国家自然科学基金(31071141)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 大肠杆菌转录后调控蛋白CsrA的C末端具有抑制十字花科黑腐病菌胞外蛋白酶活性的功能被引量：3
- 2012年
- CsrA(在有些细菌例如十字花科黒腐病菌中也称为RsmA,统称CsrA/RsmA)是一类在细菌中广泛分布而且氨基酸序列非常保守的RNA结合蛋白。研究表明,CsrA/RsmA作为转录后全局调控因子参与了包括细胞碳代谢、次生代谢、运动性、生物被膜形成以及动植物病原菌的致病过程等许多细胞过程的调控。CsrA/RsmA在不同的细菌中的生物学功能各有异同。在大肠杆菌中,CsrA的主要功能是控制细胞的碳代谢、运动性和生物被膜形成;而在十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pathovar campestris,Xcc)中,CsrA的同源蛋白RsmA的主要功能除了控制碳代谢、运动性和生物被膜形成外,还控制致病性和胞外酶的产生。大肠杆菌的CsrA(CsrAE.coli)是否具有XccRsmA(RsmAXcc)的功能?为了回答这个问题,我们用大肠杆菌的csrA基因(csrAE.coli)互补Xcc的rsmA基因(rsmAXcc)的缺失突变体DM2506。结果显示,csrAE.coli能够互补DM2506的所有表型,说明CsrAE.coli具有RsmAXcc的全部功能。更重要的是,我们发现,无论是rsmAXcc突变体还是野生型菌株,导入表达CsrAE.coli的质粒后均导致其致胞外蛋白酶活性的严重下降,证明CsrAE.coli具有抑制Xcc胞外蛋白酶活性的作用。进一步的实验证实,CsrAE.coli的C末端第53～61位氨基酸残基具有抑制Xcc胞外蛋白酶活性的功能。
- 黄明慧陈承晓覃振萍唐纪良唐东阶晁耐霞
- 关键词：大肠杆菌胞外蛋白酶
- 大肠杆菌全局调控蛋白CsrA中抑制十字花科黑腐病菌胞外蛋白酶活性所必需的氨基酸残基的鉴定
- 2013年
- CsrA／RsmA蛋白家族是细菌中一类重要的转录后全局调控因子，它们调控细菌的碳代谢、次生代谢、运动、生物被膜形成以及致病等过程。CsrA／RsmA蛋白家族通常由60～72个氨基酸基组成，其中第1至第52位氨基酸高度保守，而第53位以后的氨基酸则高度可变。目前人们认为其氨基酸高度保守性是不同种属细菌CsrA／RsmA功能和作用机理相似的基础，但是其高度可变区与不同种属CsrA／RsmA蛋白功能差异的关系尚不清楚。我们之前的研究显示，大肠杆菌（Escherichiacoli）的CsrA（CsrAE删）蛋白的高度可变区（第53至第61位氨基酸残基）具有强烈的抑制十字花科黑腐病菌（XanthomonztscampeStr／spathovarcampestris，简称‰c）胞外蛋白酶活性的能力。本研究中，我们采用丙氨酸置换方法，确定了CsrA。蒯可变区中抑制xcc胞外蛋白酶活性必需的氨基酸残基。结果显示，CsrAE枷蛋白的第54位赖氨酸（K54）、第60位丝氨酸（S60）和第61位酪氨酸（Y61）置换成丙氨酸后，csrA‰。蛋白丧失了抑制Xcc胞外蛋白酶活性的能力；而其它位点的丙氨酸置换不影响其抑制Xcc胞外蛋白酶活性的能力。这个结果证明K54、S60和Y61是CsrAE.coli抑制Xcc胞外蛋白酶活性所必需的，为揭示大肠杆菌的CsrA。融蛋白抑制Xcc胞外蛋白酶活性的分子机理奠定基础。
- 唐东阶钟婉莹秦春铃唐纪良晁耐霞
- 关键词：胞外蛋白酶大肠杆菌
- 3种接种方法对十字花科黑腐病菌Xcc8004菌株在拟南芥Col-0上致病力的影响被引量：1
- 2011年
- 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pathovar campestris,Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原菌,也是研究寄主与病原微生物相互作用分子机理的模式菌之一。Xcc可以感染白菜、萝卜和甘蓝等十字花科农作物,也可以感染重要的模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)。由于拟南芥的全基因组测序已经完成,因此,拟南芥是研究寄主植物对Xcc浸染的防卫反应的分子机理的最理想的寄主材料。但是,到现在为止,一套完善的在拟南芥上进行Xcc致病检测的实验系统还没有建立。为此,本研究比较了"叶片压渗法"、"剪叶法"和"叶片中脉穿刺法"这3种常用的病原细菌接种方法对Xcc的实验室菌株8004(以下简称Xcc8004)在哥伦比亚生态型拟南芥(A.thanliana ecoype Colombia0,Col-0)上的致病力的影响。结果发现,在拟南芥Col-0叶片上用"叶片压渗法"接种Xcc8004可以引起明显致病症状,而用"剪叶法"和"叶片中脉穿刺法"接种均不能引起病症。这一结果说明,不同的接种方法的对Xcc在拟南芥上的致病力有很大的影响。因此,要在拟南芥Col-0上进行Xcc8004的致病力检测,本研究建议采用"叶片压渗法"而不用"剪叶法"和"叶片中脉穿刺法"。此外,本研究还建立了一套简易的拟南芥试验用苗的栽培方法。
- 梅雄李振江张慧唐纪良唐东阶
- 关键词：拟南芥
