福建省医学创新课题(2012-CXB-29)
- 作品数：9 被引量：56H指数：5
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- 实时荧光定量PCR检测胃癌SOX2的表达及其临床意义被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨性别决定相关基因簇2(SOX2)表达与胃癌发生、发展和转移的关系及其临床意义。方法:用Trizol提取52例胃癌组织及对应正常胃黏膜组织的mRNA,并将其逆转录为cDNA。用实时荧光定量PCR方法检测SOX2 mRNA的表达,并分析SOX2基因的表达水平与患者临床病理指标的关系。结果:胃正常黏膜组织中SOX2 mRNA的表达是胃癌组织的2.24倍,两者差异有统计学意义(t=3.22,P=0.002 6)。高分化和中分化的胃癌组织中SOX2 mRNA表达量高于低分化的胃癌组织(t=3.09和2.87,P均<0.05),肿瘤浸润深度为T1+T2的胃癌组织中SOX2 mRNA表达量是T3+T4癌组织的2.57倍(t=2.16,P<0.05),淋巴结无转移组SOX2mRNA表达量是转移组的2.69倍(t=2.54,P<0.05)。与Ⅰ+Ⅱ期的胃癌组织比较,Ⅲ+Ⅳ期胃癌组织的SOX2 mRNA表达量明显降低(t=2.59,P=0.014)。SOX2 mRNA表达量与患者的性别、年龄无明显关系(P>0.05)。结论:SOX2 mRNA表达水平的降低与胃癌的发生、浸润和转移相关,有望成为胃癌诊断及预后判断的一个指标。
- 黄正接江龙尤俊曾岳岳吴炳霖陈百胜冯庆钊罗琪
- 关键词：胃肿瘤实时荧光定量PCR
- 下调Oct4基因表达对MDA—MB-231乳腺癌干细胞生物学特性的影响被引量：10
- 2015年
- 目的探讨下调转录因子Oct4表达水平对MDA-MB-231乳腺癌干细胞生物学特性的影响及其意义。方法应用无血清悬浮培养法从乳腺癌MDA-MB-231细胞中分离富集乳腺癌干细胞，流式细胞术检测CD44^＋／CD24^-1/low细胞亚群的比例，小鼠皮下成瘤实验和紫杉醇抑制实验鉴定无血清悬浮培养法获得的MDA—MB-231乳腺癌干细胞，逆转录聚合酶链反应和Western blot法检测MDA—MB-231乳腺癌干细胞中Oct4的表达情况，并利用小分子RNA干扰片段干扰Oct4的表达，干扰实验设空白对照组（不转染任何siRNA）、阴性对照组（转染对细胞无任何干扰作用的siRNA序列）和Oct4siRNA组（转染对Oct4基因有干扰作用的siRNA序列）。分别利用四甲基偶氮唑蓝法、Transwell小室法和紫杉醇抑制实验，检测干扰Oct4表达后MDA—MB-231乳腺癌干细胞的增殖能力、侵袭能力和对化疗药物的耐药性。结果MDA—MB-231乳腺癌于细胞以悬浮球的形式生长扩增，MDA—MB-231乳腺癌干细胞CD44^＋／CD24^-/low细胞亚群的比例（92．7％）高于MDA—MB-231乳腺癌细胞（76．6％，P〈0．05）。接种0．2×10^7个／ml细胞数，MDA—MB-231乳腺癌干细胞肿瘤体积为（124．60±13．65）mm^3，大于MDA-MB-231乳腺癌细胞形成的肿瘤体积[（68．20±9．99）mm^3，P〈0．01）]。紫杉醇对MDA-MB-231乳腺癌干细胞的半数抑制浓度（IC50）为（8．20±0．34）μg／ml，高于MDA—MB-231乳腺癌细胞[（4．40±0．48）μg／ml，P〈0．01）]。MDA-MB-231乳腺癌干细胞Oct4的表达水平高于乳腺癌细胞（P〈0．05）。下调Oct4蛋白的表达后，Oct4siRNA组MDA—MB-231乳腺癌干细胞从第3天开始其增殖能力低于空白对照组和阴性对照组（均P〈0．05）。侵袭性实验结果显示，转染72h后，与空白对照组和阴性对照组比较，Oct4siRNA组MDA—MB-231乳腺癌于细胞穿膜数量为（46．52±2．58）个，少于空白对照组[（77．29±
- 李文鹏罗维远徐毅丁伟基陈跃达张传凯罗琪黄正接
- 关键词：肿瘤干细胞RNA干扰
- BGC-823人胃癌细胞株SOX2基因的甲基化状态及其去甲基化的意义被引量：6
- 2016年
