国家重点基础研究发展计划(2002CB512906)
- 作品数：17 被引量：47H指数：4
- 相关作者：刘秉慈尤宝荣徐茗康宁周宗灿更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心北京大学中国农业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 线粒体DNA缺失对氯化锰细胞毒效应的影响
- ＜正＞目的:以表型锚定（Phenotypic Anchoring）的思路,研究氯化锰致细胞毒效应和对细胞核和线粒体之间交互作用的影响,探讨线粒体DNA缺失对氯化锰致细胞毒性的影响。方法:以低剂量（50ng/m1）溴化乙啶...
- 张朝晖傅娟玲周宗灿
- 文献传递
- 细胞周期蛋白依赖激酶K4在石英致人细胞恶性转化中的作用被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨细胞周期蛋白依赖激酶K4(CDK4)在石英致人胚肺成纤维细胞(2BS)恶性转化过程中所起的作用,为石英致癌机制提供理论依据。方法 用基因重组和基因导入的方法将表达反义CDK4 RNA的pXJ41-CDK4导入石英恶性转化的2BS细胞中。采用原位杂交和免疫组化方法检测细胞中CDK4基因表达情况,分析反义CDK4 RNA导入前后,细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变。结果 石英诱导2BS细胞恶性转化过程中CDK4基因过表达,CDK4基因mRNA表达水平的平均灰度值由26.58±4.78增加到303.47±72.39,蛋白表达水平平均灰度值由28.37±6.09增加到255.82±28.33;反义CDK4 RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖,CDK4基因mRNA表达从303.47±72.39降至43.73 4±10.12,蛋白表达从255.82±28.33降至41.92±3.25。与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41-CDK4转染细胞培养至第8天时,生长速率下降77.43％;倍增时间从21.0 h延长到42.7 h;G1期细胞比例从45.1％增加到58.0％,S期由40.3％下降到30.0％;克隆形成率明显下降,且克隆明显变小。结论 CDK4的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的CDK4对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用。
- 闫克夏刘秉慈史香林张相民尤宝荣徐茗康宁
- 关键词：CDK4恶性转化细胞细胞周期蛋白依赖激酶基因MRNA表达人细胞
- 温石棉诱发人胚肺细胞恶性转化中端粒酶的作用
- 2004年
- 目的 研究端粒酶在石棉诱发人胚肺成纤维细胞恶性转化中的作用。方法 将端粒酶基因功能片段 (hTERT)导入人胚肺成纤维细胞 (HELF)中。选用 2 5 μg/cm2 温石棉粉尘分别对导入和未导入hTERT的HELF进行染毒 ,分离转化灶 ,观察细胞生物性状 ,测定细胞生长曲线、端粒酶活性和端粒长度 ,进行软琼脂集落形成实验 ,判定转化性质。结果 将hTERT成功导入HELF ,建立了导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞系 (HELF T+ )。HELF和HELF T+ 被石棉刺激后均发生了恶性转化 ,HELF T+ 恶性转化率为 (2 0 8± 1 0 8)转化灶 /皿 ,显著高于HELF染毒组的恶性转化率 [(1 0 8±0 10 )转化灶 /皿 ]。恶性转化的细胞和HELF T+ 均具有较高的端粒酶活性和较长的端粒长度。结论 端粒酶活性较高、端粒长度较长的细胞 ,经石棉刺激后恶性转化率也较高 。
- 徐茗刘秉慈张相民史香林何鹏尤宝荣康宁
- 关键词：温石棉人胚肺细胞恶性转化端粒酶恶性肿瘤
- 细胞周期蛋白D1在石英致人细胞恶性转化中的作用被引量：4
- 2004年
- 目的探讨细胞周期蛋白D1在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)恶性转化过程中所起的作用。方法采用基因重组与基因导入的方法将表达正义和反义细胞周期蛋白D1RNA的pXJ41细胞周期蛋白D1导入石英恶性转化HELF细胞中。采用原位杂交和免疫组化的方法检测细胞中细胞周期蛋白D1基因表达情况,分析细胞周期蛋白D1导入前后细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变。结果石英诱导HELF细胞恶性转化过程中细胞周期蛋白D1基因过表达,反义细胞周期蛋白D1RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖。与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41细胞周期蛋白D1转染细胞培养至第8天时,生长速率下降5869%,倍增时间从210h延长到314h,G1期细胞比例从451%增加到527%,S期细胞比例由403%下降到331%,克隆形成率显著下降,克隆明显变小。结论细胞周期蛋白D1的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的细胞周期蛋白D1对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用。
- 闫克夏刘秉慈史香林尤宝荣徐茗康宁赵超英
- 关键词：细胞周期蛋白D1石英细胞恶性转化原位杂交
- 石英所致ROS的产生及核转录因子活化被引量：2
- 2005年
- 石英粉尘能引起肺纤维化和肺癌,近年其机制研究进展较快。本文将从活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)、核转录因子以及细胞因子的角度综述石英所致疾病的发病机制。石英粉尘进入机体后,可释放 ROS,也可刺激机体产生 ROS,包括硅氧自由基和羟自由基等。ROS 能激活核转录因子 NF-κB和 AP-1。核转录因子活化后,可进而导致多种细胞因子高表达。研究表明,核转录因子和细胞因子在环氧化酶Ⅱ(COXⅡ)和肿瘤坏死因α(TNF-α)的产生、细胞无限增生和肿瘤形成过程中都起着非常重要的作用。
