国家自然科学基金(81200250)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
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- 外源性硫化氢减轻D-半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠血管老化被引量：8
- 2014年
- 本文旨在观察亚急性衰老大鼠血管壁结构和功能的改变,探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对血管老化的影响。雄性SD大鼠40只,随机分为溶剂组、D-半乳糖组、NaHS(H2S的供体)低、中、高剂量组,每组8只。D-半乳糖组每日背部皮下注射125 mg/kg D-半乳糖,连续8周;溶剂组每日背部皮下注射等体积生理盐水;NaHS低、中、高剂量组每日背部皮下注射125 mg/kg D-半乳糖,同时分别按1、10、100μmol/kg腹腔注射NaHS,连续8周。HE和Masson染色法观察各组大鼠主动脉形态学改变;硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法检测大鼠主动脉超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及抗超氧阴离子含量;生化方法测定大鼠血清H2S浓度的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血浆血管紧张素II(AngII)浓度变化;免疫印迹法测定大鼠主动脉血管紧张素II型1类受体(AT1R)蛋白的表达。结果显示,与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠血清H2S的浓度降低(P<0.05);而给予NaHS处理后,NaHS各剂量组大鼠血清H2S的浓度较D-半乳糖组明显升高(P<0.05)。血清H2S浓度的增高能够改善D-半乳糖引起的亚急性衰老大鼠主动脉形态学的变化。HE染色结果中,溶剂组主动脉内膜较薄,结构完整,中膜平滑肌排列规则;D-半乳糖组主动脉内膜增厚、隆起,内皮细胞部分脱落,中膜明显增厚,平滑肌增生、紊乱;与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组内皮细胞脱落减少,平滑肌细胞增生减少。Masson染色结果表明:与溶剂组相比,D-半乳糖组胶原纤维增多,平滑肌细胞增生(P<0.05);与D-半乳糖组相比,NaHS各剂量组胶原纤维减少,平滑肌细胞增生减少(P<0.05)。ELISA检测结果显示:与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠血浆AngII浓度明显升高(P<0.05);而给予NaHS处理后,NaHS各剂量组大鼠血浆AngII浓度较D-半乳糖组明显降低(P<0.05)。与溶剂组相比,D-半乳糖组大鼠主动脉SOD活性下降、MDA含量升高、抗超氧阴�
- 乔伟丽杨文学刘磊石玥崔洁柳红闫长栋
- 关键词：D-半乳糖主动脉
- 外源性H2S增加Keap1硫巯基化水平延缓大鼠主动脉内皮细胞衰老的机制
- 2018年
- 目的研究硫化氢（hydrogensulfide，H2S）延缓大鼠主动脉内皮细胞（RAECs）衰老的机制。方法细胞按不同处理方法分为6组：年轻组、老年组、DMSO组、NaHS组、ATRA组、NaHS＋ATRA组。用β-半乳糖苷酶（β-ga1）染色法检测内皮细胞的老化程度，用改良生物素法测定内皮细胞Keap1巯基蛋白，用免疫印迹法测定内皮细胞核转录因子（Nrf2）和超氧化物歧化酶2（SOD2）。结果与年轻组相比，老年组细胞β—ga1染色阳性数升高（P〈0．01）。给予外源性H2S（NariS）处理后，老年组细胞染色阳性数降低（P〈0．01）。预先给予Nrf2阻断剂全反式维甲酸（ATRA）后，老年组细胞染色阳性数升高（P〈0．01）。与老年组相比，NariS处理组内皮细胞Keap1硫巯基化水平、Nrf2和SOD2蛋白表达均升高（P〈0．01）；预先给予ATRA阻断Nrf2蛋白表达后，内皮细胞Nrf2及SOD2蛋白表达均明显降低（P〈0．01）。结论外源性H2S能通过提高内皮细胞Keap1的硫巯基化水平，减弱Keap1对Nrf2的抑制作用，促进Nrf2进入细胞核，从而增加其下游SOD2蛋白的表达，提高内皮细胞的抗氧化应激作用，延缓内皮细胞的衰老进程。
