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广东省自然科学基金(980223)
作品数:
6
被引量:47
H指数:3
相关作者:
郭亚兵
戴琳
杨洁
骆抗先
闫丽
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相关机构:
中国人民解放军第一军医大学
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发文基金:
国家自然科学基金
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郭亚兵
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应用多重PCR法对广东地区HBV进行基因型(A-F)分型
被引量:24
2002年
目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因型(A-F)多重PCR分型方法,并利用该方法对广东地区HBV PCR阳性血清进行分型。方法将GenBank中114例HBV 全序列进行比较分析,找出每种基因型相对于其他五种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出六对分别针对A-F基因型的特异引物。利用这六对引物建立HBV的多重PCR分型法。结果多重PCR与以前用PCR-限制温度长度多态型分析法的分型结果一致。对广州周边地区HBV携带者的初步分型结果显示,主要为B型和C型,分别占45.00%和38.75%,另外还有16.25%的D型。结论用多重PCR分型法准确易行,灵敏性高,便于推广应用。
杨洁
戴琳
郭亚兵
杨守昌
王燕军
骆抗先
关键词:
乙型肝炎病毒
基因型
多重聚合酶链反应
HBV基因型(A~F)多引物对PCR分型法的初步建立
2001年
杨洁
郭亚兵
骆抗先
戴琳
闫丽
侯金林
关键词:
遗传型
引物
PCR
HBV
首例中国株乙型肝炎病毒D基因型全序列测定及分析
被引量:1
2001年
目的 测定并分析1例中国慢性无症状携带者感染的乙型肝炎病毒(HBV)D基因型的全基因序列。方法 用聚合 酶链式反应(PCR)扩增HBV全基因,将PCR产物克隆后对其进行核酸序列分析并与已发表的HBV毒株全序列进行 同源性比较;对 GenBank中已发表的30株HBV D基因型毒株的全序列进行系统进化树分析。结果 该病毒全基因长 3182bp,为ayw亚型,D基因型;此毒株全基因GenBank AccessionNo为AF280817;与GenBank中已发表的HBVD 基因型全序列同源性为98.3%~94.5%,与已发表的 A、B、C、E、F和G基因型全序列同源性均小于89.5%。结论 首例中 国株 HBV D 基因型全序列与源于瑞典的四株 HBV D 基因型全基因的进化距离最近。
阎丽
侯金林
郭亚兵
陈金军
王战会
林裕龙
骆抗先
牛贞玉
关键词:
乙型肝炎病毒
D基因型
进化树
HBV
乙型肝炎病毒基因型(A-F)多引物PCR分型法的初步建立
被引量:20
2002年
目的 建立一种简便易行的乙型肝炎病毒基因型分型方法(只需 PCR)。方法 对 GenBank中查获的114例HBV全序列进行比较分析,找出每种基因型相对于其他5种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出6对分别针对A-F基因型的特异引物。用这6对引物分别对标本进行PCR,根据阳性结果判断出标本的基因型。进一步简化该方法,用多引物对PCR法(PCR with several primer sets in a single tube,Multiplex PCR)将B、C、D 3种基因型的特异引物混台进行PCR,根据扩增片断的大小判断基因型。用此方祛对已鉴定的B、C、D型标本进行比较和验证。结果 单引物对PCR与多引物对PCR的分型结果一致,且与以前用PCR-RFLP法的分型结果一致。结论 用多引物对PCR分型法准确易行,灵敏性高,便于推广应用。
杨洁
骆抗先
郭亚兵
戴琳
闫丽
候金林
关键词:
乙型肝炎病毒
基因型
聚合酶链反应
RFLP基因分型在动态监测乙型肝炎病毒基因变异中的应用
被引量:6
2001年
目的探讨基因分型结合克隆后测序方法在动态监测HBV基因变异中的价值。方法分析1例重型肝炎患者发 病后血清,用 PCR扩增血清中 HBV preS/S基因片段并克隆,2份标本各随机挑取 3个阳性克隆进行测序;同时用 RFLP方法分析2份血清中HBV毒株的基因型。结果PFLP分析2份血清为B基因型为主的B/C基因型混合毒株感 染;6个克隆中仅1株为C基因型。比较2份血清HBV preS/S克隆核酸序列,有170个点位的差异,剔除C基因型株 后,仅54个位点差异。结论克隆后测序结合RFLP对HBV基因型测定有助于更准确地对HBV基因变异进行动态分 析。
丁红兵
郭亚兵
戴琳
阎丽
彭吉力
周福元
关键词:
基因分型
乙型肝炎病毒
基因变异
乙型肝炎
RFLP
杆状病毒载体介导的氯霉素乙酰转移酶基因在HepG2中的表达
被引量:1
2001年
目的 重组杆状病毒AcMNPV载体并观察其在人肝癌细胞株中的基因转移效率及表达。方法 用PCR方法获得氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因及CMV与核因子(NFκB)启动子和增强子序列,并插入AcMNPV中,用同源重组方法获得CAT重组杆状病毒。分别感染昆虫细胞Sf5和人肝癌细胞株HepG2或HepG2.2.15细胞,测定CAT表达相对活性。结果 由CMV启动子驱动的CAT重组杆状病毒在HepG2或HepG2.2.15细胞均可表达CAT,而NFκB启动子驱动的CAT重组杆状病毒在HepG2细胞中CAT表达低,而在有HBV表达的HepG2.2.15细胞中有较高的CAT表达活性。结论 重组杆状病毒能在人肝癌细胞中表达外源基因,而且成功构建了HBV感染细胞特异性表达的杆状病毒载体。
郭亚兵
戴琳
冯筱榕
杨洁
周福元
关键词:
杆状病毒载体
HEPG2细胞系
乙型肝炎病毒
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