- 沈福海肖淑玉刘秉慈
- 关键词：核转录因子ROS石英粉尘肿瘤形成AP-1
- 正反义细胞周期蛋白D1真核表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 2003年
- 用基因导入和基因重组技术将外源基因细胞周期蛋白D1(cyclinD1)cDNA插入到真核表达载体pXJ41 neo上 ,并用电泳鉴定其结果。结果显示 :用HindIII酶切 ,出现 2 2 9bp、42 7bp及 75 5 4bp片段的重组体为正义pXJ41 cyclinD1真核表达载体 ;出现 42 7bp、1184bp及 65 99bp片段的重组体为反义pXJ41 cyclinD1真核表达载体 ,与理论分析结果相同。表明已成功重组和鉴定了正反义pXJ41 cyclinD1真核表达载体。
- 闫克夏刘秉慈徐茗尤宝荣康宁
- 关键词：真核表达载体基因重组技术反义技术肿瘤
- N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对人支气管上皮16HBE细胞周期进程的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对人支气管上皮16HBE细胞周期进程的影响及相关分子机制。方法 16HBE细胞经MNNG处理后,噻唑蓝(MTT)法检测MNNG对16HBE细胞增殖的影响,PI染色检测细胞凋亡,Hoechst 33342和PI双染检测细胞坏死,流式细胞术检测细胞周期分布,在周期变化明显的时点应用蛋白免疫印记检测周期相关蛋白含量变化。结果 MNNG能够剂量依赖性的抑制细胞增殖和诱导凋亡,亚致死剂量的MNNG使细胞引起明显的S期和G2/M期阻滞,同时细胞周期相关蛋白p-Cdk2(Thr160)和Cdc25A含量下降明显。结论 MNNG通过降低细胞p-Cdk2(Thr160)和Cdc25A的含量诱导16HBE细胞发生S期和G2/M期阻滞。
- 宋彦超赵鹏傅娟玲李振宁米岚姚碧云周宗灿
- 关键词：MNNG细胞周期CDC25A16HBE细胞
- 全反式视黄酸阻断苯并(a)芘致成纤维细胞周期改变的通路被引量：2
- 2005年
- 目的观察全反式视黄酸(ATRA)逆转苯并(a)芘诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期紊乱过程中细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶K4(CDK4)、转录因子E2F1和E2F4的作用。方法用0.1μmol/LATRA预处理细胞后,再用2μmol/L苯并(a)芘作用细胞,用Westernblotting方法测定其蛋白表达水平;建立稳定转染了反义cyclinD1质粒和反义CDK4质粒的细胞系,应用反义技术证明上下游关系;用流式细胞技术测定细胞周期。结果2μmol/L苯并(a)芘作用于HELF24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显增高,CDK4和E2F4蛋白表达水平无明显变化;用0.1μmol/LATRA预处理24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显下降;与相同作用的对照组相比,苯并(a)芘刺激反义cyclinD1或反义CDK4细胞后E2F1表达增加的幅度明显降低;与相同作用的对照组相比ATRA预处理的反义cyclinD1或反义CDK4细胞中,苯并(a)芘诱导的E2F1过表达水平降低的幅度明显降低;流式细胞术测定结果显示,苯并(a)芘诱导细胞从G1期进入S期,ATRA通过聚积G1期细胞而阻滞苯并(a)芘诱导的细胞周期进程。结论ATRA通过cyclinD1/E2F1途径阻断苯并(a)芘诱导的HELF的细胞周期改变。
- 贾效伟刘秉慈史香林高艾尤宝荣叶萌沈福海杜宏举
- 关键词：全反式视黄酸苯并(A)芘转录因子细胞周期细胞周期素依赖性激酶苯并(A)芘全反式视黄酸转录因子E2F-1阻断BLOTTING
- B(a)P对人胚肺成纤维细胞P53、P21蛋白影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究苯并(a)芘[B(a)P]对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)中P53、P21蛋白量的影响及芳烃受体(AhR)途径的作用。方法在有/无芳烃受体拮抗剂α-萘黄酮预孵下,分别在-/+体外代谢活化系统(S9)的条件下,以B(a)P染毒HELF细胞,用蛋白印迹(Westernblot)方法检测细胞P53、P21蛋白量的改变。结果10,20,50μmol/LB(a)P在-/+S9时染毒2h,以及在-S9时染毒24h引起细胞P53、P21蛋白量升高。B(a)P在-/+S9染毒2h时所引起的P53蛋白量升高可分别被2.5和5.0μmol/Lα-萘黄酮(α-NF)预先孵育逆转,所引起的P21蛋白量的升高可分别被10.0μ和2.5～10.0μmol/Lα-NF预孵逆转。B(a)P在-S9染毒24h时所引起的P53蛋白量升高可被2.5和5.0μmol/Lα-NF预孵逆转,所引起的P21蛋白量升高可被2.5和5.0μmol/Lα-NF预孵逆转。结论P53、P21蛋白在HELF细胞应对B(a)P引起DNA损伤的反应机制中起关键性作用,芳烃受体途径在其中存在一定作用。
- 徐永俊白雪涛张宏伟
- 关键词：苯并(A)芘P53P21
- 苯并(a)芘对细胞周期、细胞增殖的影响及相关信号传导途径的作用被引量：4
- 2007年
- 以苯并(a)芘及其代谢物为模式化学物,围绕着DNA损伤修复、细胞信号传导途径、细胞周期检测点调控等方面,从化学致癌物对细胞周期的影响角度来阐明化学致癌物的致癌机制已成为当前环境毒理学的热点问题与研究前沿。本文就苯并(a)芘对细胞周期分布与细胞周期调节因子的影响、以及相关信号传导途径在苯并(a)芘对细胞周期与细胞增殖影响中的作用等方面,对苯并(a)芘对细胞周期的影响进行了综述。
- 徐永俊白雪涛
- 关键词：苯并(A)芘细胞周期信号传导途径
