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嗜热菌丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的原核表达、纯化及活性分析: 嗜热菌，是一类能适应高温的微生物。其生长速度较快，代谢较强，在高温下有着显著的生存优势，在环境保护、能源利用等方面具有广泛的应用。嗜热酶，是从嗜热菌中分离得到，能够适应高温反应条件的酶。酶偶联法是体外测定酶活性的常用方法...; 王文珍; 关键词：嗜热菌丙酮酸激酶乳酸脱氢酶原核表达酶活性测定; 文献传递

大肠杆菌醛醇脱氢酶的纯化、分析及其在乙酰辅酶A测定中的应用: 2022年; 为了连续测定乙酰辅酶A合成酶(acetyl-CoA synthetase,ACS)催化的乙酰辅酶A(acetyl coenzyme A,Ac-CoA)合成,探讨以醛醇脱氢酶(aldehyde/alcohol dehydrogenase,AdhE)为偶联酶检测ACS活性的可行性.以大肠杆菌(Escherichia coli K12)基因组为模板扩增、克隆AdhE基因,通过原核表达、纯化获得AdhE,对其进行了酶学动力学分析,并进一步以AdhE为偶联酶对ACS活性进行了测定.结果发现:AdhE的k_(cat)为13.8 min-1,Ac-CoA和NADH的K_(m)分别为52.8和73.4μmol·L^(-1);ACS的k_(cat)为10.5 min^(-1),乙酸和ATP的K_(m)分别为1.31和0.15 mmol·L^(-1).表明基于AdhE的Ac-CoA检测体系切实可用,为Ac-CoA合成反应的连续测定奠定了良好的基础.; 孙梅好刘杰袁熹蒲首丞巩菊芳; 关键词：原核表达

原核生物硒蛋白的生物合成被引量：1: 2013年; 硒是包括哺乳动物在内许多生物的必需微量元素,与人类健康密切相关。硒分布的不平衡导致所在地食物中硒含量差异较大,且高硒地区的人易发生硒中毒,而低硒地区的人易硒缺乏。胞内硒酸盐经还原及硒磷酸合成酶的活化,在硒代半胱氨酸合酶(SelA)催化下利用Ser-tRNAUGAsec合成硒代半胱氨酸(selenocysteine,Sec),Sec经tRNAUGAsec特异性的类EF-TU延伸因子SelB整合入蛋白质形成硒蛋白。文中主要概述了原核生物硒酸盐的还原代谢和硒代半胱氨酸的插入机制,并提出了利用硒蛋白的合成机制作为检测硒酸盐含量的思路。; 沈林星邱洋松孙婧邬丹妮孙爱张冰倩马建辉孙梅好; 关键词：硒硒蛋白硒代半胱氨酸

基于硒蛋白生物合成机制的硒生物检测器: 2013年; 硒是许多生物的必需微量元素,与人类健康关系密切。硒在自然界中分布的不平衡导致不同地区的硒含量差异较大,易引起硒缺乏或者中毒。原核生物的硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Sec)及硒蛋白的生物合成途径已较为清楚,此为构建硒酸盐生物检测器,进而补充目前常用硒含量测定方法提供了可能。该研究利用原核载体构建硒代半胱氨酸插入所需茎环结构(Selenocysteine insertion se-quence,SECIS)及其突变载体,通过氨苄青霉素筛选获得高效、高准确率的SECIS,并以此构建GFP超表达载体pSEGFP。通过pSEGFP和pSelABC共转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达,测定分析发现胞质蛋白的荧光强度与培养基硒酸盐浓度在一定范围内具有较好的线性关系。此结果表明,试验已初步构建了大肠杆菌硒生物检测器,为利用此方法进一步分析测定环境及生物样品中的硒含量奠定了基础。; 邱洋松孙婧孙爱邬丹妮张冰倩马建辉徐丽珊孙梅好; 关键词：硒蛋白硒代半胱氨酸茎环结构