- 目的观察BGC-823人胃癌细胞株中性别决定相关基因簇2（SOX2）启动子的甲基化状态，探讨SOX2基因去甲基化后对BGC-823细胞的生长和侵袭能力的影响。方法通过甲基化特异性PCR法（MSP）检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶（5-Aza—CdR）对BGC-823细胞SOX2启动子甲基化状态的影响，实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测经不同浓度5-Aza—CdR作用前后BGC-823细胞中SOX2的表达情况，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测存活率，Transwell小室法和划痕实验检测侵袭及转移能力变化。建立裸鼠BGC-823胃癌移植瘤模型，40只移植瘤小鼠平均分为2组，腹腔分别注射磷酸缓冲液（PBS）、5-Aza—CdR，通过免疫组化、蛋白质印迹法检测5-Aza—CdR的抑瘤效果。结果5-Aza—CdR逆转了BGC-823细胞SOX2的甲基化状态，SOX2mRNA表达恢复，且恢复表达程度与5-Aza—CdR药物浓度呈正比。BGC-823细胞SOX2mRNA和蛋白的相对表达量低于正常胃黏膜GES．1细胞[（22．80±0．36）和（0．49±0．01）比（20．36±0．45）和（0．91±0．28），均P〈0．05]，经系列浓度（0、1、10μmol／L）5-Aza．CdR处理后BGC-823细胞SOX2mRNA和蛋白的相对表达量相比差异均有统计学意义[（22．99±0．42）和（0．65±0．19）比（21．78±0．41）和（0．73±0．13）比（20．51±0．47）和（0．83±0．14），均P〈0．05]。经不同浓度（1、10、20μmol／L）处理后，BGC-823细胞的增殖速度明显减慢，与浓度为0μmol／L的对照组比较，各处理组细胞存活率差异有统计学意义（P〈0．05），且迁移、侵袭能力减弱（均P〈0．05）。裸鼠移植瘤结果显示：5-Aza—CdR组的最终肿瘤体积、最终瘤重较小[（286．6±37．5）mm^3和（325．2±32．2）mg比（540．7±42．6）mm^3和（694．7±36．1）mg，P〈0．05]，生存期较长[（22．5±1．0）比（18．7-4-1．6）d，P〈0．05]，SOX2蛋白表达量高[（0．96±0
- 魏斌刘刚蔡桦立李庚鹏黄河庆罗琪黄正接
- 关键词：去甲基化
- OCT4基因在胃癌细胞系中的表达及其意义被引量：4
- 2012年
- 目的检测八聚体结合蛋白-4(octamer-binding protein-4,OCT4)基因在不同分化程度的胃癌细胞株(MKN-28、SGC-7901、BGC-823)及正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达情况,研究OCT4基因表达水平与胃癌细胞分化程度和侵袭力的相关性。方法 RT-PCR确定GES-1、MKN-28、SGC-7901、BGC-823中OCT4基因的表达水平,OCT4siRNA转染BGC-823细胞,分别通过荧光定量PCR和Western blot检测干扰OCT4基因表达的效果,并利用Transwell小室法研究OCT4在BGC-823细胞侵袭力中的作用。结果正常人胃黏膜细胞中未检测到OCT4的表达,人胃癌细胞系分化程度越低,OCT4基因表达量越高,低分化人胃癌细胞系BGC-823中OCT4基因表达最高,转染OCT4siRNA的BGC-823细胞内的OCT4mRNA和OCT4蛋白表达量明显下降(P<0.05)。干扰胃癌细胞BG-823中OCT4基因的表达,穿膜细胞数量减少(P<0.05),侵袭力下降。结论 OCT4基因表达量与胃癌细胞的分化程度有关,OCT4基因可能在胃癌细胞的分化中起重要作用,影响胃癌细胞的侵袭能力,其表达程度有望成为胃癌患者恶性度预测的参考指标之一。
- 黄正接王锐罗维远易文城曾岳岳罗琪
- 关键词：胃癌细胞系
- 姜黄素治疗小鼠肝癌移植瘤的实验研究被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨姜黄素(Cur)对小鼠H22肝癌移植瘤的治疗作用及其可能的作用机制。方法:构建肝癌小鼠模型,检测Cur对肝癌细胞的抑制作用,观察Cur对小鼠肝癌的治疗效果,测定Cur对肝癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)的影响。结果:Cur能抑制治疗小鼠肝癌的生长、提高荷瘤小鼠的生存期、减少肝癌组织VEGF的表达、降低肝癌组织MVD。结论:Cur能抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,机制可能是Cur减少VEGF的表达而抑制肿瘤微血管新生。
