浙江省自然科学基金(Y308408)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：毛芝娟陈吉刚黄辉何超军邱杨玉更多>>
- 相关机构：华中农业大学浙江万里学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK真核表达载体构建及在毕赤酵母中的表达被引量：3
- 2011年
- 采用已构建的原核重组质粒pET30a-OmpK为模板,通过PCR扩增OmpK成熟肽基因片段,引入酶切位点后克隆至分泌表达载体pPIC9K,经SalⅠ线性化后,氯化锂法转化至毕赤酵母GS115中,并经G418遗传霉素筛选高拷贝酵母转化子,最后进行甲醇诱导表达,表达上清经SDS-PAGE电泳检测及Western-blot鉴定,表明重组蛋白已经表达。
- 何超军邱杨玉毛芝娟陈吉刚吴志新
- 关键词：毕赤酵母
- 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU的克隆、表达与免疫原性研究被引量：13
- 2010年
- 根据已发表的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）外膜蛋白OmpU的基因序列设计1对特异性引物,应用聚合酶链式反应（PCR）方法,自哈维氏弧菌致病菌株基因组中扩增获得一段约1 000 bp的序列,构建重组载体pMD18-T-OmpU;测序结果表明,该基因与已发表的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU序列存在98%以上的相似性,该序列在GenBank上的登录号为FJ919231。构建表达质粒pET-30a（＋）-OmpU后转化至大肠杆菌E.coliBL21（DE3）,在IPTG诱导下实现高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约为41 ku,与预期基本相符。重组蛋白以包涵体形式表达。以脲素法得到初步纯化的重组蛋白,以50μg/mL的剂量注射免疫大黄鱼幼鱼,经间接ELISA法检测了4-8周后特异性抗体的效价,同时检测了注射后4周的免疫保护率。结果表明,4-8周内特异性抗体效价持续升高,达到log28.0以上,4周时的相对免疫保护率为85%。试验结果显示了重组哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU具有良好的免疫原性,可作为亚单位疫苗的开发对象。
- 黄辉毛芝娟陈吉刚
- 关键词：哈维氏弧菌克隆原核表达免疫原性
