山东省科技攻关计划(2007GG30002025)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达被引量：3
- 2011年
- 目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性。方法随机选取三色健康豚鼠,组织块法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取第3～6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,MTT法观察转染后12h、24h、48h、3d、5d、7d细胞增生能力。提取总RNA,二步法逆转录-聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染3d、5d、7d TIMP-2基因转染组成纤维细胞的增生速度分别为0.6724±0.0092、0.7963±0.0060、0.8462±0.0064,明显快于正常对照组成纤维细胞(0.5810±0.0120、0.6525±0.0072、0.7129±0.0132),差异均具有显著统计学意义(均为P<0.01)。转染48h MMP-2mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少,达到最低,除转染12h与24h之间外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间MMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TIMP-2mRNA表达在转染48h时即开始增加,除12h与24h外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间TIMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞抑制MMP-2mRNA的表达,可在一定程度上阻止近视发展中巩膜组织的丢失与重塑。
- 牟丽丽刘桂香王玲韩明磊高岩
- 关键词：转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2
- 豚鼠形觉剥夺早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2及其抑制剂动态表达被引量：3
- 2010年
- 目的探讨豚鼠形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia,FDM)早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2,TIMP-2)mRNA的表达。方法4周龄三色豚鼠50只,随机分成实验组和正常对照组各25只,实验组又随机分为5组,单眼形觉剥夺(monocular deprivation,MD)右眼1、4、7、14、21 d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照组。各组豚鼠进行检影验光和A超测量眼轴长度。提取后极部巩膜总RNA,二步法逆转录聚合酶链反应检测各组后极部巩膜MMP-2及TIMP-2 mRNA的表达水平。结果除1 d外,各组MD后极部巩膜MMP-2 mRNA的表达与正常对照组、自身对照组差异均有统计学意义(P<0.05),MD组间差异也有统计学意义(P<0.01);而TIMP-2 mRNA的表达则逐渐下降。各自身对照组MMP-2、TIMP-2 mRNA的表达与MD组变化趋势大致相同。结论MMP-2/TIMP-2之间动态平衡失调可能是启动豚鼠FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的重要因素。
- 刘桂香王玲彭鑫杨蓓高岩
- 关键词：近视形觉剥夺基质金属蛋白酶2
