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国家自然科学基金(30100163)

作品数：4 被引量：8H指数：2
相关作者：王青青洪学军沈芬平余海李达更多>>
相关机构：浙江大学浙江省杭州市第三人民医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 3篇蛋白
  • 3篇抗原
  • 3篇RCAS1
  • 2篇肿瘤
  • 2篇肿瘤相关
  • 2篇肿瘤相关抗原
  • 2篇细胞
  • 2篇相关抗原
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质类
  • 1篇凋亡
  • 1篇孕激素
  • 1篇质粒
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇乳腺
  • 1篇乳腺癌
  • 1篇乳腺癌细胞
  • 1篇乳腺癌细胞M...
  • 1篇逆转
  • 1篇逆转录

机构

  • 4篇浙江大学
  • 1篇浙江省杭州市...

作者

  • 4篇王青青
  • 3篇洪学军
  • 2篇沈芬平
  • 1篇黄常新
  • 1篇杨关根
  • 1篇马文学
  • 1篇李达
  • 1篇余海

传媒

  • 2篇浙江大学学报...
  • 1篇中华胃肠外科...
  • 1篇检验医学

年份

  • 1篇2007
  • 2篇2006
  • 1篇2005
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
肿瘤相关抗原RCAS1重组质粒的构建与GST-RCAS1融合蛋白的表达和纯化及鉴定被引量：1
2006年
目的:构建RCA S1的重组质粒、表达GST-RCA S1融合蛋白并进行纯化和生物学活性鉴定。方法:从M CF-7细胞提取总RNA,通过RT-PCR得到RCA S1的扩增产物,纯化后用E coRⅠ和BamHⅠ双酶切。选择pGEX-2T作为载体,用E coRⅠ和BamHⅠ双酶切后与上述酶切后DNA连接,转化感受态JM 109大肠杆菌,挑单个菌落提取质粒进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒重新转化BL 21大肠杆菌,用终浓度0.1 mm o l/L的IPTG诱导表达GST-RCA S1蛋白,用GST亲和层析纯化并通过SDS-PAGE电泳和W estern印迹试验证实。利用特异性抗RCA S1多抗(N-18和C-20)鉴定所表达的融合蛋白,通过流式细胞仪检测GST-RCA S1融合蛋白诱导活化T细胞凋亡的作用。结果:通过RT-PCR得到大小为642bp的产物,重组质粒通过双酶切和测序鉴定正确。通过IPTG诱导在BL 21大肠杆菌中表达并纯化得到GST-RCA S1蛋白,通过SDS-PAGE电泳鉴定分子量为52 kM r,与预测一致,并由W estern印迹试验证明为GST融合蛋白。该融合蛋白能被特异性抗RCA S1(N-18和C-20)多抗识别。GST-RCA S1对诱导活化的T细胞凋亡有一定的作用。结论:成功构建RCA S1的重组质粒,并表达GST-RCA S1融合蛋白,对其生物学活性作了初步研究。
洪学军沈芬平王青青
关键词：RCAS1重组质粒
雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响被引量：3
2007年
目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原（RCAS1）分子的影响。方法用浓度为10^12～10^-8mol／L的雌激素或浓度为10^-9～10^-5mol／L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后，用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化，用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10^-12～10^-8mol／L范围内随着雌激素浓度的增加，MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势，在10^-11、10^-10、10^-9、10^-8mol／L范围内雌激素组与未处理对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。随着10^-9～10^-5mol／L的孕激素浓度的增加，MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势，孕激素各组与未处理对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32000的条带，其灰度随着雌激素浓度的增加而增强，随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达，孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。
葛冰磊洪学军王青青
关键词：雌激素孕激素MCF-7细胞逆转录聚合酶链反应
超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A锚定的膜表达热休克蛋白70的肠癌瘤苗的抗癌治疗作用研究被引量：2
2006年
目的研制超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)锚定的膜表达热休克蛋白(HSP)70的肠癌细胞瘤苗,研究其抗肿瘤治疗作用。方法以先期实验制备的膜表达HSP70肠癌细胞株CT26。扩增后以本研究组早先研制的跨膜型SEA蛋白转染法锚定肠癌细胞,灭活并制备双重修饰的肠癌细胞瘤苗。观察瘤苗在体外对小鼠脾淋巴细胞的增殖刺激效应；在BALB/c小鼠结直肠癌移植模型中观察瘤苗的抗癌治疗作用：瘤体生长抑制和荷瘤鼠的生存时间；并同时检测实验鼠的自然杀伤细胞(NK)和细胞毒淋巴细胞(CTL)活性。结果激光共聚焦显微镜和流式细胞术均证明瘤苗细胞的双重修饰：SEA锚定,HSP70表达并结合在瘤苗细胞膜表面。比较对照,SEA锚定或膜表达HSP70的单一修饰瘤苗均显示出较高的鼠淋巴细胞增殖刺激效应；较强的瘤体生长抑制,并使荷瘤鼠的生存时间延长。而SEA锚定的膜表达HSP70的双重修饰瘤苗比单一修饰瘤苗,有着更高的淋巴增殖刺激效应,更强的瘤体生长抑制作用,并使荷瘤鼠的生存时间进一步延长。结论成功研制了超抗原SEA锚定的膜表达HSP70的肠癌细胞瘤苗,此双重修饰瘤苗对结直肠癌荷瘤小鼠有更强的治疗作用。
黄常新余海杨关根王青青李达马文学沈芬平
关键词：超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A热休克蛋白70瘤苗
一种新的肿瘤相关抗原RCAS1被引量：2
2005年
RCA S1(receptor-b ind ing cancer an tigen expressed on S iSo ce lls)是一种新近发现的肿瘤相关抗原,为Ⅱ型跨膜蛋白,表达在多种不同类型的肿瘤细胞表面,而且RCA S1的表达与肿瘤的分化、侵袭性和恶性程度呈正相关,并提示不良预后。最近研究表明,RCA S1能诱导活化后的免疫细胞发生凋亡,这可能是RCA S1表达在肿瘤细胞表面进而逃避机体免疫监视的机制之一。
洪学军王青青
关键词：膜蛋白质类肿瘤相关抗原细胞凋亡
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