国家自然科学基金(81260266)
- 作品数：11 被引量：30H指数：4
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- IL-31单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 目的:制备抗人IL-31单克隆抗体,建立ELISA检测体系。方法:采用合成免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗IL-31单克隆抗体,用HRP标记单克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体的亚类、滴度和特异性;采用ELISA技术制备IL-31检测试剂盒,并对自制试剂盒进行评价。结果:获得了两株稳定产生抗IL-31单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体亚类均为IgG3,抗体特异性好,杂交瘤细胞诱生的腹水抗体效价达106。试剂盒检测灵敏度为5.726 pg/ml,检测IL-1、IL-6、TNF-α、RF的P/N值均小于2.1,为阴性,靶抗原IL-31的检测结果为阳性(P/N值=13.76);自制试剂盒检测特应性皮炎血清IL-31水平为(532.83±90.39)pg/ml,对照组血清IL-31水平为(103.31±19.17)pg/ml,皮炎组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.001)。结论:成功制备了抗IL-31单克隆抗体,建立的ELISA试剂盒可用于临床检测IL-31。
- 董革辉魏培黄俊琼杜青波岳欢杜文胜谭艳芳孙万邦
- 关键词：IL-31单克隆抗体
- IL-31对小鼠肺泡上皮细胞趋化因子表达的影响被引量：2
- 2015年
- 目的体外分离培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,探讨IL-31对肺泡上皮细胞表达趋化因子的影响。方法酶消化法分离及免疫吸附法纯化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,透射电子显微镜观察细胞形态及结构,免疫荧光技术检测细胞SP-A的表达。用100 ng/ml IL-31作用小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞24 h后提取细胞RNA,PCR芯片检测小鼠肺泡上皮细胞趋化因子及其受体的表达。结果透射电镜观察发现细胞内存在板层小体,呈同心圆状或平行排列;激光共聚焦显微镜观察可见细胞内有黄绿色荧光;小鼠肺泡上皮细胞经100 ng/ml IL-31作用24 h后,基因芯片检测细胞中表达上调的趋化因子和细胞因子基因11个、受体基因8个。结论成功分离培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,IL-31可诱导肺泡上皮细胞表达趋化因子,表明IL-31可通过诱导趋化因子参与气道炎症反应。
- 岳欢高婧江涛高雅倩黄俊琼
- 关键词：肺泡上皮细胞趋化因子基因芯片
- IL-31在哮喘小鼠中的动态表达及对肺泡上皮细胞表达CCL11和CCL22的影响被引量：8
- 2019年
- 目的通过观察IL-31在OVA诱导小鼠哮喘模型中的动态表达及IL-31对肺泡上皮细胞表达趋化因子CCL11和CCL22的影响,探讨IL-31在哮喘气道炎症中的作用。方法常规OVA法建立小鼠哮喘模型,于末次激发后取肺组织HE染色及AB-PAS染色,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测血浆中IgE、IL-4、IFN-γ、IL-31水平,荧光定量PCR检测肺组织IL-31R mRNA表达水平,同时体外培养小鼠肺泡上皮细胞,用IL-31处理24 h后检测CCL11和CCL22 mRNA的表达水平。结果成功构建哮喘小鼠模型,哮喘小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比和血浆中IgE水平明显增多。哮喘小鼠肺组织病理切片见中性粒细胞、EOS浸润。哮喘小鼠血浆中Th2类细胞因子IL-4水平明显高于对照组,Th1类细胞因子IFN-γ明显低于对照组。哮喘小鼠血浆IL-31水平和肺组织IL-31R mRNA表达水平明显增高,第2周至第8周虽略有降低但仍明显高于对照组。IL-31作用小鼠肺泡上皮细胞24h后,趋化因子CCL11、CCL22mRNA表达增高。结论IL-31通过刺激趋化因子表达募集炎性细胞,促进气道炎症的发生发展。
- 刘福慧高婧江涛岳欢黄俊琼
- 关键词：气道炎症趋化因子
- IL-31对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549表达CCL2的影响被引量：4
- 2015年
- 目的通过体外实验研究IL-31对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549表达趋化因子C-C趋化因子配体2(CCL2)的影响,探讨IL-31在支气管哮喘气道炎症中的作用。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,用不同浓度(10、50、100 ng/m L)IL-31作用A549细胞、相同浓度(10 ng/m L)IL-31作用A549细胞不同时间(12、24、36 h),收集细胞,提取细胞总RNA,荧光定量PCR法分析趋化因子CCL2 m RNA的表达情况。结果不同浓度IL-31作用于A549细胞后,趋化因子CCL2的表达较正常未处理组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);10 ng/m L IL-31作用A549细胞后,不同时间段CCL2的表达均增高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-31作用于肺泡Ⅱ型上皮细胞A549后,趋化因子CCL2的表达明显增高,表明IL-31可能诱导肺组织细胞分泌趋化因子参与哮喘气道炎症过程。
- 高婧杜青波谭艳芳岳欢黄俊琼
- 关键词：趋化因子CCL2白细胞介素类气管炎
- IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型的建立被引量：2
- 2015年
