国家重点基础研究发展计划(2011CB944202)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 相关作者：张守全卫恒习李莉白银山陈志林更多>>
- 相关机构：华南农业大学河南牧业经济学院山西医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 猪精原干细胞体外培养条件的优化被引量：6
- 2013年
- 以出生后1～5 d的长白公猪为主要研究对象,采用两步酶消化法获取睾丸细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法对猪精原干细胞(PSSCs)进行纯化,以碱性磷酸酶(AP)染色鉴定;利用MTT法检测2种细胞因子——胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对PSSCs发育的影响.结果表明:用Percoll不连续密度梯度法获得的PSSCs占睾丸总细胞数的(8.19±0.83)%,AP染色的阳性率为(87.47±2.90)%,表明该方法可有效获取PSSCs;MTT法检测表明,20 ng.mL-1 GDNF+1 000 U.mL-1 LIF的组合添加对PSSCs体外增殖的效果最好.
- 师如意卫恒习李莉白银山张秀娟吴珍芳张守全
- 关键词：精原干细胞体外培养
- 公猪受精蛋白的研究进展及应用前景
- 2014年
- 受精蛋白是指参与受精过程的蛋白分子。在受精过程中,受精蛋白参与其中一系列生理生化反应。随着蛋白组学的发展和应用,公猪精液中受精蛋白含量被发现与公猪的受精能力相关。本文主要对公猪受精蛋白的一些研究进行介绍,阐述相关蛋白分子的功能作用以及与公猪受精能力的关系,并对其在提高公猪受精能力和育种水平上的应用前景提出展望。
- 陈志林吴同山陈预明卫恒习李莉张守全
- 关键词：公猪精液精蛋白受精过程生理生化反应受精能力蛋白分子
- 精子功能相关的蛋白质调控受精过程的研究进展被引量：7
- 2014年
- 哺乳动物的受精过程涉及到精子一系列的功能活动,如精子在雌性生殖道的运行、精子的超活化与获能、顶体反应以及精卵融合等。在精子经历的这一系列过程中,精子功能相关的蛋白质发挥着不可或缺的作用,这些蛋白分子的正常与否与雄性个体的繁殖力高低密切相关,因此精子功能相关的蛋白质能够作为评定哺乳动物精液受精能力的生物标记。文章主要对哺乳动物精子功能相关的蛋白质进行了综述,以阐述相关蛋白分子对精子运动活力、精子获能、顶体反应、透明带穿入和精卵融合等方面的重要作用以及这些蛋白分子在家畜遗传改良上的潜在应用。
- 陈志林冯美莹陈预明卫恒习李莉吴同山张守全
- 关键词：受精精子蛋白质生物标记繁殖力
- RFP转基因小鼠模型的建立
- 2017年
- 为了建立组织广泛表达红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)的转基因小鼠,为肿瘤和干细胞等研究提供动物模型,试验从pdsred-express2-n1载体上酶切后获得线性化的CMV-Dsred基因片段,将CMV-Dsred基因注入ICR小鼠受精卵雄原核内,获得的仔鼠利用活体荧光蛋白观察系统、PCR和Southern-blot的方法进行分子水平的检测,同时用后代小鼠的组织制作冰冻切片在荧光显微镜下观察。结果表明:荧光蛋白活体成像系统检测到组织广泛表达红色荧光蛋白的小鼠,阳性小鼠基因组中均检测到Dsred基因的整合,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠道、子宫、肌肉、脂肪和皮肤等组织器官中均检测到红色荧光蛋白。说明成功获得了组织广泛表达红色荧光蛋白转基因小鼠模型。
- 张景锋霍永卫恒习卫恒习李莉高凤磊
- 关键词：转基因小鼠模型
- 条件性去除生殖细胞转基因小鼠模型的效果评价
- 引言/目的目前生殖细胞减少、生殖器官的病变、坏死或其它损伤是导致生殖能力下降的主要原因。虽然利用iPS技术可能获得自身来源的生殖细胞,但是目前还没有理想的疾病模型用来研究和评价细胞移植的治疗效果。本团队前期利用Tet-o...
