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呼吸道合胞病毒(RSV)感染预防的研究进展被引量：6: 2003年; 人类呼吸道合胞病毒是严重威胁婴幼儿健康的重要因素这一。该病毒主要引起下呼吸道的感染 ,导致婴幼儿中气管炎和支气管炎的流行。本文就其近年来国内外对该病毒感染预防研究进展作一综述。; 林林王佑春李德富; 关键词：呼吸道合胞病毒感染 RSV 气管炎支气管炎分子生物学

一种简便快速构建基因突变体的有效方法被引量：6: 2002年; 目的　介绍一种简便、快速、准确构建定点诱导突变体的新技术。方法　设计 3条引物 ,一条突变引物 ,另外两条引物位于突变引物的两侧 ,并带上合适的酶切位点 ,以供突变片段构建完成以后可以克隆进入合适载体。然后以突变引物与其附近的反向引物一起扩增带突变位点的片段 ,再以此 PCR产物片段为引物与剩下的另一条引物一起扩增 ,扩增出的片段带有合适的酶切位点可以克隆进入合适载体。结果用该方法成功地在 Parkin基因的 719bp处 C→ T和 913bp处 C→ T构建成两种突变。结论　该方法简便、快速、准确 ,确保 10 0 %的突变率 ,可在任何基因上构建所需的点突变 ,且不需要购买任何试剂盒。; 张铭湘文剑夏昆郑多张灼华夏家辉; 关键词：聚合酶链反应基因突变体遗传病

高浓度EB病毒感染人永生化上皮细胞Hacat系被引量：5: 2002年; 目的探讨EB病毒感染上皮细胞的机制。方法大规模培养绒猴淋巴细胞B958系,从中提取并浓缩EB病毒,用胎儿脐带血淋巴细胞滴定后,以高浓度EB病毒感染人永生化上皮细胞Hacat系。提取Hacat细胞基因组DNA,PCR扩增EB病毒基因组特异性核酸序列BamHIw片断,Southernblotting及原位杂交验证感染结果。结果PCR、Southerblotting及原位杂交结果证实高浓度EB病毒能够感染Hacat细胞,但是感染率非常低。结论EBV对上皮细胞存在CR2或多聚IgA受体介导之外的未知感染途径。; 江培洲沈新明黄华姚开泰; 关键词：EB病毒上皮细胞病毒学

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像软件分析TPA处理NIH3T3细胞前后的蛋白质表达谱差异被引量：6: 2004年; 目的建立及优化聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,并应用图像软件分析伏波醇酯(TPA)刺激前后小鼠成纤维细胞NIH3T3系的蛋白质差异表达,为进一步鉴定与TPA生物学作用有关的蛋白质奠定基础。方法分别提取TPA处理前后的NIH3T3细胞总蛋白质,经双向电泳,硝酸银染色后用软件分析显示两者蛋白质的差异表达。结果软件分析显示TPA刺激前后的细胞蛋白质有明显的差异表达。结论高质量的双向电泳设备、熟练的电泳操作和图像处理技能是寻找稳定可信的功能蛋白质的必要条件。; 沈新明江培洲黄华李欣姚开泰; 关键词：凝胶电泳 NIH3T3细胞蛋白质表达谱

Plunc序列启动子转基因小鼠模型的建立被引量：1: 2004年; 目的利用携带有鼻咽组织相对特异性启动子plunc构建的载体建立转基因动物模型。方法将plunc-EGFP质粒用XhoⅠ酶切线性化,胶回收线性化片段,稀释浓度4 μg/ml。采用显微注射法将外源基因注射入小鼠受精卵细胞内。结果产13只小鼠。PCR检测基因整合,其中阳性12只,阳性率92.30%;Southern blot检测阳性3只,阳性率23%。结论鼻咽组织相对特异性启动子plunc可有效地将外源基因整合入小鼠体内。; 杨玉芳丁彦青张玲梁莉; 关键词：启动子转基因小鼠动物模型鼻咽肿瘤病因

Tiam1基因慢病毒表达载体构建及其在HT29细胞中的表达被引量：3: 2010年; 目的:构建Tiam1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒表达载体,观察其在人结直肠癌HT29细胞中的表达。方法:通过酶切Tiam1/C1199HA质粒获得Tiam1cDNA片段,并将其克隆到慢病毒载体表达质粒pCDF1-copGFP中,经酶切、测序鉴定。慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带Tiam1和GFP融合基因的重组慢病毒。取病毒上清感染人结直肠HT29细胞株,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白及免疫细胞化学检测Tiam1在靶细胞中的表达。结果:重组慢病毒质粒pCDF1-Tiam1-copGFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的Tiam1基因序列(NM_003253)完全一致。重组慢病毒质粒可高效转染293FT细胞,病毒包装效率为88.34%。收获慢病毒上清可高效感染HT29细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光,感染效率为55.89%,感染后靶细胞中Tiam1稳定高表达。结论:成功构建了携带Tiam1与GFP融合基因的慢病毒表达载体pCDF1-Tiam1-copGFP,并使目的基因在靶细胞中得到稳定表达,为进一步研究Tiam1基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。; 于莉娜张庆玲李新丁彦青; 关键词：TIAM1基因慢病毒载体基因转染

慢病毒载体法在制备转基因小鼠模型中的应用: 2009年; 目的改进慢病毒载体法制备转基因小鼠的操作技术,分别从病毒浓缩、受精卵显微注射进针点和如何提高病毒注射效率等方面探讨慢病毒显微注射技术的最佳方案。方法超速离心获得浓缩慢病毒,通过卵周隙显微注射技术感染小鼠受精卵,比较不同注射点显微注射后受精卵存活率及发育情况。结果受精卵1点和5点作为注射点的卵周隙注射组可有效避免注射针与卵膜的直接碰触,减少对受精卵的损伤,胚胎存活率较常规中轴3点作为注射点组显著提高(P<0.01)。适当的病毒滴度和注入量、操作细节、注射针口径等均可影响注射后受精卵存活率和感染率。结论卵周隙显微注射过程中选择适当的注射点以及部分操作的改进,可显著提高受精卵的存活率,为提高转基因小鼠模型的制备效率提供参考。; 于莉娜张庆玲丁彦青; 关键词：慢病毒载体转基因鼠

细胞间接触是EB病毒自发感染人类上皮细胞的有效途径被引量：4: 2004年; 选用产EB病毒的绒猴淋巴细胞B95-8系和补体受体2型(complementreceptor2,CR2)与多聚免疫球蛋白受体(polymericimmunoglobulinreceptor,pIgR)表达阴性的人永生化上皮细胞Hacat系共培养,进行细胞接触感染实验。一周后去除B95-8细胞,仅留Hacat细胞,并以自行改进的方法鉴定前者是否得以彻底去除。在证实没有B95-8残留后,PCR和原位杂交分别检验剩余Hacat细胞中EB病毒的感染结果。实验结果表明:改进的方法能够灵敏和简便地判断B95-8细胞的污染与否,并且与B95-8细胞接触共培养的Hacat细胞能被EB病毒有效地感染,后者暗示了EB病毒对上皮细胞可能存在细胞融合和CR2或pIgR介导之外新的感染途径。本研究在一定程度上简化了前人的细胞接触感染方法,也为建立天然的EB病毒自发有效地感染上皮细胞的模型奠定了基础。; 江培洲沈新明吕丽春黄华姚开泰; 关键词：EB病毒上皮细胞鼻咽癌胃癌肺癌

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国家高技术研究发展计划(2001AA216101)