硫酸盐活化复合体的分类及其功能被引量：4: 2011年; 硫酸盐进入细胞内活化的第一步是ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5’-磷酰硫酸(adenosine 5’-phosphosulfate,APS)和焦磷酸,此反应非常不易进行。研究发现某些ATPS可与硫酸盐同化代谢相关酶组成硫酸盐活化复合体(sulfate activating complex,SAC)而促进硫的同化。本文介绍了目前已发现的三类SAC:GTPase型SAC(GTPase type SAC)、APSK型SAC(APSK type SAC)和APSR型SAC(APSR type SAC),并对其促进APS合成的方式及目前的研究热点进行了讨论。; 王艳兴杨玲孙梅好; 关键词：硫酸盐 ATP硫酸化酶

球形红细菌无机焦磷酸酶的寡聚化及酶活性分析: 2016年; 球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides)是一种重要的微生物资源,其无机焦磷酸酶(PPase)属于Ⅱ型可溶性焦磷酸酶.通过原核表达和纯化,得到了正常型Rs PPase和突变型Rs PPasemono,进一步进行了寡聚化和酶活性分析.结果表明:突变型Rs PPasemono为单聚体,在钴离子存在条件下会导致谷胱甘肽S-转移酶(glutathione sulfotransferase,GST)标签进行蛋白酶切,且去标签后的Rs PPasemono催化效率较高(Kcat/Km(PPi)=12.64L·μmol-1·min-1),相对于Rs PPase-GST提高了12倍;在无钴离子存在条件下仍能进行蛋白酶切,且保持催化效率(Kcat/Km(PPi)=0.34 L·μmol-1·min-1).; 陈果果孙梅好; 关键词：球形红细菌无机焦磷酸酶钴离子

2株柴油降解菌的分离筛选及生长特性分析被引量：1: 2019年; 以0~#柴油为唯一碳源,从柴油污染土壤中分离、筛选出2株柴油降解菌(EGY和GY),通过形态、生理生化特征观察及16S rDNA序列分析鉴定菌株,利用单因素实验确定各菌株的最适培养条件,通过设计不同柴油浓度下柴油降解实验及土壤柴油降解实验分析EGY降解柴油的性能.结果表明:EGY为琼氏不动杆菌,GY为鞘脂菌属的一个新种;EGY的最适生长条件贴近油污污染的土壤环境,条件为温度25℃,pH 8.0,盐度1.5 g/L,柴油初始浓度1.5%(V_(柴油)/V_(培养基));EGY在不同柴油浓度的无机培养基中培养24 h后,在0.5%(V_(柴油)/V_(培养基))柴油浓度下具有最大降解率(41.67%±5.31%),但降解量最低;EGY在含1.0%(m_(柴油)/m_(土壤))柴油的土壤中培养10 d后,未调节盐度和调节至最适盐度的柴油降解率分别为57.80%和72.10%,而自然降解的降解率仅为15.30%.因此,EGY可作为高效的柴油降解菌修复柴油污染的土壤和水体.; 周宏飞陈玮杨鑫星辛德东巩菊芳孙梅好; 关键词：油污土壤柴油降解菌生物修复

嗜热芽孢杆菌丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达纯化及活性分析被引量：1: 2019年; 偶联法测定酶的活性是常用酶活测定方法之一。核苷二磷酸(NDP)是核苷三磷酸的β,γ高能磷酸键水解产物之一,丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)是用来测定NDP生成的常用偶联酶。为了分析嗜热菌苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus JH-7)(最适生长温度为50℃)的PK和LDH是否可以作为50℃条件下的偶联酶,研究从Aeribacillus pallidus JH-7基因组中克隆pk和ldh,连接到表达载体pET24a。结果表明,经诱导表达、纯化得到纯度达95%以上的Ap PK和Ap LDH。并利用分光光度法,分别对Ap LDH和Ap PK的动力学常数及催化效率进行了分析。结果表明,Ap PK对NDP的最适底物为ADP,催化效率为5×104 mol/(L·s),最适p H值为8.0,最适温度为45℃;NADH为Ap LDH的最适底物,催化效率为3.7×105 mol/(L·s),最适pH值为5.8,最适温度为35℃。虽然50℃不是Ap LDH和Ap PK的最适温度,但它们在此温度下的kcat分别为16.4,64.5 s-1,暗示它们可以作为此温度下的偶联酶。; 王文珍王慧慧陈美雯徐如飞蒋培蓉蒲首丞巩菊芳孙梅好; 关键词：嗜热菌丙酮酸激酶乳酸脱氢酶酶活性测定

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国家自然科学基金(30800019)