- 谢永进魏斌陈跃达丁伟基徐毅李文鹏卢传辉尤俊罗琪黄正接
- 关键词：姜黄素肝肿瘤血管内皮生长因子小鼠
- 干细胞转录因子SOX2、OCT4在不同分化程度胃癌组织中的表达及其临床意义被引量：17
- 2015年
- 背景与目的:肿瘤组织的分化程度是决定胃癌预后的重要因素,本研究检测胃癌组织中性别决定相关基因簇2(sex determining region Y-box 2,SOX2)、八聚体结合蛋白-4(octamer binding factor 4,OCT4)的表达,探讨SOX2、OCT4的表达与胃癌患者临床病理因素及预后的关系及意义。方法:通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)和免疫组化检测了60例分化程度不同的胃癌组织与正常黏膜组织中SOX2和OCT4的mRNA及蛋白的表达量,并分析SOX2和OCT4基因的表达水平与患者临床病理参数的关系。结果:q RT-PCR、Western blot检测显示,高分化胃癌组织SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=0.103 3,P>0.05;t=0.116,P>0.05),但显著高于中分化胃癌组织(t=12.48,P<0.05;t=22.78,P<0.05)和低分化胃癌组织(t=17.56,P<0.05;t=30.00,P<0.05),差异有统计学意义。与SOX2相反,高分化胃癌组织OCT4 mRNA的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=2.436,P>0.05;t=1.064,P>0.05),但显著低于中分化胃癌组织(t=13.23,P<0.05;t=25.56,P<0.05)和低分化胃癌组织(t=12.10,P<0.05;t=69.48,P<0.05),差异有统计学意义。免疫组化显示,高分化胃癌组织中SOX2的阳性表达率(10/21)高于中分化胃癌组织(7/20)和低分化胃癌组织(2/19,P<0.05),高分化胃癌组织中OCT4的阳性表达率(2/21)低于中分化胃癌组织(6/20)和低分化胃癌组织(12/19,P<0.05),与临床病理参数相比较,胃癌中SOX2和OCT4蛋白的表达与患者的性别、年龄无关,差异无统计学意义(P>0.05)。与病理分期、浸润程度、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:SOX2基因的低表达水平和OCT4的高表达水平促进胃癌的发生、发展和侵袭,有望成为胃癌诊断、治疗和预后判断的一个指标。
- 徐毅丁伟基李文鹏陈跃达魏斌谢永进罗琪黄正接
- 关键词：分化程度
- 胃肠道恶性肿瘤术前肠内免疫营养支持的临床意义被引量：11
- 2014年
- 目的探讨胃肠道恶性肿瘤术前肠内免疫营养支持的效果。方法将82例胃癌和大肠癌患者分为常规饮食组(对照组)和肠内营养支持组(EN组),每组41例。对照组入院后常规饮食,EN组术前7d给予肠内营养乳剂(TPF-T)瑞能口服,两组提供的热量和氮量完全相同。定期检测血清白蛋白、转铁蛋白、前白蛋白、视黄醇结合蛋白及T细胞亚群,记录术后并发症、肠蠕动恢复时间、术后住院天数和术前术后营养支持的总费用情况。结果 EN组术前营养状况较入院时普遍提高,转铁蛋白、前白蛋白、视黄醇结合蛋白升高(P<0.05);免疫功能增强,CD3+、CD4+/CD8+提高(P<0.05),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后无死亡、消化道瘘等严重并发症,EN组术前术后营养支持总费用与对照组相仿(P>0.05),但EN组术后肠动力恢复早、术后住院天数减少、术后并发症率低、节约术后营养支持费用(P<0.05)。结论胃肠道恶性肿瘤患者术前应用肠内营养支持能改善患者术前营养状态、增强免疫功能、促进术后恢复。
- 黄正接陈百胜尤俊吴炳霖江龙冯庆钊罗琪
- 关键词：肠肿瘤肠内营养
- 戳孔局部浸润镇痛在高龄患者完全腹腔镜下胃癌根治术中的临床意义被引量：5
- 2014年