- 丁宁顶乔伟丽刘磊崔洁闫长栋
- 关键词：衰老大鼠主动脉内皮细胞
- 外源性H2S改善老年大鼠血管功能
- 2016年
- 目的探讨H：S对老年血管功能的影响。方法雄性sD大鼠30只，随机分为年轻组，老年大鼠对照组，老年大鼠NariS（H2S的供体）低（1μmol·kg^-1·d^-1）、中（5μmol·kg^-1·d^-1）、高（10μmol·kg^-1·d^-1）剂量组，每组6只。颈总动脉插管观察NariS对老年大鼠心率及动脉血压的影响，离体血管环灌流方法评估大鼠血管收缩及舒张功能，Masson染色方法观察血管形态学改变。结果与年轻组相比，老年大鼠动脉血压降低（P〈0．05），心率明显减慢，血管收缩舒张功能受损（P〈0．05），给予低、中、高剂量的NariS后，动脉血压均没有明显改善，但老年大鼠的心率明显增加（P〈0．05）；NariS中剂量组能明显改善老年大鼠血管收缩舒张功能（P〈0．05）。与年轻组相比，老年大鼠血管胶原纤维增多，给予低、中、高剂量的NaHS后，血管周围胶原沉积有不同程度减少，NaHS中、高剂量组更为明显。结论适量的外源性H：S能够改善老年大鼠血管的功能。。
- 彭娇娇陈冰刘磊闫长栋乔伟丽
- 关键词：H2S血管舒张
- 脊髓NF-κB／IL-6信号通路在小鼠烫伤痛中的作用
- 2016年
- 目的研究脊髓NF-κB／IL-6信号通路在小鼠烫伤痛中的作用。方法造模分组：将24只小鼠随机分为正常组（N组）、假手术组（S组）和烫伤疼组（BI组），每组8只。检测造模当天和造模后3、7和14天各组小鼠热缩足潜伏期（TwL）及脊髓中核因子KB（NF-κB）和白细胞介素-6（IL-6）mRNA的含量。治疗分组：将40只小鼠随机分为假手术组（s组）、假手术＋生理盐水组（s＋NS组）、烫伤痛组（BI组）、烫伤痛＋生理盐水组（BI＋NS组）和烫伤痛＋NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）组（BI＋PDTC组），每组8只。测定各组小鼠治疗前及治疗第3、4、5、6天的TwL，并在治疗后第6天检测各组小鼠脊髓NF-κB和IL-6mRNA的含量。结果与造模当天相比，造模后3、7和14天BI组小鼠TwL明显降低，脊髓NF-κB和IL-6mRNA的含量明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。与BI＋NS组相比，治疗第3、4、5和6天BI-4-PDTC组小鼠的TwL明显增加，治疗第6天脊髓中NF-κB和IL-6mRNA含量明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论阻断脊髓NF-κB／IL-6信号通路可以减轻小鼠烫伤痛敏。
- 钱海涛马叶枝刘磊闫长栋
- 关键词：核因子-ΚB白细胞介素-6烫伤
- 外源性硫化氢减轻D－半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠心肌纤维化
- 2016年
- 目的：观察硫化氢（ H2 S）处理对亚急性衰老大鼠心肌纤维化的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为3组，每组6只。对照组每日背部皮下和腹腔注射等体积生理盐水；D－半乳糖组每日背部皮下注射D－半乳糖（125 mg· kg^-1· d^-1），同时腹腔注射等体积生理盐水；硫氢化钠（NaHS，H2S供体）组每日背部皮下注射D－半乳糖（125 mg·kg^-1· d^-1），同时腹腔注射NaHS（10μmol· kg^-1· d^-1）。每组处理时间均为8周。苏木精－伊红染色和Masson染色观察大鼠心肌细胞和心肌胶原纤维等形态学变化；免疫印迹法测定大鼠心肌基质金属蛋白酶2（MMP－2）及基质金属蛋白酶抑制剂－1（TIMP－1）蛋白的表达。结果与对照组相比，D－半乳糖组大鼠心重指数增高（P＜0．01），心肌胶原纤维容积率增加（P＜0．05），心肌组织MMP－2表达减少（P＜0．01），TIMP－1表达增加（P＜0．01）。与D－半乳糖组相比，NaHS组大鼠心重指数降低（P＜0．05），心肌胶原纤维容积率减少（P＜0．05），心肌MMP－2表达增加（P＜0．05），TIMP－1表达减少（P＜0．01）。结论外源性H2S处理可以促进心肌胶原纤维降解，抑制胶原纤维聚集，从而减少D－半乳糖诱导的亚急性衰老大鼠心肌纤维化，其机制可能是通过减少TIMP－1蛋白的表达，增加MMP－2的活性，调节MMP－2／TIMP－1的平衡实现。