- 目的:建立IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型,为IL-31RA基因相关研究提供动物模型。方法:IL-31RA基因敲除小鼠严格按照SPF级要求的动物饲养标准进行饲养繁殖,采用聚合酶链式反应(PCR)法鉴定子代小鼠的基因型,RT-PCR法鉴定小鼠IL-31RA mRNA的表达,Western blot鉴定IL-31RA蛋白的表达,HE染色观察小鼠重要脏器的形态学变化。结果:PCR法成功检测出子代小鼠的3种基因型,纯合子基因敲除小鼠未检测出IL-31RA mRNA和IL-31RA蛋白的表达,IL-31RA基因敲除小鼠的重要脏器的形态学特征与野生型小鼠比较无明显变化;基因敲除小鼠可成功饲养繁殖,亦可获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结论:成功构建了IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型。
- 江涛高婧岳欢高雅倩黄俊琼
- 关键词：基因敲除反转录PCRWESTERNBLOT
- IL-31RA基因敲除对哮喘小鼠气道炎症的影响被引量：3
- 2018年
- 目的本研究通过构建IL-31RA基因敲除小鼠模型及哮喘模型,观察该基因敲除对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法采用OVA建立小鼠哮喘模型,于末次激发后取肺组织HE染色及甲苯胺蓝染色观察肺部炎症细胞浸润和肥大细胞增生情况,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测血浆中总Ig E、IFN-γ、IL-4水平。结果成功构建IL-31RA基因敲除小鼠模型及哮喘模型,哮喘小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比和血浆中Ig E水平明显增多,基因敲除哮喘小鼠较野生型哮喘小鼠增多更明显。哮喘小鼠肺组织病理切片EOS、肥大细胞浸润,基因敲除小鼠较野生型小鼠EOS、肥大细胞浸润增多。哮喘小鼠血浆中Th2类细胞因子IL-4水平明显高于正常对照组,Th1类细胞因子IFN-γ水平明显低于对照组,且基因敲除哮喘小鼠IL-4水平较野生型哮喘小鼠增高。结论 IL-31受体A信号可抑制哮喘小鼠气道的炎症反应。
- 江涛高婧岳欢高雅倩黄俊琼
- 关键词：基因敲除哮喘气道炎症
- 基因芯片对哮喘小鼠趋化因子及其受体差异表达的筛选与分析被引量：4
- 2014年
- 目的用SABioscience基因芯片检测小鼠哮喘模型中84个趋化因子及其受体基因,并初步筛选分析其与支气管哮喘的相关性。方法用OVA构建哮喘小鼠模型,于末次激发后取右肺组织进行HE染色,并提取左肺组织总RNA,用SABioscience芯片检测84个趋化因子及其受体基因的表达水平。结果成功构建哮喘小鼠模型,哮喘组与对照组相比,表达上调的趋化因子21个,趋化因子受体13个;表达下调的趋化因子4个。结论 SABioscience芯片可有效地筛选出哮喘小鼠差异表达的趋化因子及其受体,对进一步深入探讨哮喘的发病机制及预防具有重要意义。
- 岳欢李燕高婧江涛黄俊琼
- 关键词：支气管哮喘趋化因子受体基因芯片
- 大鼠血管内皮细胞siRNA转染条件的优化
- 2015年
- 目的:旨在优化siRNA转染大鼠血管内皮细胞的转染条件.方法:将0.75μL和1.5μL的脂质体LipofectamineTM3000分别与20、40、60、80nmol带荧光标记的FAMsiRNA组合,转染6、12、18、24h后,用荧光显微镜计数阳性细胞率、MTT法检测各浓度条件下内皮细胞的存活率,筛选最优转染条件.结果:(1)转染12h后,用荧光显微镜检测20、40、60、80nmol各组,均可观察到绿色荧光(2)siRNA浓度为60nmol/L,脂质体为1.5μL的组合转染效率最高,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高不明显.(3)转染时间超过24h,各组细胞荧光减弱,细胞死亡率显著增加.结论:结果表明,以1.5μL LipofectamineTM3000与60nmol/L的siRNA浓度组成转染混合物转染12h可以实现对大鼠血管内皮细胞高效转染并保持较高的细胞活性.
- 郭昭涵李银河庞振凌彭明星黄冉涛王燕华
- 关键词：血管内皮细胞脂质体SIRNA转染
- 白细胞介素31与过敏性哮喘
- 2015年
- 目的阐述白细胞介素31(IL-31)在过敏性哮喘气道炎症中的作用。方法通过查阅文献,对IL-31在过敏性哮喘中的作用进行总结分析。结果过敏性哮喘患者血清中IL-31、外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-31mRNA以及Th2型免疫细胞的表达水平较正常人都有所增加,并且具有统计学意义。结论 IL-31可以促进Th2型炎症反应,在过敏性哮喘发生、发展过程中起着重要的调节作用。
- 郑连营黄俊琼
- 关键词：过敏性哮喘
- 类风湿性关节炎患者外周血IL-31水平及其与抗环瓜氨酸肽抗体的相关性被引量：3
- 2019年
- 目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血中白细胞介素31 (IL-31)、抗环瓜氨酸肽抗体(ACPA)水平,探讨IL-31与ACPA的相关性。方法选取2017年1月至2018年1月在遵义医科大学附属医院确诊的57例RA患者作为RA组,同时将研究期间于我院体检的健康体检者28例作为对照组,采集两组受检者的外周静脉血,分离血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血IL-31水平,电化学发光法检测ACPA水平,并应用采用Pearson相关分析法分析IL-31与ACPA的相关性。结果 RA组患者外周血IL-31和ACPA水平分别为(1 367.28±2 129.15) pg/mL和(323.00±379.21) U/mL,均明显高于对照组的(226.66±432.95) pg/mL和(11.28±5.16) U/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);IL-31与ACPA呈显著正相关(r=0.641,P<0.05)。结论 RA患者外周血IL-31水平增高,且与ACPA呈正相关,表明IL-31可能参与RA的发生发展,并起着重要作用。
- 钱媛何应中仇艳石渝黄俊琼
- 关键词：类风湿性关节炎抗环瓜氨酸肽抗体炎症因子
