浙江省教育厅科研计划(Y200906317)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导TIEG1基因乳腺癌靶向载体的构建及活性测定
- 2011年
- 目的:构建慢病毒介导的TIEG1基因乳腺癌特异性靶向载体,并鉴定其活性。方法:将乳腺癌特异性survivin启动子片段和TIEG1基因先后克隆进带有绿色荧光蛋白的慢病毒载体中,构建survivin启动子驱动的TIEG1基因慢病毒表达载体,酶切及测序鉴定。包装纯化慢病毒颗粒,感染人脐静脉内皮细胞HUVEC和乳腺癌细胞SK-BR-3,观察绿色荧光蛋白的特异性表达。结果:成功构建带有肿瘤特异性survivin启动子驱动的TIEG1基因慢病毒表达载体。感染细胞后,乳腺癌SK-BR-3细胞可观察到绿色荧光表达,而人正常脐静脉内皮细胞基本无表达。半定量RT-PCR证实TIEG1基因在乳腺癌SK-BR-3细胞中过表达。结论:构建的survivin启动子驱动的慢病毒表达载体具有一定的肿瘤特异性,将为实现以慢病毒为载体的TIEG1基因肿瘤靶向治疗提供良好的实验基础。
- 蒋磊林飞燕王福乐叶爱芳吴建波
- 关键词：乳腺肿瘤SURVIVIN启动子慢病毒载体
- PTEN基因重组慢病毒的构建
- 2010年
- 目的:构建PTEN基因重组慢病毒,转染真核细胞Ishikawa并检测PTEN基因在真核细胞内的表达。方法:分子克隆重组人PTEN基因与含有CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体PLIG,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。将重组子PLIG-PTEN和包装质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,感染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR和western-blot检测PTEN基因在细胞内的表达水平。结果:PCR和测序证实,成功克隆慢病毒载体PLIG-PTEN,包装慢病毒,感染真核细胞Ishikawa后48h,观察到绿色荧光的广泛表达并检测出宿主细胞内表达的PTEN mRNA成功表达PTEN蛋白。结论:本实验成功地构建了人PTEN基因慢病毒载体,并观察到PTEN基因在真核细胞中的成功表达。
- 陈玲娜蒋磊谷杭芝郑飞云
- 关键词：慢病毒属PTENISHIKAWA细胞
