国家自然科学基金(21162018)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：田颖刚徐德利廖春艳张丽黄宇玫更多>>
- 相关机构：南昌大学南京农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- H2O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡中黑色素含量的研究
- 2019年
- 本研究首次建立了简单、快速地测定乌骨鸡黑色素含量的荧光分析方法。乌骨鸡黑色素在碱性条件下经过氧化氢氧化后产生强烈的荧光。本研究优化了样品前处理条件以及氧化反应条件,对线性范围、检测限以及加标回收率进行了评价。结果表明,最佳氧化条件:氧化温度为55℃,过氧化氢溶液工作浓度范围为20%~25%,氧化反应时间为2 h;最佳样品前处理的条件:NaOH浓度为0.1~0.2 M,超声时间为40 min,超声温度为70℃。黑色素浓度在50~600μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9986。与传统检测方法相比,荧光分析法无需从样品中提取黑色素,极大地加快了分析速度,简化了分析操作,并且该方法相对于紫外分光光度法的检测限降低了至少10倍。样品添加不同浓度的黑色素工作标准品的平均回收率为102.87%,RSD值为4.51%。采用该方法测定了乌骨鸡鸡皮、腿肌、胸肌中的黑色素含量,结果显示乌骨鸡肉中的黑色素含量:鸡皮>腿肌>胸肌,分别占鲜重的1.08%、0.44%、0.34%。以上结果表明该方法较快速、准确、检测限低,适用于乌骨鸡中黑色素含量的测定。
- 陈露露田颖刚
- 关键词：乌骨鸡黑色素荧光分析法
- 乌骨鸡皮肤黑色素细胞的原代培养及鉴定被引量：5
- 2014年
- 为探讨获得大量高纯度乌骨鸡黑色素细胞不同方法的优劣,以及进一步研究乌骨鸡黑色素细胞生物特性及其黑色素的生物合成,以1周龄乌骨鸡雏鸡腹侧皮肤作为黑色素细胞来源,采用胰蛋白酶、中性蛋白酶和胶原酶Ⅰ消化进行细胞产量和贴壁效率评估,杂细胞用十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)选择性消除,最后细胞长期培养在添加胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、TPA和实验室自制活性肽的DMEM基础培养基中。利用多巴染色法、透射电镜对获得细胞的性质进行鉴定。结果显示,胶原酶Ⅰ较中性蛋白酶和胰蛋白酶消化分离获得的黑色素细胞具有更高细胞产量和细胞活力,原代培养5d后,达到融合,未见角质形成细胞和成纤维细胞污染。因此,采用胶原酶Ⅰ消化并使用添加多种刺激因子的培养基,可建立乌骨鸡黑色素细胞的有限细胞系。
- 田颖刚廖春艳徐德利
- 关键词：乌骨鸡黑色素细胞原代培养
- 泰和乌骨鸡黑色素细胞形态与分布特征被引量：7
- 2015年
- 本研究旨在从组织、细胞水平上观察泰和乌骨鸡皮肤和肌肉组织中黑色素及其细胞的分布和定位,以揭示乌骨鸡黑色性状的细胞学机制。试验对乌骨鸡皮肤和肌肉组织进行取材、固定、石蜡包埋、切片,并采用HE、多巴、硫酸亚铁、多巴-甲苯胺蓝等多种染色方法进行染色和光镜分析。结果:泰和乌骨鸡的皮肤和肌肉组织中均有成熟黑色素细胞和黑色素的分布,表明乌骨鸡黑色素是由分布于此的黑色素细胞产生和沉积;乌骨鸡黑色素细胞形态因定位不同而异,呈圆形、蝌蚪形、星形和细长树突状不等,黑色素细胞树突间常相互连接成网络状或者条带状。试验表明:乌骨鸡黑色素细胞在两种组织中的分布不均匀,在结缔组织中分布较多。
- 田颖刚徐德利廖春艳
- 关键词：乌骨鸡黑色素细胞切片染色组织学分析
- H2O2氧化-荧光分析法测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量被引量：1
- 2020年
- 建立一种简单、准确、灵敏度高的测定乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量的荧光分析法。黑色素不发荧光,一旦在强烈的氧化条件下(在碱性过氧化氢中加热)被氧化后就会发出强烈的荧光,通过测量其相对荧光强度来测定细胞中黑色素的含量。利用荧光分光光度计在带宽为5 nm,扫描速度为2400 nm·min^-1,扫描间距为1 nm的条件下确定乌骨鸡黑色素的激发波长和发射波长。通过单因素实验筛选浓度范围在10~100μg·mL^-1的乌骨鸡黑色素的最佳氧化条件,对该方法的线性范围、检测限、仪器精密度、重复性等结果进行分析评价。