吉林省科技厅科研基金(200905158)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：佳木斯市中心医院吉林大学第二医院更多>>
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- 缺失线粒体DNA的人喉癌细胞系的建立被引量：5
- 2012年
- 目的为了研究线粒体DNA在人喉癌细胞的增殖、分化及凋亡中的影响及作用,培养线粒体DNA缺失的喉癌细胞系,为构建融合喉癌细胞,研究线粒体DNA突变和线粒体功能改变与喉癌发生之间的关系奠定基础。方法人喉癌细胞系JHUo11加入10%FBS的RPMI1640培养基中,然后在培养基中加入丙酮酸、尿苷、溴化乙锭(EtBr)以去除线粒体DNA,不加溴化乙锭的o11细胞作为对照。经过90天培养,线粒体DNA缺失的喉癌细胞通过健那绿染色后光镜观察和PCR法鉴定。结果 o11细胞经过75ng/μl溴化乙锭持续作用90天后可见细胞肿胀变圆,透光度增加,线粒体DNA PCR扩增未见目的条带,细胞可扩增出定位于mtDNA的500bp片段,健那绿染色对照细胞,可见散在蓝绿色线粒体,而加EB的细胞未见线粒体。结论喉癌细胞o11经过溴化乙锭持续作用90天培养出线粒体DNA缺失的ρ0o11喉癌细胞,这种缺失线粒体DNA的细胞系需补充外源性丙酮酸和尿苷来维持其生存,否则细胞很快死亡。通过观察细胞的增殖和分化发现,ρ0o11细胞生长速度比未经EB处理的对照组慢的多。
- 王磊程鹤香赵倩陈鸥赵明
- 关键词：线粒体DNA溴化乙锭细胞培养
- 喉癌细胞线粒体去极化和凋亡研究
- 2012年
- 目的线粒体膜电位的缺失是线粒体凋亡途径的早期事件。我们用线粒体膜电位去极化剂(valinomycin)处理3个喉癌细胞系,研究它们的凋亡反应和细胞色素C释放的能力。方法 3个喉癌细胞系和对照细胞系HL-60经过valinomycin处理后,用细胞膜电位探针JC-1染色和凋亡特异性探针annexinV染色,用流式细胞仪分别测量它们的线粒体膜电位和凋亡率。Western印记用来检测细胞浆内的细胞色素C的释放。结果在经过24小时的处理后所有细胞均显示完全的线粒体去极化,只有对照细胞HL-60出现凋亡和细胞色素C释放,而喉癌细胞系没有出现。结论喉癌细胞系表现出线粒体膜电位去极化诱导的凋亡途径的缺陷,线粒体膜电位去极化而没有细胞色素C的释放。线粒体凋亡途径的缺陷是喉癌的一个特点。
- 王磊徐艳萍陈鸥赵倩程鹤香赵明
- 关键词：喉癌细胞凋亡
