上海市科技兴农重点攻关项目(20095-2)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：邱亚峰史子学赵福广王晓杜沈阳更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所吉林农业大学更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定
- 2011年
- 构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性。人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因。将扩增的基因构建到pET 28(a)质粒上,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA蛋白,并经过Ni-NTA His Bind柱对其进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定HA蛋白的表达,Western blot鉴定HA蛋白的反应原性。通过原核表达获得了HA的截短表达蛋白,并制备了较高纯度的蛋白,Western blot显示HA蛋白具有很好的反应原性,为建立甲型H1N1流感病毒检测技术奠定了基础。
- 贾园沈阳邱亚峰史子学邵东华王晓杜邓绪芳王皓婷赵福广
- 关键词：甲型H1N1流感病毒HA蛋白原核表达
- 甲型H1N1流感病毒HA基因在昆虫细胞中的截短表达
- 2011年
- 目的:利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System表达重组HA蛋白,Western blot及IFA方法鉴定其表达。方法:采用PCR方法扩增A/California/04/2009(H1N1)HA基因,将其克隆到pFastBacHT A载体上,重组质粒pFastBacHT-HA经双酶切及测序鉴定正确后,转化阳性重组载体进入E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过Bluo-gal蓝白斑筛选、PCR鉴定获得重组转座子rBacmid-HA。从重组转座子中提取rBacmid-HA质粒DNA转染sf 9昆虫细胞,制备重组杆状病毒。重组杆状病毒感染sf 9细胞表达重组蛋白,Western blot及IFA鉴定重组蛋白表达情况。结论:成功构建了甲型H1N1流感病毒HA基因的昆虫杆状病毒表达载体,该表达载体转染昆虫细胞后制备的重组杆状病毒病毒滴度较高,重组杆状病毒表达的重组蛋白经Western blot及IFA鉴定后具有良好的免疫反应原性。
- 贾园沈阳邱亚峰史子学邵东华王晓杜邓绪芳王皓婷赵福广马志永
- 关键词：H1N1BAC-TO-BACBACULOVIRUS
- 上海市猪群中猪流感病毒优势亚型的血清学调查被引量：4
- 2013年
- 为了解当前本市猪群中猪流感病毒的优势亚型,摸清病毒感染现状和规律,对2011年上海市46个场户的723份猪血清应用血凝抑制试验(HI)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了检测。结果显示:本地猪群中猪流感病毒的H1亚型为优势亚型,H3亚型病毒感染率较低,被检场户流感病毒抗体的场阳性率为1.25%～100%,样品阳性率为1.3%～74.7%。提示:猪群对H1、H3亚型流感易感,种猪的感染程度明显高于肉猪,未检测到H5、H9亚型流感病毒抗体。
- 李凯航杨显超宁昆周锦萍
- 关键词：流感病毒抗体
