国家级星火计划(2012GA660003)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：姜秀云高云航徐凤宇么乃全马红霞更多>>
- 相关机构：吉林农业大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目国家级星火计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭疫里氏杆菌外膜微孔蛋白基因的克隆和序列分析及PCR检测方法的建立被引量：5
- 2013年
- 根据GenBank中的鸭疫里氏杆菌(RA)外膜磷酸盐选择性微孔蛋白(Porin)基因序列设计特异性引物,以血清1、2、6、10、11、13、14和17型RA菌株的基因组DNA为模板均扩增出大小为1 212bp的目的片段,序列比对显示该基因在8种血清型菌株间同源性均大于99.6%。针对保守性最高的357bp片段设计特异性引物,建立了PCR检测方法,对鸭致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、鸭巴氏杆菌及鸭肝炎病毒均未扩增出目的条带,表明该方法具有较高的特异性;敏感性试验显示最小检出量为73.96pg的基因组。应用建立的PCR方法对分离自吉林、河北及北京的8个菌株进行扩增,均在357bp处扩增出清晰的目的条带,与细菌分离鉴定的符合率达100%。本研究为RA的鉴定提供了新方法,为RA外膜微孔蛋白的后续研究提供了理论依据。
- 么乃全王全凯姜秀云徐凤宇于丹孟轲音高云航
- 关键词：鸭疫里氏杆菌聚合酶链式反应
- 鹅细小病毒VP3与禽分枝杆菌副结核亚种hsp65融合基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 为了构建鹅细小病毒(GPV)的VP3与禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)的hsp65融合基因重组真核表达载体,试验克隆了VP3和hsp65基因,并将二者先后插入真核表达载体pVAX1中,构建重组质粒pVAX1-VP3和pVAX1-hsp65-VP3。酶切和PCR鉴定表明表达载体构建正确,用脂质体将二者分别转染入Vero细胞中,间接免疫荧光检测其在细胞中的表达。结果显示,转染细胞表面可见绿色荧光,说明hsp65、VP3基因表达成功。试验为GPV的DNA疫苗研制及hsp65分子佐剂在动物医学中的应用奠定基础。
- 张岩姜秀云马红霞高云航徐凤宇
- 关键词：鹅细小病毒VP3P65
- 禽分枝杆菌副结核亚种hsp65与鹅副黏病毒HN融合基因真核表达载体的构建与表达
- 2014年
- 为探索禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)的热休克蛋白65(hsp65)对鹅副黏病毒(GPMV)血凝素神经氨酸酶(HN)的分子佐剂作用及构建GPMV DNA疫苗,针对GPMV的HN基因和MAP的hsp65基因设计引物,PCR克隆扩增两个基因,分别将二者先后与真核表达载体pVAX1连接,构建了pVAX1-HN、pVAX1-hsp65-HN,并通过PCR、酶切和序列鉴定所获重组质粒;应用脂质体法将其转染至Marc-145细胞,RT-PCR和间接免疫荧光试验证实hsp65和HN在Marc-145细胞中获得了表达。本研究为制备新型GPMV DNA疫苗及探索hsp65在DNA疫苗中的应用奠定了基础。
- 么乃全李淑君姜秀云马红霞高云航王春芳胡静涛徐凤宇胡桂学
- 关键词：鹅副黏病毒热休克蛋白65