- 曹丁壬高凤磊张景峰卫恒习刘国乾白银山张守全
- 基于Tet-on系统的RFP基因表达载体构建及功能验证被引量：1
- 2017年
- 【目的】构建四环素诱导表达调控系统的表达载体,并对其功能进行验证。【方法】利用pTRE-tight和pdsred-Express2-N1构建带有红色荧光蛋白(red fluorescence protein,RFP)基因的载体pTRE-DSred,用其与另一载体pTet-on共转染293T细胞,并加入不同质量浓度(0,0.1,1,10μg/mL)的强力霉素(doxycycline,DOX)诱导,以未经质粒转染的293T细胞为对照组,在荧光显微镜下观察RFP基因的表达情况。【结果】成功构建了pTRE-DSred重组质粒,将其与pTet-on质粒共转染293T细胞,在细胞培养液中分别添加0.1,1,10μg/mL DOX,48h后均有红色荧光蛋白的表达,但10μg/mL DOX组红色荧光蛋白的表达水平明显低于前2个组;0μg/mL DOX诱导组中也有红色荧光蛋白表达,但水平极低;在未转染质粒对照组中未观察到红色荧光蛋白的表达。RT-PCR结果显示,pTREDsred和pTet-on共转染组均检测到RFP基因的转录。【结论】成功构建了Tet-on系统RFP基因表达载体,适宜质量浓度的DOX诱导有助于目的基因的高水平表达,但在不添加DOX诱导剂时,该Tet-on系统存在目的基因低渗漏表达现象。
- 张景锋朱宽佑徐秋良卫恒习李莉高凤磊张守全
- 关键词：强力霉素
- 高龄五指山小型猪近交系血液生化指标测定被引量：4
- 2013年
- 目的了解猪龄和性别对五指山小型猪(WZSP)近交系血液生化指标的影响。方法 WZSP近交系F17、F186月龄青年猪34头(7♂,27♀),5—6高龄猪21头(8♂,13♀),禁食12 h后经由前腔静脉采血,用全自动生化分析仪检测血液生化指标。结果青年猪和高龄猪有部分血液生化指标具有性别差异(P<0.05),其中青年猪有3项高龄猪有7项;青年猪和高龄猪有16项血清生化指标具有差异(P<0.05)。结论 WZSP近交系血液生化指标有着明显的年龄差异,这对选用高龄猪作为人类老年化动物模型提供了基础参考数据。
- 黄雷牟玉莲杨述林王辰程玉柱徐盼冯书堂
- 关键词：五指山小型猪生化指标
- 猪SDHD和DCN基因多态性及遗传印记
- 2011年
- 为揭示猪SDHD和DCN基因印记表达特征,该研究以长白、大白、蓝塘3个品种的166头纯种猪为试验材料,在猪的SDHD和DCN基因的外显子内寻找SNP,通过PCR-SSCP方法对SDHD和DCN基因多态性进行检测;分别选取SDHD基因外显子4和DCN基因外显子2的SNP为杂合子的仔猪3头,以其主要的组织器官mRNA的产物分别进行RT-PCR-RFLP电泳和RT-PCR-SSCP电泳.结果表明:SDHD基因外显子4中有1个单核苷酸多态性位点,即131位碱基由G突变为T,且该位点为MboI酶切位点;DCN基因外显子2中有1个单核苷酸多态性位点,即编码区30位碱基由T突变为A;SDHD基因外显子4和DCN基因外显子2在上述3头仔猪的胃、胸腺、胰、脾、肺、肌肉、肝、舌、肾、脑、膀胱、心脏等主要组织器官和胎盘同时表达父母双方来源的等位基因.可见,SDHD和DCN基因在猪呈父母双方表达的遗传特征.
- 李莉贾同吴同山张豪张守全
- 关键词：SNP遗传印记
- MicroRNA对胚胎干细胞的多能性网络调控被引量：2
- 2013年
- 胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)是一类能够无限增殖和诱导分化为多种类型细胞的干细胞。MicroRNA(miRNA)是一类内源性具有调控基因表达功能的非编码RNA,在ESCs增殖和分化过程中起重要作用。MiRNA可以通过对ESCs多能性网络中的转录因子、细胞周期、表观遗传学、信号转导等方面调控,促使ESCs维持多能性状态。文章重点综述了miRNA的生成过程、调控ESCs多能性的主要miRNA家族以及miRNA对ESCs多能性网络调控作用等内容。
- 白银山李莉卫恒习朱翠张守全
- 关键词：ESCSMIRNA多能性
- 猪生殖细胞特异性基因Sohlh1及启动子的研究
- 2016年
- 【目的】探究猪生殖细胞特异性基因在幼年和成年各组织中的表达情况,分子遗传进化特点,及其启动子的核心区域和特异性调控区间.【方法】通过RT-PCR验证猪不同时期不同组织基因的表达情况,通过生物软件分析其分子遗传进化特点,构建启动子验证载体,通过双荧光素酶分析基因启动子的核心区域和特异性调控区间.【结果】基因在仔猪与成年猪睾丸和仔猪卵巢中都有表达,在成年猪卵巢不表达;通过多个物种进化分析基因随着脊椎动物从低等到高等的演变也在进化;通过双荧光素酶分析构建的启动子验证载体,猪Sohlh1基因的启动子的核心区域在78bp附近,特异性调控区间在771-2981bp之间.【结论】基于基因的进化分析,作为试验动物模型,猪可能更优于啮齿类动物,其组织特异性表达可能主要通过其启动子特异性调控区间调控.
- 刘凯刘国乾曹亚鸽卫恒习李莉张守全
- 关键词：启动子遗传进化
