河北省高等学校科学技术研究指导项目(Z2012158)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：孔祥增张雷陈炜赵春芳李航更多>>
- 相关机构：河北医科大学河北医科大学第一医院更多>>
- 发文基金：河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 大鼠应激耐受多系分化细胞的分离、扩增改良技术
- 2013年
- 目的探讨体外从大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中分离应激耐受多系分化细胞(Muse cells)及其扩增培养的技术方法。方法分离、扩增、鉴定BMSCs,应用长时间应激方法酶消化分离Muse细胞,悬浮扩增培养4d后Western blot鉴定特异性抗原。结果第3代生长良好的BMSCs中表达CD29、CD90而不表达CD45的占细胞总数的97.89%。长时间酶消化结合悬浮培养后,以酶消化8h组细胞表达CD105显著高于其余各组(P<0.05),符合Muse细胞特征。结论 Muse细胞可由BMSCs经消化分离扩增获得,可望为其进一步研究应用奠定基础。
- 陈炜张雷尹青孔祥增张亚楠王子鸣
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养酶消化
- 外源表达Nkx2.5诱导骨髓间充质干细胞向心肌分化被引量：2
- 2012年
- 目的探讨转染外源性Nkx2.5基因对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化的作用。方法全骨髓法分离大鼠BMSCs,经多次传代培养扩增纯化,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD45。脂质体法将pEGFP-N1-Nkx2.5质粒转染BMSCs,观察细胞形态变化;转染48h后,免疫细胞化学检测Nkx2.5的表达。转染4周后,Western blotting检测心肌肌钙蛋白(cTnT)的表达;免疫细胞化学检测cTnT、GATA4的表达,鉴定细胞分化。结果第3代生长良好的细胞中表达CD90而不表达CD45的占细胞总数的99%。转染48h后,实验组可见部分细胞表达绿色的Nkx2.5-pEGFP融合蛋白,免疫细胞化学结果表明,Nkx2.5蛋白只在实验组有表达(n=3)。转染4周后,Western blotting、免疫细胞化学结果表明,cTnT、GATA4表达在实验组显著高于pEGFP-N1空质粒转染组和空白对照组(n=3)。结论外源表达Nkx2.5基因能够增强BMSCs向心肌分化。
- 陈炜张雷孔祥增张金平赵昱李航李莉赵春芳
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞细胞分化流式细胞术