向A375细胞(无黑色素的人的黑色素瘤细胞)样品中分别加入25,40和80μg·mL^-1黑色素标准品,在最佳氧化条件下进行反应后测定细胞样品中黑色素含量。计算测定值与理论值的相对误差值,意在探究细胞中杂蛋白和脂质对黑色素定量结果的影响;向乌骨鸡黑色素细胞样品中分别加入5.00,7.50和10.00μg的黑色素标准品,按照最佳氧化条件测定其细胞样品中总黑色素含量,并计算其加标回收率。结果表明:乌骨鸡黑色素的激发波长为354 nm,发射波长为453 nm;乌骨鸡黑色素最佳氧化条件为:pH为8,氧化温度为55℃,过氧化氢浓度范围为24%~26%,氧化时间为2 h;黑色素浓度在10~100μg·mL^-1范围内与相对荧光强度呈良好线性关系,相关系数r=0.9974,线性回归方程为b=0.0147a+0.3138,荧光分析法的方法检出限为0.30μg·mL^-1,紫外分光光度法的方法检出限为3.68μg·mL^-1;精密度实验的RSD值为1.87%,重复性实验的RSD值为4.59%;在A375细胞中加入不同质量的黑色素标准品后,测量值与理论值的相对误差分别为2.78%,3.53%和0.25%;在乌骨鸡黑色素细胞中加入不同黑色素标准品后,测得的加标回收率分别为95.94%,92.14%和99.83%,RSD值为4.00%;综上所述,该方法简单、准确、稳定、检测限低,且测定结果不受细胞内杂�
- 陈露露田颖刚
- 关键词：乌骨鸡黑色素细胞黑色素含量荧光分析法
- 乌骨鸡与非药用鸡种矿物元素含量特征比较研究被引量：3
- 2018年
- 乌骨鸡与非药用鸡种矿物质与微量元素含量特征的分析比较。乌骨鸡(BSF)是中国特有的传统药食两用鸡种,岭南黄鸡(LNYC),崇仁麻鸡(CRC)在中医药传统上一般不作药用,但属养殖范围较广,饲养量较大的两个优质鸡种。矿物元素含量与分布特征除了和鸡种有关外,还和饲养条件尤其是饲料和水源有密切关系。因此引入上述相同条件饲养的两种非药用鸡种作为参比对照,可以消除实验误差,增强实验结果的可靠性。利用具有分析速度快,测定范围广,分析准确度和精密度高,良好的选择性和多元素同时测定等多个优点的电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法测定两类鸡种的8种矿物质元素含量,可以更好地比较出因鸡种不同而导致的所含矿物质元素含量的差异,更为真实地反映出乌骨鸡的营养价值。以相同的饲料、饮水、饲养环境下的两种非药用鸡种为对照,采用ICP-AES法测定乌骨鸡,岭南黄鸡﹑崇仁麻鸡在皮肤,骨骼,胸肌和腿肌组织中P,Ca,Na,K,Mg,Fe,Cu和Zn八种矿物质元素的含量。分别取其皮肤,骨骼,鸡胸肉﹑鸡腿肉作为样本(n=8),剪碎烘干至恒重,称量。取上述各供试品平行样各三份,每份精密称取约2g,分别加入10mL混酸(HClO4∶HNO_3=1∶4),加热消化。冷却后以2%HNO_3溶解定容,同时以蒸馏水为样品制备一份空白试液,在选定的工作条件下,对样品进行测定。ICP-AES法主要工作条件设置如下:射频功率1.2kW;辅助气流量0.2L·min^(-1);雾化气流量为0.8L·min^(-1);等离子气流量为15L·min^(-1);溶液提升量为1.5mL·min^(-1);冷却气流量15L·min^(-1)。所有样品的测定实验重复三次。所有数据均以平均值±标准偏差(x±s)表示。显著性分析采用SPSS20.0统计软件的t检验进行评价。研究不同组的变量值采用单因素方差分析,假设显著差异为p<0.05。实验测得标准曲线的相关系数r>0.999 54,检测限范围(0.01～3.90μ
- 田颖刚胡清清谢明勇
- 关键词：ICP-AES乌骨鸡矿物质元素
- 丝羽乌骨鸡活性肽对顺铂所致小鼠肾损伤的防护作用被引量：4
- 2015年
- 为研究乌骨鸡活性肽对顺铂所致小鼠肾毒性的防护作用,采用顺铂腹腔注射的方法建立顺铂肾毒性模型。将BALB/c小鼠随机分为空白组、顺铂模型组、乌骨鸡活性肽低(1 g/kg)、中(2 g/kg)、高剂量(4 g/kg)组,样品采用灌胃方式给予小鼠,分别给药处理7 d后,观察小鼠血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量及肾组织的病理变化。结果表明:与顺铂模型组比较,各治疗组小鼠血清BUN、Scr的含量降低,肾组织均浆中MDA含量下降,SOD活力、GSH-Px活力增高,其中2 g/kg剂量水平效果最佳。组织病理学检测显示乌骨鸡活性肽能够明显改善顺铂导致的肾小管坏死。结果提示,乌骨鸡活性肽可防护顺铂诱发的肾组织氧化损伤。
- 田颖刚黄宇玫张丽胡田彧
- 关键词：丝羽乌骨鸡活性肽顺铂肾损伤氧化应激
