国家自然科学基金(30100150) 作品数:7 被引量:21 H指数:3 相关作者: 承海 糜漫天 张乾勇 陈丹 唐勇 更多>> 相关机构: 第三军医大学 第四军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
n-3脂肪酸对肿瘤细胞凋亡的影响及作用机制 被引量:13 2003年 n 3脂肪酸 (n 3PUFA)是一类重要的多不饱和脂肪酸 ,与人体多种生理过程密切相关。目前研究发现它们可能具有一定的抗肿瘤效应 ,而经多种途径调控肿瘤细胞凋亡是其发挥作用的重要机制之一。本文从分子生物学角度就n 承海 糜漫天关键词:肿瘤 细胞凋亡 N-3脂肪酸 活性氧 凋亡相关基因 Caspases在ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡中的作用 被引量:2 2005年 目的 探讨ω3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL 6 0细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶(Caspases)之间的关系。方法 已证实转染带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNFα表达载体(pPPRE tmTNFα)后,HL 6 0细胞可在ω3脂肪酸诱导下高效表达跨膜型TNFα。运用MTT比色法、DNA梯形带检测、RT PCR和免疫印迹技术分析ω3脂肪酸对转染细胞增殖能力和凋亡的影响,以及细胞Caspase 1、3、8和9基因的表达变化,检测Caspase 8活性以及Caspases特异性抑制剂对肿瘤细胞凋亡效应的拮抗作用。结果 HL 6 0细胞经ω3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,可检测到DNA梯形带形成,Caspase 1、3、8和9基因表达增加,Caspase 8活性增高,上述变化在转染细胞中更为显著,Caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸联合跨膜型TNFα对HL 6 0诱导凋亡和抑制增殖的作用。结论 ω3脂肪酸可以联合跨膜型TNFα更有效的诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而上调Caspases的表达和 或活性可能在此过程中发挥重要作用。 承海 张乾勇 糜漫天关键词:HL-60 凋亡 半胱氨酸蛋白酶 n-3 PUFA依赖的跨膜型肿瘤坏死因子-α真核表达载体的构建 被引量:3 2005年 目的 构建n 3多不饱和脂肪酸依赖的跨膜型肿瘤坏死因子 α(tmTNF α)真核表达载体。方法 设计并合成包含PPRE增强子的tk启动子序列 ,与人突变型tmTNF α真核表达载体pcDNA3 TNF(Δ1 12 )WB重组 ,构建pPPRE tk tmTNF α表达载体 ,转染人乳腺癌MCF 7细胞 ,经EPA处理后 ,应用免疫荧光技术检测tmTNF α蛋白的表达。结果 经琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定证明pPPRE tk tmTNF α真核表达载体构建成功 ,转染此重组表达载体的MCF 7tmTNF α细胞tmTNF α表达受EPA正调控 ,两者之间呈时间、剂量 -效应关系。结论 成功构建受n 3PUFA正调控的tmTNF α真核表达载体。 承海 糜漫天 张乾勇 陈丹关键词:N-3多不饱和脂肪酸 真核表达 ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α对MCF-7细胞凋亡的影响及机制研究 被引量:1 2006年 目的探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase)在ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α诱导MCF-7细胞凋亡过程中的作用。方法带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNF-α表达载体转染MCF-7细胞,经ω-3脂肪酸处理后,MTT比色法检测细胞增殖能力,DNA梯形带分析ω-3脂肪酸对细胞凋亡的影响,RT-PCR和W estern b lot方法检测细胞caspase-1、8和9基因的表达变化,应用caspase特异性底物检测肿瘤细胞caspase-8活性变化,观察caspase特异性抑制剂Ac-IETD-CHO对ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的拮抗作用。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7转染细胞经ω-3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,检测到明显的DNA梯形带,caspase-1、8、9基因表达增加,caspase-8活性增高,caspase抑制剂可以部分拮抗ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的发生。结论ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α可以更有效地诱导MCF-7细胞凋亡,而上调caspase的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。 承海 张乾勇 糜漫天关键词:Ω-3脂肪酸 凋亡 半胱氨酸蛋白酶 乳腺癌 鱼油联合肿瘤坏死因子α对乳腺癌移植瘤影响 被引量:3 2005年 目的探讨鱼油联合肿瘤坏死因子α(TNFα)真核表达载体对乳腺癌移植瘤生长的影响。方法将人乳腺癌细胞(MCF-7)接种到BABL/c裸鼠右侧腋部皮下建立移植瘤模型,将动物随机分为4组:对照组、鱼油组、TNFα组和鱼油+TNFα组。实验结束时观察移植瘤的大小,流式细胞仪分析移植瘤的细胞周期相分布,RT-PCR分析移植瘤组织中tmTNFαmRNA水平。结果单纯tmTNFα真核表达载体转染对移植瘤生长无明显影响。鱼油组和鱼油+TNFα组与对照组比较肿瘤的重量显著降低,其中鱼油+TNFα组肿瘤最小。鱼油处理后,移植瘤细胞G0/G1所占百分比增加,S期细胞减少。鱼油+TNFα组tmTNFαmRNA水平比对照组高,而鱼油组和TNFα组tmTNFαmR-NA表达水平与对照组差异无统计学意义。结论鱼油在体内能诱导外源性tmTNFα在移植瘤组织中高效表达,并增强鱼油对乳腺癌移植瘤的抑制作用。 张乾勇 糜漫天 承海关键词:鱼油 Ω-3多不饱和脂肪酸 乳腺癌 ω-3PUFA及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞生长的影响 被引量:3 2005年 目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将ω-3PUFA可调控的跨膜型TNFα真核表达载体转导入HL-60和MCF-7细胞,免疫荧光细胞化学方法检测ω-3PUFA对转染细胞外源基因表达的调控,生长曲线、流式细胞和DNA梯形带分析检测ω-3PUFA对转染细胞增殖能力和凋亡的影响。结果:在6.0×10-5mol/Lω-3PUFA诱导下转染细胞外源性跨膜型TNFα表达增加。HL-60和MCF-7细胞经6.0×10-5mol/Lω-3PUFA处理后增殖能力减弱,但只有HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期及形成DNA梯形带。经ω-3PUFA处理后,以上变化在HL-60和MCF-7转染细胞中均更为显著。结论:ω-3PUFA诱导的外源性跨膜型TNFα基因产物可以增强ω-3多不饱和脂肪酸的抗肿瘤能力,而诱导细胞凋亡可能是其中重要机制之一。 承海 糜漫天 张乾勇关键词:Ω-3脂肪酸 Q 凋亡 肿瘤 半胱氨酸蛋白酶在EPA和DHA抑制HL-60细胞增殖中的作用 2005年 目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPCR和免疫印迹技术分析细胞caspase3、caspase8基因的表达变化,激酶活性分析检测caspase8活性。并观察caspases特异性抑制剂对ω3脂肪酸引起的HL60细胞生长抑制的拮抗作用。结果HL60细胞经ω3多不饱和脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并检测到约6%的凋亡率,caspase3、caspase8基因表达增加,caspase8活性升高。caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸对HL60细胞的增殖抑制作用。结论ω3脂肪酸可以抑制HL60细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而上调caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。 张乾勇 糜漫天 承海 唐勇关键词:Ω-3多不饱和脂肪酸 半胱氨酸蛋白酶 HL-60细胞