国家自然科学基金(81071692)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张丹赵晶黄辰马瑾璐韩苏夏更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的 pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化。经测序等方法鉴定重组克隆。将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HepG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果。结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDK1。结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础。
- 赵晶韩苏夏马瑾璐黄辰张丹
- 关键词：SHRNACDK1基因沉默肝癌细胞