- 黄继良刘磊乔伟丽夏勇闫长栋
- 关键词：衰老心肌纤维化基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶抑制剂-1
- Ki67和p53蛋白表达在外源性硫化氢抗内皮细胞老化过程中的作用
- 2016年
- 目的探索外源性硫化氢（H2S）抗内皮细胞老化过程中对Ki67和p53表达量的影响。方法将大鼠主动脉内皮细胞（RAECs）随机分为3组，即年轻组（原代RAECs传至第4代）、老年组（原代RAECs传至第12代）、硫氢化钠（NaHS，细胞内H2S的供体，即外源性H2S）组（RAECs从第4代开始给予NaHS10μmol／L处理至第12代）。用β-半乳糖苷酶（SAβ-gal）染色法鉴定细胞老化程度，DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点（SAHF）的表达变化，Western blot方法检测Ki67及p53蛋白的表达量。结果给予NaHS处理后，细胞老化程度及SAHF的表达明显低于老年组（P〈0．01）；Ki67及p53蛋白在老年组RAECs中表达量明显低于年轻组（P〈0．01），而NariS处理后Ki67及p53表达量较老年组明显增加（P〈0．05）。结论外源性H2S（即NaHS）延缓内皮细胞老化过程中Ki67及p53基因的表达显著增加，提示外源性H2S延缓血管内皮细胞老化可能与提高Ki67、p53表达有关。
- 李洪民李岩刘磊崔洁闫长栋
- 关键词：硫氢化钠KI67主动脉内皮细胞
- 外源性硫化氢通过Keapl—Nrf2信号通路减轻胃缺血再灌注引起的黏膜损伤被引量：3
- 2015年
- 目的观察外源性硫化氢（hydrogensulfide，H：S）供体NariS预处理对大鼠胃缺血再灌注（gastricische—mia—reperfusion，GI—R）损伤的影响及其可能的作用机制。方法雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠，实验分3组：假手术（Sham）组、GI—R组和NaHS组。采用夹闭腹腔动脉30min再灌注1h方法建立GI—R损伤模型。GI～R后处死各组大鼠，采用AdobePhotoshop软件分析计算GI～R引起的胃黏膜损伤面积，苏木精一伊红染色后光镜下观察GI—R引起的胃黏膜损伤深度，化学比色法检测大鼠胃黏膜中过氧化氢（H2O2）和谷胱甘肽（GSH）含量，免疫印迹法测定大鼠胃黏膜组织中Keapl、Nrt2、超氧化物歧化酶（SOD2）和黄嘌呤氧化酶（XOD）的表达，免疫组化法检测大鼠胃黏膜Keapl和Nrf2表达。结果GI—R组胃黏膜损伤明显、损伤深度较深，NaHS组胃黏膜损伤面积和深度较GI—R组明显缩小和减少。与GI—R组相比，NaHS预处理后能增加胃黏膜组织中GSH、Nrf2、SOD2水平（P〈0．05），降低H2O2、Keapl、XOD水平（P〈0．05）。结论外源性Hs预处理可以通过Keapl—Nrf2信号通路减轻大鼠胃缺血再灌注引起的黏膜损伤。
- 吴迪刘磊王光明石玥闫长栋
- 关键词：硫化氢KEAP1NRF2
- 丹参素通过SIRT1-SOD信号通路延缓大鼠主动脉内皮细胞老化被引量：2
- 2014年
