国家自然科学基金(30100117)
- 作品数：9 被引量：67H指数：6
- 相关作者：李向东王洪刚竺晓平刘金亮郭兴启更多>>
- 相关机构：山东农业大学中国农业大学中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 细胞基因与转基因对病毒进化的影响
- 2003年
- 本文介绍了突变、重组和重排等病毒进化的主要推动力 ,分析了细胞基因。
- 石鹏君刘金亮竺晓平田延平李向东
- 关键词：细胞基因转基因植物病毒重排PDR抗病性
- 植物病毒检测技术被引量：9
- 2006年
- 主要介绍了酶联免疫吸附测定(ELISA)、快速免疫滤纸测定法(RIPA)、胶体金标记、免疫毛细区带电泳(I-CZE)等血清学方法和PCR、分子烽火、实时RT-PCR、核酸杂交技术和PCR-微量板杂交技术等分子生物学方法的原理及特点,并重点介绍了近年发展起来的I-CZE、分子烽火和实时RT-PCR等病毒检测技术。
- 兰玉菲郗丽君张德满李春霞崔海涛李向东
- 关键词：植物病毒
- 潍坊萝卜红心病病原鉴定被引量：10
- 2005年
- 本文用生物学、血清学和分子生物学证据证明,引起潍坊萝卜红心病的病原为芜菁花叶病毒 (Turnipmosaicvirus,TuMV)。该病毒可系统侵染曼陀罗、油菜、咸阳黄瓜、丝瓜、大白菜和普通烟,局部侵染苋色藜和假酸浆,不侵染豌豆。病毒粒体弯曲线状,长约 700nm,可由蚜虫传播,在红心病组织内形成风轮状和片层凝集状内含体,它在SDS 琼脂糖凝胶免疫双扩散试验中可与TuMV的抗血清形成明显的沉淀线。该病毒的CP基因共 867个核苷酸,编码 288个氨基酸,分子量为32 98kD。该序列与国内外 20个TuMV分离物的CP氨基酸序列比较结果表明,这些分离物可以分为 5组,其中引起萝卜红心病的病毒与日本的H1J、KYD81J、意大利的ITA7同属一组。
- 李向东刘金亮李文法范在丰李怀方王洪刚
- 关键词：萝卜病毒病芜菁花叶病毒
- 甘蔗花叶病毒CP基因的高效表达和抗血清制备被引量：7
- 2003年
- 将甘蔗花叶病毒的CP基因克隆到表达载体pET22b(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,表达蛋白约占总蛋白的15%。用此蛋白制备了效价高专化性强的抗体。此方法可以解决制备马铃薯Y病毒属病毒的血清时遇到的病毒提纯产量低和寄主蛋白影响等问题。
- 李向东范在丰石鹏君李怀方王洪刚
- 关键词：甘蔗花叶病毒CP基因抗血清
- 表达马铃薯Y病毒外壳蛋白基因的转基因烟草抗病机制被引量：18
- 2003年
- 根据已报道的马铃薯Y病毒坏死株系 (PVYN)核苷酸序列 ,克隆了PVYN外壳蛋白 (CP)基因 ,通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)LBA4 4 0 4介导的方法 ,转化烟草NC89,获得了 38株PCR呈阳性的转基因植株 .攻毒试验发现 ,转基因植株对PVYN的抗性水平存在着差异 ,其中有 4株表现为高度抗病性 .Southernblot表明 ,PVYN CP基因已经整合到烟草染色体中 ,转基因的拷贝数与植株的抗病性成正相关 .Northernblot表明 ,PVYN CP基因在RNA水平上得到了表达 ,而且PVYNCPRNA在细胞中的积累量与转基因植株的抗病性呈明显的负相关 .Westernblot表明 ,高度抗病植株未检测到转基因CP蛋白质 ,而抗病和感病植株都检测到了PVYN CP蛋白 ,且不同抗性的转基因植物中转基因蛋白质的积累有一定的差异 .实验结果表明 ,表达PVYN CP基因的转基因烟草其抗病机制类似于转录后的基因沉默 ,即抗病性可能是RNA介导的 .图 7表 1参
- 郭兴启李菡张杰道竺晓平王洪刚
- 关键词：马铃薯Y病毒外壳蛋白基因转基因烟草抗病机制
- PVY/PVX协生作用对病毒浓度及寄主细胞超微结构的影响被引量：14
- 2003年
