河北省自然科学基金(2004000644)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：韩梅郑斌温进坤周爱儒史建红更多>>
- 相关机构：河北医科大学北京大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- hhlim促进DMSO诱导的P19细胞向心肌分化被引量：5
- 2004年
- 为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结果显示 ,Nkx2 5和GATA 4在未被外源性hhlim基因转染的P19细胞中不表达 .DMSO刺激细胞 2天后 ,GATA 4开始表达 ,3天后Nkx2 5的表达活性显著升高 .hhlim的过表达不但有利于P19细胞的存活和生长 ,而且还可以使Nkx2 5和GATA 4的表达比对照细胞提前 1天 .反义hhlim细胞株被DMSO诱导 5天后 ,细胞仍呈集落化生长 .同时 ,Nkx2 5和GATA 4开始表达的时间明显延滞 .结果表明 ,hhlim能促进P19细胞向心肌细胞分化 ,其作用是通过促进转录因子GATA 4和Nkx2
- 郑斌温进坤韩梅周爱儒
- 细胞肥大过程中hhLIM的亚细胞定位变化及其对细胞骨架的影响被引量：7
- 2005年
- hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1)为诱导因素 ,探讨hhLIM与肌动蛋白的相互作用及其影响细胞骨架的分子机制 .RT PCR、Western印迹和细胞免疫荧光分析结果表明 ,心肌肥大刺激因子ET 1在诱导心肌肥大标志基因BNP和肌动蛋白表达的同时 ,使hhLIM蛋白在C2C12细胞胞核与胞质之间进行重新定位 .激光共聚焦显微镜观察结果显示 ,hhLIM与肌动蛋白在胞质中共定位 .蛋白分步提取、鉴定及hhLIM与F肌动蛋白结合与沉降实验证明 ,hhLIM多存在于细胞骨架及其相关蛋白部分 ,在体外可与F肌动蛋白共结合 .这些结果表明 ,胞质中的hhLIM作为细胞骨架相关蛋白与肌动蛋白相互作用 .进一步研究hhLIM与细胞骨架的关系时发现 ,hhLIM过表达可使C2C12细胞的骨架变成致密网状纤维并使其对细胞松弛素导致的细胞骨架解聚产生一定的抵抗作用 ,抑制hhLIM表达则使细胞骨架稀疏 ,结构模糊 .提示hhLIM参与细胞骨架组织及重构的机制与其结合并稳定F肌动蛋白有关 .
- 郑斌温进坤韩梅
- 关键词：C2C12细胞肌动蛋白细胞骨架
- hhLIM的表达及其在F肌动蛋白交联中的作用被引量：3
- 2006年
- 为进一步研究hhLIM的功能及其与F肌动蛋白(Factin)之间的相互关系,利用PCR扩增hhlim基因并将其克隆到pGEX3X表达质粒上,重组表达质粒转化宿主菌得到稳定表达的可溶性产物,表达产物经GlutathioneSepharose亲和纯化得到纯度达90%的融合蛋白GSThhLIM.进而研究其在F肌动蛋白交联中的作用,以鬼比环肽和细胞松弛素处理C2C12细胞,诱导细胞骨架聚合和解聚.荧光显微镜下观察,hhLIM的分布变化与细胞骨架的形态学变化具有相关性.Western印迹证实,hhLIM主要作为细胞骨架相关蛋白而分布于F肌动蛋白组分中,肌动蛋白交联实验显示,hhLIM蛋白与F肌动蛋白具有较高的亲和力,具有促进F肌动蛋白纤维的交联并将其捆聚成束的作用.结果表明,hhLIM是一种F肌动蛋白交联蛋白,通过将F肌动蛋白纤维捆聚成束而参与骨架重构.
- 郑斌温进坤史建红韩梅
- 关键词：HHLIM可溶性表达细胞骨架
- hhLIM与actin相互作用依赖其C端LIM结构域被引量：1
- 2007年
- hhLIM是LIM蛋白家族成员之一,该蛋白质含有两个LIM结构域,在基因表达调节、细胞骨架组构及细胞肥大过程中发挥重要作用.构建hhLIM不同LIM结构域的突变体,探讨其两个LIM结构域在与actin相互结合中的作用及其可能机制.GST-pull down和hhLIM及其突变体与actin细胞定位关系的免疫荧光分析结果表明,C端的LIM结构域2是hhLIM与actin结合所必需的,该结构域中的两个Cys置换为Ser后可使hhLIM结合actin的功能完全丧失,N端的LIM结构域1突变使hhLIM结合actin的能力下降.F-actin交联实验结果显示,hhLIM通过LIM结构域2与actin直接结合并起到交联F-actin的作用.结果表明,LIM结构域2在hhLIM与actin相互作用及调节actin细胞骨架组构中起决定性作用.
- 郑斌温进坤韩梅史建红
- 关键词：HHLIMLIM结构域细胞定位
- hhlim表达与心肌肥厚的关系被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨 hhlim蛋白在心肌肥厚发生中的地位和作用。方法 建立腹主动脉部分结扎心肌肥厚模型和运动性心肌肥厚模型 ,应用RT- PCR和 Western blot等方法观察 hhlim在生理性和病理性心肌肥厚发生中的作用。结果 运动组和腹主动脉结扎组动物的心脏重量、心系数、收缩压、舒张压和平均动脉压较对照组明显增大 ,说明模型建立是成功的。RT- PCR和 Western blot结果显示 ,对照组大鼠心肌细胞 hhlim表达较低 ,运动组和腹主动脉结扎组大鼠 hhlim表达明显增加 ,以腹主动脉结扎组增加最明显。结论 无论是运动性还是高血压性心肌肥厚 ,虽然其引发机制及信号转导通路不同 ,但都与激活 hhlim的表达有关。
- 郑斌温进坤韩梅周爱儒
- 关键词：心肌肥厚基因表达动物模型发病机制