- 本研究旨在观察丹参素(Danshensu,DSS)预处理对大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的影响及机制。原代RAECs株传代培养到第四代为年轻组细胞(Young group),传代至第十二代为老年组细胞(Old group);自第四代起,给予DSS孵育到第十二代,即为DSS组细胞;自第四代起,联合给予DSS和细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂尼克酰胺(NAM)孵育到第十二代,即为DSS+N组细胞。用细胞衰老β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色法鉴定细胞老化程度,DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点(senescence associated heterochromatin foci,SAHF)的表达变化,硫代巴比妥酸(TBA)法和化学比色法检测RAECs中丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量,免疫印迹法测定细胞SIRT1、黄嘌呤氧化酶(XOD)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达。结果显示,与年轻组相比,老年组细胞发生明显衰老,细胞SAβ-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量显著增加(均P<0.01);DSS处理能明显减少老年组细胞SAβ-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量(P<0.05或P<0.01),SIRT1阻断剂可以逆转DSS对细胞的保护作用;免疫印迹结果显示,与年轻组相比,老年组细胞XOD蛋白表达增加,SIRT1和SOD2蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01),DSS可以使老年组细胞XOD蛋白表达减少,SIRT1和SOD2蛋白表达增加(P<0.05);而给予SIRT1阻断剂逆转DSS的作用。以上结果提示,DSS预处理能减轻RAECs的氧化应激水平,延缓细胞的衰老进程,其机制可能与SIRT1蛋白表达的上调有关。
- 王硕吴迪刘磊崔洁乔伟丽孙红闫长栋
- 关键词：丹参素大鼠主动脉内皮细胞氧化应激
- 硫化氢通过CaMKKβ-AMPK信号通路延缓大鼠主动脉内皮细胞老化被引量：4
- 2016年
- 该研究探讨了硫化氢(H2S)延缓大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的机制。原代RAECs传代培养至第4代为年轻组,传代至第12代为老年组。从第4代起,给予H2S的供体Na HS培养至第12代为Na HS组;从第4代起培养至第12代,在提取处理细胞前6 h加入Ca MKKβ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinaseβ)特异性抑制剂STO-609共培养,即STO-609组;从第4代起,给予H2S的供体Na HS培养至第12代,在提取处理细胞前6 h加入STO-609共培养,即Na HS+STO-609组。采用SA-β-gal(senescence-associatedβ-galactosidase)染色法和DAPI荧光染色法检测细胞的老化程度和老化相关异染色质(senescence-associated heterochromatin foci,SAHF)的表达变化。通过化学比色法检测RAECs的NO(nitric oxide)含量。应用Western blot方法检测细胞Ca MKKβ、AMPK(AMP-activated protein kinase)和p-AMPK蛋白的表达。结果显示,与年轻组相比,老年组细胞老化程度明显增加,细胞中SA-β-gal阳性率和SAHF形成率显著增加(P<0.01),NO含量明显下降(P<0.01)。与老年组相比,Na HS处理组的SA-β-gal阳性率和SAHF形成率明显下降,同时NO含量上升(P<0.01)。与年轻组相比,老年组Ca MKKβ、AMPK和p-AMPK蛋白质水平明显降低(P<0.01),而给予Na HS处理后,Ca MKKβ、AMPK和p-AMPK增加(P<0.05)。给予STO-609阻断Ca MKKβ信号通路,能够降低或消除Na HS的细胞保护作用(P<0.01)。结果表明,外源性H2S通过影响Ca MKKβ-AMPK信号通路减轻RAECs的衰老过程,延缓了细胞老化的进程。
- 李岩李洪民刘磊乔伟丽崔洁张琳闫长栋
- 关键词：硫化氢大鼠主动脉内皮细胞AMPK
