血浆保存时应注意保存温度、时间及反复冻融对血浆中甜菜碱和游离胆碱浓度的影响。
- 张珍真王佳佳谭炳炎王娴郑琳常颖朱惠莲
- 关键词：血浆甜菜碱稳定性