- 目的 探讨罗哌卡因戳孔局部浸润对完全腹腔镜下胃癌根治术高龄患者的术后镇痛效果及其术后恢复的影响.方法 对2012年1月至2013年9月厦门大学附属第一医院厦门市肿瘤中心胃肠外科接受完全腹腔镜下胃癌根治术治疗的高龄患者（≥65岁）进行前瞻性研究,患者常规麻醉诱导、麻醉维持,术毕抽取双盲实验分组卡随机将患者分为3组：罗哌卡因组（0.5％的罗哌卡因40ml行戳孔局部浸润,n=22）;氯化钠组（0.9％的氯化钠注射液40 ml行戳孔局部浸润,n=20）;空白对照组（不行戳孔局部浸润,n=19）.所有疼痛数字等级评分（NRS） ＞4分的患者,予以盐酸吗啡注射液10 mg肌注补救镇痛.术后6h开始测定并记录双盲NRS、补救镇痛的例数及不良反应,比较各组患者术后首次下床活动时间、肠功能恢复时间、并发症、平均住院日及医疗费用.结果 术后6、12、24、48 h,氯化钠组和空白对照组的NRS均高于罗哌卡因组（5.47±0.12和5.63±0.27比2.65±0.25、5.82±0.63和5.67±0.49比2.42±0.34、3.95±0.51和3.84±0.60比2.27±0.83、3.75±0.72和3.74±0.56比2.05±0.90,均P＜0.05）;氯化钠组和空白对照组盐酸吗啡注射液使用例数多于罗哌卡因组（均P ＜0.05）;术后48 h未见明显罗哌卡因不良反应.罗哌卡因组术后首次下床活动时间早于氯化钠组和空白对照组[（53±9）比（91±11）和（93±11）h,均P＜ 0.05],肠功能恢复时间则快[（80±6）比（105±9）和（109±10）h,均P＜0.05],术后平均住院日短[（10.2±1.3）比（12.6±1.3）和（12.9±1.6）d,均P＜0.05],医疗费用少[（5.7±0.5）万比（6.3±0.6）万和（6.5±0.6）万元,均P＜0.05],术后并发症发生率低[9.10％（2/22）比25.00％（5/20）和21.05％ （4/19）,均P＜0.05].结论 罗哌卡因戳孔局部浸润的术后镇痛方法简便易行,安全有效,促进术后康复,是一种可供选择的较好镇痛方法.
- 黄正接谢永进尤俊许林陈跃达陈百胜魏斌罗琪
- 关键词：酰胺类腹腔镜胃肿瘤
- 癌胚抗原启动子驱动双自杀基因对裸鼠大肠癌移植瘤的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨癌胚抗原启动子（cp）驱动的双自杀基因系统Cp-CDglyTK对裸鼠大肠癌移植瘤的治疗作用。方法pcDNA3．1（-）Cp—CDglyTK质粒转染癌胚抗原阳性的SW480细胞和癌胚抗原阴性的HeLa细胞，反转录PCR检测目的基因的表达；给予不同浓度的前体药物5氟胞嘧啶（5-FC）及更昔洛韦（GCV）处理，用四甲基偶氮唑盐（MTr）法评估杀伤效应和旁观者效应。96只裸鼠在右侧腋窝皮下移植SW480细胞，72只移植HeLa细胞，建立大肠癌移植瘤模型。前体药物治疗实验中，取SW480和HeLa移植瘤裸鼠各48只，各分4组（I-Ⅳ，V～Ⅷ组，n=12），分别瘤体注射磷酸盐缓冲液（PBS）、GCV联合5-FC，腹腔注射PBS、GCV联合5-FC。自杀基因联合前体药物治疗实验中，余下48只SW480移植瘤裸鼠分为Ⅸ～Ⅻ组（n=12），24只HeLa移植瘤裸鼠分为ⅪIl～Ⅲ组（n=12），均经瘤体注射脂质体Lipofectamine@和质粒Cp—CDglyTK，再由腹腔注射药物（Ⅸ组：PBS，X组GCV，XI组：5-Fc，Ⅻ组：GCV联合5．FC，Ⅻ组：PBS，m组：GCV联合5-FC）。记录肿瘤体积、最终肿瘤重量和生存时间，比较分析各组裸鼠的治疗效果。结果转染质粒的SW480细胞有CDglyTK基因的表达，GCV联合5-FC对转染质粒的SW480细胞的抑制率（59．87％4-0．21％）明显高于HeLa细胞（9．90％±0．09％，P〈0．01），GCV与5-Fc联合用药对转染质粒的SW480细胞的生长抑制率和旁观者效应大于单一使用GCV或5-Fc（均P〈0．05）。II、IV、VI、Ⅷ组分别与对照组I、Ⅲ、V、Ⅶ组比较，肿瘤体积、最终瘤重和生存期差异均无统计学意义（均P〉0．05）。Ⅻ组最终肿瘤体积和最终瘤重均小于Ⅸ组、X组和Ⅺ组[（150．0±3．2）比（522．5±1．9）、（256．8±10．4）和（260．7±2．2）mm，（54．1±10．4）比（682．0±12．O）、（251．8±15．1）和（271．6±17．7）mg，均P〈0．05]；Ⅻ组的肿瘤生长抑制率和�
- 黄正接冯庆钊尤俊许林罗罗维远易文城曾岳岳罗琪
- 关键词：肠肿瘤癌胚抗原基因自杀
