卫生部科学研究基金(wkj2006-2-026)
- 作品数：18 被引量：115H指数：7
- 相关作者：郑金旭汤艳黄振杰曾彤华许清更多>>
- 相关机构：江苏大学附属医院北海市人民医院江苏大学更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金江苏省“333工程”培养资金资助项目江苏省“333”工程基金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 布地奈德吸入联合N-乙酰半胱氨酸治疗特发性肺纤维化被引量：20
- 2010年
- 目的客观评价吸入性表面激素联合抗氧化剂治疗特发性肺纤维化(IPF)及口服激素治疗特发性肺纤维化这两种治疗方法的疗效及不良反应。方法 42例IPF进展期患者随机分为试验组和对照组,试验组给予布地奈德雾化吸入联合口服N-乙酰半胱氨酸治疗,对照组给予口服泼尼松治疗。对两组治疗前后进行呼吸困难评分,检测血气分析、肺功能及不良反应指标。结果两组对比治疗前各项检测指标均无差异(P>0.05)。两组治疗后的呼吸困难评分、血气分析、肺功能的相关指标比治疗前均有所改善(P<0.05)。试验组治疗后的呼吸困难评分、血气分析、肺功能的相关指标优于对照组(P<0.01)。试验组治疗前后的不良反应指标无差异(P>0.05)。对照组治疗后不良反应指标比治疗前明显(P<0.05)。结论布地奈德雾化吸入联合口服N-乙酰半胱氨酸治疗IPF的疗效比口服泼尼松好,而不良反应发生明显降低。表面激素联合抗氧化剂对IPF进展期的治疗值得临床推广。
- 黄振杰汤艳郑金旭
- 关键词：特发性肺纤维化布地奈德N-乙酰半胱氨酸
- 人胚肺成纤维细胞中HSP47与TGF-β_1关系的探讨被引量：1
- 2011年
- 目的分析在人胚肺成纤维细胞(HELF)中热休克蛋白47(HSP47)与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的关系。方法将HELF分为4组:对照组、热休克组、TGF组及联合组。采用WST-8法检测HELF细胞活力和Western blot检测各组细胞HSP47、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vi mentin)表达情况。结果 TGF-β1能促进HELF的增殖(P<0.05);在TGF-β1作用下HELF中上述蛋白表达上调,在TGF-β1联合热休克反应的作用下上调更明显,而单在热休克反应后细胞HSP47表达显著,ColⅠ却未见明显增强(P>0.05)。结论 HSP47参与TGF-β1促HELF胶原合成,在肺纤维化中起着重要的作用。
- 汤艳郑金旭黄振杰管淑红许清刘继柱
- 关键词：转化生长因子Β1人胚肺成纤维细胞
- 热休克蛋白47参与TGF-β1促人胚肺细胞胶原合成被引量：3
- 2011年
- 目的观察热休克蛋白47(HSP47)对人胚肺成纤维细胞(HELF)胶原合成及间质细胞标志物的影响,探讨它与肺纤维化的关系。方法用TGF-β1诱导HELF表达HSP47,用5 ng/mL TGF-β1作用不同时间和用不同浓度TGF-β1作用于HELF 48 h;WST-8法检测细胞增殖;免疫荧光法检测HSP47的表达;Western blot检测HSP47、Ⅰ型胶原(CollageⅠ)及间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果正常HELF表达少量HSP47,随着HELF在TGF-β1作用时间的延长和剂量逐渐增加,HSP47(5 ng/mL TGF-β1作用48 h,7.081±0.265)、CollageⅠ(5 ng/mL TGF-β1作用48 h,2.494±0.139)、α-SMA和Vimentin的表达均同步增强(P<0.05)。结论 HSP47在TGF-β1的作用下,促进人胚肺成纤维细胞胶原蛋白的合成,作为胶原特异性分子伴侣在肺纤维化的发生发展过程中发挥至关重要的作用。
- 郑金旭汤艳黄振杰管淑红许清刘继柱
- 关键词：热休克蛋白47人胚肺成纤维细胞
- 构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型被引量：13
- 2010年
- 背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺发育和肺功能调节中起重要作用,它与肺纤维化和肺癌等疾病的发生发展有密切联系,为了对这些疾病进行体外实验研究,必须对肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、原代培养与鉴定以建立一个稳定高效的细胞模型。目的:建立一套可靠的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、原代培养与鉴定的方法,为肺纤维化及肺癌等疾病的进一步研究奠定基础。方法:①用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法,分离小鼠肺组织细胞成分。取出小鼠肺组织,剪成小块,加入胰蛋白酶,移出细胞悬液,加入含胎牛血清的DMEM中止消化;同法用胰蛋白酶再消化1次,中止消化后加入Ⅰ型胶原酶,再中止消化。