湖南省教育厅优秀青年基金(09B087)
- 作品数：9 被引量：14H指数：3
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- TOCP对人成神经瘤细胞SH-SY5Y的氧化损伤作用被引量：6
- 2011年
- 目的研究三邻甲苯基磷酸酯（TOCP）对人成神经瘤细胞（SH．SY5Y）的氧化损伤作用。方法常规方法培养SH-SY5Y细胞，经TOCP染毒，分别检测不同浓度（0～1．0mmol／L）TOCP作用48h以及相同浓度FOCP（0．5mm01／L）作用不同时间后（0、24、48、72h）细胞内丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）的含量变化，MDA舍量用硫代巴比妥酸法（TBA）检测，CAT含量用可见光分光光度法检测。结果TOCP染毒SH-SY5Y细胞48h均半数抑制浓度（IC50）为0．77mmol／L。随着TOCP染毒浓度的增高，细胞内MDA的含量逐渐增高，CAT含量逐渐下降，这种变化趋势呈现明显的剂量一效应关系（P〈0．05）。随着TOCP染毒时间的延长，细胞内MDA和CAT含量均呈明显的时间一效应关系。结论TOCP对SH-SY5Y细胞有明显的氧化损伤作用。
- 龙鼎新伍一军蒋伟
- 关键词：SH-SY5Y细胞丙二醛过氧化氢酶
- pLC3-EGFP真核表达载体的构建与表达
- 2011年
- 目的构建人微管相关蛋白轻链3(LC3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的真核表达载体(pLC3-EGFP)并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增全长LC3基因,将产物LC3 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-N3,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定。将表达质粒pLC3-EGFP转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,western blot检测LC3-EGFP蛋白的表达。结果测序结果表明,从人胚肾HEK293T细胞中所获得的LC3 cDNAs含有378个碱基,与Genbank(NM_022818)序列完全一致。构建的重组真核表达载体pLC3-EGFP经鉴定证实LC3基因已完全正确亚克隆到pEGFP—N3;LC3-EGFP融合蛋白能够在HEK293T细胞中表达,并主要定位于细胞质中。结论成功构建具有报告基因—增强绿色荧光蛋白基因的重组真核表达载体pLC3-EGFP并在HEK293T细胞中很好地表达,实验结果为研究细胞自噬的进程及机制提供了实验基础。
- 龙鼎新李小玲
- 关键词：自噬LC3克隆
- 三邻甲苯基磷酸酯毒性作用研究进展被引量：1
- 2014年
- 三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)属有机磷酸酯类化合物,剧毒,具有多器官毒性,主要表现在神经系统、睾丸、肝脏和免疫系统;其中以神经系统为主要靶组织,以产生迟发性神经毒性(OPIDN)为特征,造成机体永久性损伤。TOCP中毒没有特效药治疗,禁用和限量为主要预防措施。全面了解TOCP毒性作用,有助于对机制的进一步研究,为临床治疗TOCP中毒患者提供参考,对其他有机磷毒物研究有重要借鉴意义。
- 肖双龙鼎新
- 关键词：迟发性神经毒性钙
- 稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建
- 2014年
- 为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达。经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系。和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1mRNA表达下降71.28%±1.45%(P<0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50%±2.63%(P<0.05)。提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型。
- 魏传杰肖双江岚谭琰黄波龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞克隆
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。
- 江岚李小玲魏传杰肖双谭琰刘瑶龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞PKC
- 三邻甲苯基磷酸酯的神经毒性研究进展被引量：3
- 2017年
- 三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)是众多有机磷酸酯类化合物代表之一,有多器官毒性作用主要表现在对动物生殖毒性、免疫毒性和神经毒性。本文主要综述了TOCP分子理化特性、TOCP神经毒性作用的研究,并从骨架蛋白含量改变、氧化应激、细胞凋亡与细胞自噬等方面对TOCP神经毒性作用机制进行了综述。
- 江岚江岚
- 关键词：神经毒性
- 稳定表达绿色荧光蛋白的COS7细胞系的筛选和鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的COS-7细胞系,为相关实验对照提供方便。方法常规方法培养COS-7细胞,将含pEGFP-N3基因的质粒转染COS-7细胞,G418抗性筛选,并用荧光显微镜进行跟踪检测,挑选耐药单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株。结果 G418筛选的最适浓度为500μg/mL。筛选到的COS7-GFP克隆荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,细胞的生物学性状保持稳定,通过Western blot能检测到GFP蛋白。结论成功筛选并建立了稳定表达的COS7-GFP细胞系。
- 龙鼎新李小玲温元武
- 关键词：GFP转染细胞克隆
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞形态分化的影响,为更全面的了解TOCP的毒性提供依据。方法选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型,以全反式维甲酸(ATRA)为诱导分化工具药物,在诱导中以及诱导后以不同浓度TOCP作用,动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化,台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。结果 ATRA对SH-SY5Y细胞作用7 d可导致细胞出现长出较长突起的分化特征,在诱导分化过程中及诱导分化后以不同剂量TOCP作用于细胞,各剂量组与对照组相比,无论是突起长度还是分化细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),其中,0.6 mmol/L组抑制效果最强。结论 TOCP可抑制SH-SY5Y细胞的分化,并呈现一定时间和剂量依赖关系。
- 呼丹李小玲龙鼎新
- 关键词：全反式维甲酸分化
- pGenesil-1-Atg7-shRNA真核表达载体的构建
- 2014年
- 目的利用RNA干扰技术,构建pGenesil-1质粒载体介导靶向自噬基因Atg7的shRNA真核表达载体。方法根据GenBank中Atg7基因的cDNA序列(NM-001136031),设计有小发卡结构的三条寡核苷酸序列,连接到空载体pGenesil-1中,转化到JM109菌株,选取阳性克隆,进行酶切鉴定和DNA测序分析。结果经双酶切结果显示合成的shRNA序列成功连接到pGenesil-1质粒载体中,DNA测序结果证实干扰序列和目的序列相同,重组载体pGenesil-1-Atg7-shRNA构建成功。结论成功构建干扰人Atg7基因的重组表达载体,为研究Atg7蛋白的生物学功能提供了研究基础。
- 魏传杰肖双夏炎龙鼎新
- 关键词：RNA干扰自噬
