国家自然科学基金(81102222)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：汪思应查欣邢小翠胡中倩唐刘君更多>>
- 相关机构：安徽医科大学中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞周期相关因子CDCA3基因shRNA表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA靶序列的设计原则,以CDCA3基因为靶基因,合成一对编码shRNA的两条DNA序列,经退火后合成DNA双链,再克隆至shRNA表达载体pSIREN-DNRDsRed质粒中,连接产物转化E.coilJM109感受态细胞,然后挑取克隆提质粒,进行酶切鉴定和DNA序列测定。将构建成功的载体通过脂质体介导转染导入人胚肾HEK293细胞,采用Western blot法和Realtime RT-PCR,检测特异性shRNA对CDCA3蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果成功构建靶向CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体;转染HEK293细胞后,可显著下调CDCA3在细胞内的mRNA水平及蛋白表达水平。结论 CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体能显著下调HEK293细胞内的CDCA3蛋白表达。成功构建CDCA3 shRNA表达载体,为进一步研究CDCA3基因的功能提供了实验基础。
- 李娟唐刘君王晓辉查欣胡中倩邢小翠杨晓明汪思应
- 关键词：RNA干扰SHRNA