②经差速离心差速贴壁和免疫黏附法纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞,进行原代培养。将肺细胞悬液接种入包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出含未黏附细胞的液体接种于另一包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出未黏附细胞,去上清,重悬沉淀,将细胞接种于培养皿和培养板中培养。倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,测定肺泡Ⅱ型上皮细胞产量、纯度及活力,免疫细胞化学染色鉴定肺泡表面活性蛋白A和肺泡表面活性蛋白C的表达,透射电镜鉴定肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性细胞结构。结果与结论:用此方法,每只小鼠获得肺泡Ⅱ型上皮细胞(4.8±1.2)×106,纯度达到(85.0±2.4)%,细胞活力为(92.0±2.4)%,倒置显微镜下原代肺泡Ⅱ型上皮细胞呈圆形或立方形,细胞质内有大量反差明显的细小颗粒,细胞为岛状生长方式;免疫细胞化学鉴定,肺泡表面活性蛋白A呈棕黄色,肺泡表面活性蛋白C呈绿色,均定位表达于细胞浆;透射电镜见特征性板层小体和细胞游离面大量微绒毛。证实利用胰酶联合胶原酶消化,差速离心差速贴壁和免疫黏附纯化的方法可获得高产量高纯度的AECⅡ,能满足一般的体外实验要求。
- 郑金旭黄振杰汤艳丁明
- 关键词：小鼠原代培养
- IL-31在实验性小鼠肺纤维化过程中的动态表达及意义被引量：8
- 2009年
- 目的探讨白细胞介素31(IL-31)在博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中的表达及意义。方法将48只小鼠随机分为对照组和实验组。分别给予0.9%氯化钠注射液和BLM(5 mg/kg)一次性气管内灌注后第7、14、21和28天处死小鼠,取肺组织,应用Western Blotting法测定其中IL-31蛋白表达水平。结果实验组肺组织中IL-31蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。实验组中IL-31蛋白表达从第7天开始高于对照组,第21天达到高峰,第28天降低。结论IL-31在肺纤维化形成过程中存在高表达,尤其在介导中后期肺纤维化进程中发挥重要作用。
- 郑金旭徐丽娜范利娟端礼荣钱海
- 关键词：肺纤维化白细胞介素6
- 肺泡上皮细胞间质转化及其信号转导途径在肺纤维化中的作用被引量：13
- 2011年
- 目的以TGF-β1诱导A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),探讨EMT过程及其信号转导途径在肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志物的mRNA表达,Western blot检测上皮及间质细胞的标志物以及信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达,应用倒置相差显微镜观察TGF-β1干预前后细胞形态学的变化。结果 TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志物的mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),间质细胞标志物的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1上调(P<0.05),snail2弱表达(P>0.05);倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可以在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制与Smad 2/3、Snail1信号转导途径相关,提示肺泡上皮细胞向间质细胞的转化是肺纤维化发生的直接原因,而Smad 2/3、Snail1信号转导途径很可能是关键环节。通过诱导或促进肺泡上皮细胞向间质细胞转化,可以促使肺纤维化的发病,而通过阻断这一过程及其下游的信号转导通路有望治疗肺纤维化。
- 黄振杰郑金旭汤艳曾彤华蔡文华李斐
- 关键词：转化生长因子Β1A549细胞上皮细胞间质转化肺纤维化
- 肺泡上皮细胞间质转化对肺癌细胞转移影响的研究被引量：7
- 2011年