- 以烟草品种三生烟 (N .tabacumcv .Samsun)为测试寄主 ,采用酶联免疫检测实验 (TAS ELISA)和电镜观察的方法 ,在温室条件下研究了马铃薯Y病毒 (PVY)和马铃薯X病毒 (PVX)复合侵染所引起的寄主症状和病毒浓度变化的特点、不同条件下复合侵染时病毒浓度的变化规律以及复合侵染对寄主细胞超微结构的影响。结果表明 ,PVY/PVX在烟草植株内发生了协生作用 ,PVY是协生病毒 ,PVX是被协生病毒。与单独侵染相比 ,PVY和PVX的复合侵染使烟草植株症状明显加重。PVY在复合侵染植株中的浓度与在单独侵染植株中相比 ,没有明显的变化 ,而PVX在复合侵染植株中的浓度明显高于在单独侵染植株中的浓度。这种现象不受PVY株系、处理季节和接种次序的影响。但是 ,不同PVY株系、不同处理季节或不同接种次序对PVY/PVX协生作用中PVX浓度的影响程度存在着一定的差异。电镜观察表明 ,与不接种病毒或单独侵染的植株相比 ,受复合侵染的烟草叶片细胞超微结构发生了明显的病理学变化。细胞肿胀 ,叶绿体、线粒体等细胞器受到严重损伤 ,细胞质内有风轮状、薄片状的内含体 ,由于在细胞质中常常有大量纤维状的PVX病毒粒子聚集体存在 ,这意味着PVX浓度的增加可能是在复合侵染的细胞中病毒大量繁殖的结果。
- 郭兴启冯炘李向东郭恒俊李照会
- 关键词：Y病毒协生作用马铃薯X病毒
- 潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达被引量：9
- 2006年
- 从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus, TuMV）分离物（TuMV-Ra），通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白（CP）基因，对其进行了序列测定，并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明，TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89．9％～99．O％，CP氨基酸序列同源性为94．8％～99．7％；其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高，核苷酸序列的同源性为98．7％和99．0％，氨基酸序列同源性为99．0％和99．7％。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CHINA-WF CP基因核苷酸同源性为93．66％，氨基酸同源性为96．53％，说明病毒发生了比较大的变异，而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra CP基因克隆到原核表达载体pET-22b（＋），在大肠杆菌BL21（DE3）中表达出分子量为38kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-RaCP在大肠杆菌中得到了正确表达。
- 刘金亮于晓庆田延平都杰竺晓平李向东严敦余
- 关键词：芜菁花叶病毒萝卜CP基因分子特性
- 萝卜红心病的发生与防治被引量：2
- 2005年
- 萝卜Raphanus sativus 是潍坊有名的土特产和潍坊部分地区重点发展的作物.近年来潍坊萝卜上发生的红心病严重地影响了潍坊萝卜的产量和质量,制约了潍坊萝卜的生产.生物学、血清学和分子生物学等方面的研究表明,引起潍坊萝卜红心病的是芜菁花叶病毒(TuMV)[1],作者对其发病规律和防治方法作了进一步研究.
- 李向东刘金亮李洪奎时呈奎王洪刚
- 关键词：萝卜红心病症状
- 本生烟组织培养及遗传转化体系的建立被引量：3
- 2006年
- 本文研究了通过农杆菌侵染获得本生烟（Nicotiana benthamiana）转基因植株的方法。将本生烟中上部叶片消毒后切成5mm×5mm左右的小块作为外植体，在含有6-BA（3mg／L）和NAA（0．2mg／L）的MS培养基中培养2—3d，用含有表达载体的农杆菌侵染后共培养3～4d，转入含有6-BA（3mg／L）、NAA（0．2mg／L）和卡那霉素（100rag／L）的MS培养基中培养2～3周。将外植体边缘产生的愈伤组织和芽点转移到只含有卡那霉素（100mg／L）的MS培养基中继续培养，2周后分化出大量不定芽。继续培养2周，当芽长1-3cm时，将芽转移到含IBA（0．1mg／L）的MS培养基中分化生根，得到苒生植株。当再生植株高8～10cm、根长4～5cm以上时，移栽到经过灭菌的营养土中。通过实时荧光PCR扩增，从获得的植株中检测35S启动子和NOS终止子外源基因片段，判定所得的植株的确为转基因植株。最后对本生烟组织培养中应该注意的问题进行了讨论。
- 崔海涛李春霞王红艳陈红运竺晓平时呈奎李向东
- 关键词：MS培养基实时荧光PCR
