广东省科技计划工业攻关项目(C31206)
- 作品数：4 被引量：30H指数：3
- 相关作者：吴平生周忠江刘伊丽叶海燕赖文岩更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院广东省人民医院中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 超声介导微泡空化靶向传输血管内皮生长因子基因促血管新生的实验研究
- 目的:探讨超声介导微泡空化靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促梗死心肌血管新生的基因转移新途径。方法:从正常引产胎儿肺组织中提取总RNA,一步法进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出血管内皮生长因子基因VEG...
- 周忠江刘伊丽吴平生李小卫查道刚赖文岩陈小林冯金华迟东升
- 文献传递
- 超声介导载基因微泡靶向传输血管内皮生长因子促心肌血管新生被引量：9
- 2004年
- 目的 探讨超声介导载血管内皮生长因子 16 5 (VEGF165)基因靶向微泡促梗死心肌血管新生的可行性。方法 构建真核表达质粒 pcDNA3 1-/VEGFcDNA165,将其包载于脂质泡中 ,超声辐射下向鼠心肌传输。采用RT PCR、WesternBlot检测mRNA、蛋白表达 ,观察微血管密度评价血管新生效果。结果 (1)成功构建VEGF165基因 ;(2 )脂质体微泡可包载VEGF165基因 ;(3)超声介导辐射下向心肌靶向传输VEGF165基因 ,实验组基因表达及血管密度高于空白对照组 ,但低于VEGF165基因心肌直接注射。结论 具有心肌显影功能的脂质体载VEGF165基因微泡在超声辐射下可向大鼠梗死心肌靶向传输 ,并产生促血管新生效应。
- 周忠江叶海燕张新宇查道刚吴平生刘伊丽
- 关键词：基因超声介导微泡血管内皮生长因子心肌VEGI
- 突变低氧诱导因子1_α基因真核表达载体的构建和表达被引量：8
- 2005年
- 目的构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α的两种突变体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala,并检测它们在人肺微血管内皮细胞(HMVECs)中的表达。方法用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α的HIF-1α第564位脯氨酸(Pro)密码子CCC突变为丙氨酸(Ala)密码子GCC,构建成单个突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala。在第一次突变的基础上,仍然用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala的HIF-1α-564Ala第803位天冬酰胺(Asn)密码子ATT突变为丙氨酸(Ala)密码子GCT,构建成双个点突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala。将3种HIF-1α表达载体用脂质体法分别转入HMVECs,以RT-PCR、免疫荧光法和Westernblotting法分别对转染细胞进行表达分析。结果测序证实,定点突变成功,构建成重组真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala;3种载体均能表达相应的蛋白和mRNA,但转化突变HIF-1α表达载体的细胞蛋白量比空白细胞和转化无突变HIF-1α载体的细胞显著增加。结论成功构建能够在HMVECs中表达的单个和双个点突变的HIF-1α基因的真核表达载体。
- 傅锐斌吴平生宋云峰邱建戴铁英李建华修建成
- 关键词：低氧诱导因子-1Α定点突变真核表达载体血管新生
- 超声介导微泡靶向传输基因促血管新生的实验研究被引量：12
- 2005年
- 目的探讨超声介导微泡靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促心肌血管新生即心肌“分子搭桥”的新途径。方法利用分子生物学方法构建人血管内皮生长因子真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165;制备载VEGF165基因脂质体微泡,分析其理化性质和功能,在超声场利用超声辐射向大鼠梗死心肌靶向传输VEGF165;2周后取材,逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)评价大鼠心肌中人源VEGF165mRNA表达,蛋白印迹杂交(WesternBlot)观察大鼠心肌VEGF165的蛋白表达,CD34免疫组化微血管密度(MVD)计数半定量法评价超声介导微泡靶向传输VEGF165促梗死心肌血管新生效果。结果①成功构建、克隆血管内皮生长基因VEGF165重组真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165,测序分析、酶切鉴定准确无误;②研制的脂质体微泡超微结构显示可粘附或包载DNA,粒度分析显示平均粒径<5μm;③在超声介导下该脂质体载基因微泡可靶向传输VEGF165至大鼠梗死心肌,超声介导靶向传输组VEGF165的mRNA、蛋白表达及促血管新生作用(MVD表示)仅次于VEGF165基因心肌注射组。结论超声介导微泡可向大鼠心肌靶向传输VEGF165基因并产生促血管新生效应。
- 周忠江侯玉清赖文岩李利吴平生刘伊丽
- 关键词：促血管新生超声介导微泡VEGF165基因心肌血管新生
- 一种新的人血管内皮生长因子基因的剪切体(英文)被引量：1
- 2012年
- 目的探索人胚胎肺组织中是否存在一种新的血管内皮生长因子（VEGF）基因可变剪切形式。方法对1例4月龄引产胎儿肺组织的总RNA进行逆转录聚合酶链反应、克隆并测定扩增片段的序列。结果用一对引物（引物5’端-21~7 bp, 3’端554~576 bp）可扩增出3条片段，一条为长度正常的VEGF165 （619 bp）全长序列，另一条为长度正常的VEGF12（1 487 bp）全长序列，第三条为新的VEGF mRNA异常剪切片段。测序检测显示，此扩增片段长度为639 bp，同样为VEGF165全长核苷酸序列，但在VEGF165的第3和第4外显子之间插入了长度为20 bp的碱基片段。序列分析显示此插入序列为滞留的第Ⅲ内含子终末序列，含内含子剪切信号。上述移码突变导致VEGF基因阅读框架发生改变，在第4外显子中游出现终止密码，故仅含VEGF165外显子1~3及4部分序列，在蛋白水平上可能编码含97个氨基酸的新肽链。结论在一引产胎儿的肺组织中发现了新的VEGF mRNA可变剪切形式，其生物学意义有待进一步研究。
- 周忠江叶海燕崔凯陈向辉刘伊丽
- 关键词：血管内皮生长因子逆转录聚合酶链反应