- 目的:通过以TGF-β1诱导肺腺癌细胞系A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(EMT),并探讨EMT过程的信号转导途径及肺EMT与肺癌转移之间的关系。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志的mRNA表达,蛋白质印迹法检测上皮及间质细胞标志的蛋白表达、信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1和Snail2的表达及基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,通过倒置相差显微镜观察肺EMT过程中细胞形态学的变化。结果:TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志(E-cad、CK19)的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),间质细胞标志(Vimentin、α-SMA)的mRNA和蛋白表达上调,P<0.05;信号转导蛋白P-Smad 2/3和Snail1上调(P<0.05),Snail2弱表达,P>0.05;基质金属蛋白酶MMP-2上调(P<0.05),MMP-9弱表达,P>0.05;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论:在TGF-β1的诱导下,肺腺癌细胞从上皮细胞向间质细胞转化,其与Smad 2/3和Snail1信号转导途径相关,同时伴随了MMP-2的表达增强,因此肺泡上皮细胞向间质细胞的转化可能通过改变细胞形态学和增加基质金属蛋白酶的表达,增强了癌细胞的侵袭性,促进肺癌的转移。而通过阻断肺癌细胞的EMT过程及其信号转导途径有可能抑制肺癌的转移。
- 黄振杰郑金旭汤艳蔡文华曾彤华陈文海梁海青
- 关键词：A549细胞转化生长因子Β1上皮细胞间质转化肺肿瘤
- HSP47在肺纤维化中的作用机制被引量：3
- 2010年
- 肺纤维化（PF）是由各种原因引起的弥漫性肺部炎症疾病，其病理特征是肺炎症损伤、成纤维细胞灶的形成、细胞外基质过度沉积，最终导致了肺组织结构的异常重塑。目前，PF的发病机制尚不明确。近年来，细胞因子成为研究疾病发病机制的热点，如TGF-β1、IFN-γ、TNF-α、PDCF、IGF-1、IL-1和IL-8等，它们相互作用，相互协调，形成一个复杂的细胞因子网络，在PF形成中起着重要的调控作用。
- 汤艳郑金旭
- 关键词：热休克蛋白47肺纤维化
- Napsin A基因对A549细胞在上皮-间质转化中增殖的影响及其机制
- 2011年
- 采用慢病毒载体质粒PLJM1将NapsinA基因转染到人肺腺癌细胞——A549细胞中,获得稳定表达Napsin A蛋白的特性并鉴定,通过转化生长因子-β1刺激A549细胞发生上皮-间质转化,体外构建上皮-间质转化模型并鉴定。MTT法检测转基因前后A549细胞在上皮-间质转化过程中生长速率的变化;流式细胞术检测其细胞周期的改变,最后予Western blot检测黏着斑激酶的表达情况,探讨Napsin A基因对A549细胞在上皮-间质转化过程中增殖的影响及其机制。结果表明转染后的A549细胞表达Napsin A蛋白明显增加(P<0.01);A549细胞发生上皮-间质转化后细胞E钙蛋白表达下调(P<0.01),Ⅰ型胶原表达上调(P<0.01);转基因细胞在体外上皮-间质转化模型中增殖速度减慢(P<0.05),且细胞周期被阻滞在G_1期(P<0.01),其表达整合素信号传导通路的基础分子——黏着斑激酶的量显著下降(P<0.01)。提示Napsin A基因可以抑制A549细胞在上皮-间质转化过程中的进一步增殖,其机制可能与抑制整合素信号传导通路有关。
- 管淑红郑金旭许清汤艳刘继柱吕晓婷
- 关键词：NAPSINA549细胞上皮-间质转化增殖黏着斑激酶
- 柴胡皂甙d对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的治疗作用及机制研究被引量：24
- 2010年
- 目的探讨柴胡皂甙d（SSd）抗小鼠肺纤维化的作用及其机制。方法180只小鼠按随机数字表法分5组。其中4组为博来霉素（BLM）诱导肺纤维化模型组（气管内注射BLM5mg／kg），分为单纯造模组（BLM组）、地塞米松（DXM）干预组（DXM组）、SSd干预组（SSd组）和SSd＋DXM联合干预组（SSd＋DXM组），每组40只；造模后1h，后3组小鼠分别腹腔注射DXM5mg／kg（0．1ml）、SSd1．8mg／kg（0．l8m1）、SSd＋DXM（0．1ml＋0．18m1），BLM组腹腔注射0．28ml生理盐水，每天1次，连续28d。另1组为正常对照组（NC组，20只），同时间按同样方法注入0．28ml生理盐水。给药第3、7、14、28天每组各处死5只小鼠，取肺组织行常规组织病理学检查，检测肺组织中羟基脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量；取外周血检测SOD和MDA含量。造模的4组每组各20只小鼠用于观察自然生存状况。结果SSd可明显提高肺纤维化小鼠存活率（SSd组和SSd＋DXM组存活率均为80．0％，BLM组为50．0％，P〈0．05），并显著减轻小鼠肺泡炎和肺纤维化程度。DXM组、SSd组和DXM＋SSd组肺组织HYP含量给药第14、28天明显低于BLM组（P〈0．05），血清及肺组织MDA含量给药第3、7、14天明显低于BLM组（P〈0．05，P〈0．01），血清SOD含量给药第3、7、14天、肺组织SOD含量给药第3、7天明显高于BLM组（P〈0．05，P〈0．01）。结论SSd有很明显的抗肺纤维化作用，其作用机制可能与抗脂质过氧化作用有关。
- 郑金旭卢坤琴夏德刚田高润黄振杰
- 关键词：柴胡皂甙肺纤维化脂质过氧化作用
